動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)小鼠脾臟細(xì)胞docxdocx(參考版)
2025-07-20 18:07本頁面
【正文】 妥善包裝、運(yùn)輸。① 選生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，待接近或剛剛連接成片后，去掉培養(yǎng)液，充滿新培養(yǎng)液，液量要達(dá)到培養(yǎng)瓶頸部，擰緊螺帽或塞以膠塞，保留微量空氣。另一種為充液法，比較簡(jiǎn)便易行。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷當(dāng)前培養(yǎng)細(xì)胞既在國內(nèi)進(jìn)行寄贈(zèng)、交換和購買，也在國際交流，為此要有裝運(yùn)細(xì)胞的方法。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。若細(xì)胞密度較高，及時(shí)傳代。（2）迅速放入38℃水浴中，并不時(shí)搖動(dòng)，在1分鐘內(nèi)使其完全融化，然后在無菌下取出細(xì)胞。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。2細(xì)胞的復(fù)蘇采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入4℃冰箱中2～3小時(shí)，再移至冰箱冷凍室內(nèi)3～4小時(shí)（此步可省略），再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放2小時(shí)，最后沉入液氮中。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期，同時(shí)作好登記（日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù)）。（2）去上清液，加入含20%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于4℃預(yù)冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為3106～1107/mL之間。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。慢速冷凍方法又可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少胞內(nèi)形成冰結(jié)晶的機(jī)會(huì)，從而減少冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷主要操作步驟為：（1）選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，在凍存前一天最好換液。因此，細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能地減少細(xì)胞內(nèi)水分，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。胞膜上的類脂蛋白復(fù)合體也易破壞引起細(xì)胞膜通透性的改變，使細(xì)胞內(nèi)容物丟失。細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下直接冷凍，細(xì)胞內(nèi)外的水分會(huì)很快形成冰晶，從而引起一系列不良反應(yīng)。1細(xì)胞的凍存SD表示，多個(gè)均數(shù)的兩兩比較采用《中國醫(yī)學(xué)百科全書根據(jù)所測(cè)數(shù)據(jù)計(jì)算細(xì)胞凋亡率和繼發(fā)性壞死率。Annexin VFITC/PI雙參數(shù)進(jìn)行調(diào)試，以此條件進(jìn)行細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死率檢測(cè)。置于5％ CO2孵箱培養(yǎng)。 誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡 Jurkat細(xì)胞在5% CO2孵箱培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，鏡下計(jì)數(shù)為1106/ml，加入24孔板，每孔1 ml細(xì)胞懸液。材料和方法 材料 Jurkat細(xì)胞系由本實(shí)驗(yàn)室保存。國內(nèi)在上個(gè)世紀(jì)90年代上市的抗癌藥物中化學(xué)合成藥米托蒽醌、羥基脲和順鉑等少數(shù)幾種抗癌藥物，通過與DNA分子結(jié)合抑制核酸合成引起細(xì)胞死亡，這類藥物稱之為細(xì)胞周期非特異性藥物。一個(gè)難題,因此尚需要科研工作者不斷地努力來發(fā)現(xiàn)和設(shè)計(jì)出更加有效低毒、高選擇性的抗腫瘤藥物。腫瘤藥物已經(jīng)開始采用較原來更加理想的藥物篩選系統(tǒng),而且針對(duì)作用機(jī)制的藥物篩選和藥物設(shè)計(jì)在一定程度上得到了發(fā)展。隨著分子生物學(xué)和分子腫瘤學(xué)的發(fā)展,人們對(duì)腫瘤細(xì)胞惡化過程中許多新靶點(diǎn)有了進(jìn)一步的了解,并且針對(duì)這些靶點(diǎn)研究和開發(fā)了許多新的天然抗腫瘤藥物。（9）結(jié)束語,同時(shí)又檢測(cè)到IFN2γ和TNF2α水平升高。6%人淋巴瘤U937細(xì)胞和49.mL的濃度下對(duì)體外肺癌細(xì)胞具有一定的誘導(dǎo)作用。而陽性對(duì)照組癌細(xì)胞除破碎壞死外,仍顯示較高的惡性行為。不良反應(yīng)。惡性腫瘤細(xì)胞在形態(tài)、功能等方面都類似于未分化的胚胎細(xì)胞。（10）天然藥物誘導(dǎo)細(xì)胞分化的篩選還能使細(xì)胞周期蛋白CyclinB1的mRNA表達(dá)增加。A,因此蟾酥靈能有效誘導(dǎo)白血病K562細(xì)胞調(diào)亡。研究發(fā)現(xiàn),許多抗腫瘤藥物均通過抑制腫瘤細(xì)胞bp的倍增片段,最后形成調(diào)亡小體。death)rogrammedtosis)是基因調(diào)控下的細(xì)胞主動(dòng)死亡,這一過程又稱程序化細(xì)胞死亡(mL薏苡仁注射液處理后,極少有新生血管生成,血管生長(zhǎng)也很快進(jìn)入衰退期。姜曉玲等通過比較實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),潘子民等發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg3經(jīng)處理后,荷瘤SCD小鼠無腹腔積液形成,腹腔中腫塊散播較少。目前已發(fā)現(xiàn)有許多天然藥物及其有效成分可以通過多種途徑來抑制腫瘤新生血管的生成。在其生成過程中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)以及酪氨酸激酶受體(VEGFR)具有等在觀察中藥白龍片對(duì)人胃癌MGC8023細(xì)胞不同周期時(shí)相癌基因c2H2ras、c2myc和抑癌基因Rb、P5P21表達(dá)的影響時(shí),發(fā)現(xiàn)PKC2α基因表達(dá)抑制與c2H2ras、c2myc的表達(dá)抑制相似,表buckwheat)提取物中一種類似于金絲桃蒽酮的物質(zhì)能夠抑制各種蛋白激酶的活性,抑制內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和Ins的受體酪氨酸激酶和蘇氨酸激酶的活性。目前,藥物干預(yù)腫瘤細(xì)胞信號(hào)通路主要是通過環(huán)腺嘌呤核苷酸2蛋白激酶A通路、酶聯(lián)受體信號(hào)通路、磷脂酰肌醇正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞在多種信號(hào)傳導(dǎo)通路的關(guān)鍵組分間存在巨大用和isolaulimalide。sp.rimosa和Hyat,年MOOBERRY等從海綿Cacospongiamycof進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)discodermolide和紫杉醇聯(lián)合作用具有明顯的協(xié)同作用。dissoluta中分離得到的多羥基內(nèi)酯化合物)分別作用A549肺癌細(xì)胞,結(jié)果顯示它們均能迅速導(dǎo)致有絲分裂的異常。KLEIN等用紫杉醇和discodermolide此,微管已成為腫瘤的臨床治療的有效靶點(diǎn)。無論是促進(jìn)微管蛋白聚合、穩(wěn)定已形成的微管類藥物,還是以抑制微管蛋白聚合類藥物都通過影響腫瘤細(xì)胞的有絲分裂過程,使其生長(zhǎng)受到抑制。微管參與許多細(xì)胞功能,包括維持細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸、鞭毛和纖毛的運(yùn)這些現(xiàn)象揭示拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ是鴉膽結(jié)果顯示,紫草素可顯著抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ的解螺旋活性,并且能夠抑制人白血病K562細(xì)胞的增殖。這些藥物可通過DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ、Ⅱ引起DNA雙螺旋to
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