細(xì)胞培養(yǎng)實驗指導(dǎo)大全(參考版)
2025-08-08 16:30本頁面
【正文】 Wenzhou Medical College 歡迎大家來中心！ 謝 謝！ 。 1室溫下晾干，用中性樹膠封片。 雙蒸水漂洗 1min，然后將細(xì)胞爬片經(jīng) 70%、 80%、 95%、 100%、 100%乙醇 各 1～ 2min 梯度脫水。 雙蒸水漂洗后，滴加 %HCl70%Ethanol，作用 1min 以分色。新鮮配制 DAB 顯色液，滴加后作用 3～5min，置于顯微鏡下觀察染色結(jié)果。滴加山羊抗鼠的 IgG 抗體 HRP多聚體， 37℃ 孵育 30min。陰性對照片此步用PBS 替代一抗。 PBS 洗 5min。（若是要檢測的抗原表達(dá)于胞漿，此步可考慮省略） 吸除 % Triton X100，加3%H2O2 孵育 10min。 取出蓋玻片時注意蓋玻片的正反面（有細(xì)胞的為正面）。 吸除固定液，加 PBS 再洗滌細(xì)胞爬片 2 次，每次 1 min。 傾去培養(yǎng)液，加 PBS（ PH ～ ）洗 滌細(xì)胞爬片 2 次，每次 1 min。 4小時后將培養(yǎng)液加量至覆蓋整個培養(yǎng)皿的 底面。 再在每片蓋玻片上滴加培養(yǎng)液至剛好覆蓋 滿蓋玻片。 注意： MTT法只能測定細(xì)胞相對數(shù)和相對活力，不能測定細(xì)胞絕對數(shù)。 2.、 B+相板：將衍射光推遲 1/4λ，兩組光線合軸后光波相減，振幅變小，形成暗反差（或稱正反差），結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗。 相位板（ annular phaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。 光線透過標(biāo)本后發(fā)生折射，偏離了原來的光路，同時被延遲了 1/4λ（波長），如果再增加或減少 1/4λ，則光程差變?yōu)?1/2λ，兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減小，提高反差。 三、倒置相差顯微鏡 可以觀察未經(jīng)染色的標(biāo)本和活細(xì)胞。 普通光線的波長為 400~700nm，因此顯微鏡分辨力數(shù)值不會小于 ，人眼的分辨力是 ，所以一般顯微鏡設(shè)計的最大放大倍數(shù)通常為 1000X 。 及時關(guān)閉空氣循環(huán)器 及時關(guān)閉空調(diào) 光學(xué)顯微鏡的使用 李 東 生物學(xué)實驗教學(xué)中心 — 、普通光學(xué)顯微鏡 顯微鏡的構(gòu)造主要分為三部分：機械部分、照明部分和光學(xué)部分 — 、普通光學(xué)顯微鏡 顯微鏡清晰度決定于放大倍數(shù)和顯微鏡的分辨力，分辨力是指顯微鏡（或人的眼睛距目標(biāo) 25cm處）能分辨物體最小間隔的能力，分辨力的大小決定于光的波長和鏡口率以及介質(zhì)的折射率，用公式表示為： R= / ， ＝ｎ sinα/2 介質(zhì)的折射率 :空氣 (1)水 ()香柏油 () 光學(xué)鏡頭所用的玻璃折射率為 ~，所用介質(zhì)的折射率越接近玻
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