sdspage凝膠電泳(1)(參考版)
2025-05-10 18:13本頁面
【正文】 混合樣品 帶孔膠 按分子大小分離 電泳方向 電泳 小分子 大分子 電泳后的凝膠經考馬斯亮藍染色、脫色后的凝膠照片 夾在兩塊玻璃板之間的凝膠 電泳緩沖液 電泳緩沖液 加在槽中的經SDS處理的樣品 分子量小 分子量大 電源 Thanks For Your Attention! 。 垂直板電泳裝置 加樣 樣品遷移方向 水平式電泳裝置 電泳緩沖液 凝膠 電泳過程中分子遷移的規(guī)律，小分子走在前頭，大分子滯后。蛋白質與考馬斯亮藍 G250結合在2min左右的時間內達到平衡，完成反應十分迅速；其結合物在室溫下 1h內保持穩(wěn)定。 考馬斯亮藍 考馬斯亮藍 考馬斯亮藍最大光吸收在 488nm；當它與蛋白質結合后變?yōu)?青色 ，蛋白質 色素結合物在 595nm波長下有最大光吸收。冰醋酸對材料有膨脹作用，對核蛋白固定好，可與水、酒精、氯仿混合。 冰醋酸 ： 純醋酸在溫度稍變低時即形成冰晶，所以又稱為冰醋酸?？梢怨潭ò椎鞍住⑶虻鞍?、核蛋白，但對核蛋白固定效果較差 (親和力小且易自溶 )。 Carnoy固定液（甲醇 :冰乙酸 =3:l） 每次使用前需臨時配制 ，長時間放置影響固定效果，固定時間 15min至 24 h，冰箱、室溫均可。 指示劑檢測電泳的行進過程，一般加入泳動速率較快的溴酚藍指示電泳的前沿 。 增加樣品密度以保證蛋白質沉入加樣孔內，一般上樣緩沖液中加入一定濃度的 甘油或蔗糖 ，這樣可以增加樣品的比重。 3. 冷卻到室溫后離心數秒鐘，混均后再離30 s，取上清直接上樣到 SDSPAGE膠加樣孔內即可。 上樣緩沖液之二 ?注意事項 分為還原型和非還原型兩種，還原型上樣緩沖液中含一定量的 DTT或巰基乙醇，有輕微刺激性氣味，較易區(qū)分； 含巰基的試劑有一定的毒性，為了您的安全和健康，請穿 實驗服并戴一次性手套操作 上樣緩沖液之三 使用說明 4 μl蛋白樣品加入 1μl蛋白上樣緩沖液的比例，混合蛋白樣品和蛋白上樣緩沖液(5 )。 上樣緩沖液之一 蛋白上樣緩沖液 (SDSPAGE loading buffer)是一種以 溴酚藍 為染料， 5倍濃縮的 SDSPAGE凝膠電泳上樣
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