核酸的凝膠電泳(參考版)
2024-08-12 15:04本頁(yè)面
【正文】 較高的溫度 DNA泳動(dòng)較快；但是較高的溫度也引起較小片段的泳動(dòng)截留和明顯的條帶變寬。 3 電場(chǎng)夾角： 電場(chǎng)方向的夾角常為 1100 1200，研究證實(shí) 900夾角也非常有效的。 B+ A +A B 脈沖電場(chǎng)電泳示意圖 （二） PEGE類型 ? 垂直脈沖場(chǎng)電泳系統(tǒng) (vertical pulsed field) ? 場(chǎng)翻轉(zhuǎn)系統(tǒng) (field inversion) ? 旋轉(zhuǎn)膠系統(tǒng) (rotating gel) ? 箝位勻強(qiáng)電場(chǎng)系統(tǒng) (contourclamped homogeneous electric field) A +A B +B 垂直交變電場(chǎng)系統(tǒng) 場(chǎng)翻轉(zhuǎn)系統(tǒng) 箝位勻強(qiáng)電場(chǎng)系統(tǒng) 旋轉(zhuǎn)膠系統(tǒng) A +A B +B A +A B +B + （三） 影響分辨率的因素 1 脈沖時(shí)間 （ )： 增加脈沖時(shí)間分離較大分子，減少脈沖時(shí)間分離較小分子。 該法可分離長(zhǎng)至 5Mb的 DNA分子。 （一） PFGE 工作的基本原理 這種電泳是在兩個(gè)不同方向的電場(chǎng)周期性交替進(jìn)行的。大于該極限長(zhǎng)度（ 40kb）后 DNA的遷移速率幾乎與分子大小無(wú)關(guān)，而主要決定于電場(chǎng)強(qiáng)度。 （三） DNA在聚丙烯胺凝膠中的有效分離范圍 丙烯酰胺濃度（ %） 有效分離范圍（ bp） 二甲苯氰 FF 溴酚藍(lán) 1000~2022 460 100 80~500 260 65 60~400 160 45 40~200 70 20 25~150 60 15 6~100 45 12 注 :N,N`亞甲雙丙烯酰胺的濃度為丙烯酰胺的 1/30。 注：遷移率受其堿基組成和序列的影響。 用途：放射性 DNA探針的分離、
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