微生物的誘變育種ppt課件(參考版)
2025-05-06 23:19本頁面
【正文】 ? 2. 抗性菌株的產(chǎn)量性能 抗性菌株的特性研究 ? 1. 菌種 ? 金霉素鏈霉素 849號(hào)菌株 ? 2. 培養(yǎng)基成分 ? 3. 噬菌體的分離純化和原液制備 ? 4. 噬菌體菌株的選育 ? 5. 菌株抗噬菌體性能的檢驗(yàn) ? 6. 搖瓶發(fā)酵試驗(yàn) ? 7. 發(fā)酵罐發(fā)酵試驗(yàn) 抗噬菌體菌株選育實(shí)例 小 結(jié) ?試驗(yàn)設(shè)計(jì)和準(zhǔn)備工作：了解出發(fā)菌株 ?誘變育種的步驟與方法：出發(fā)菌株 誘變劑及誘變劑量 誘變劑的處理方式 ?突變株的分離與篩選：分離和篩選 搖瓶液體培養(yǎng) 產(chǎn)物活性測(cè)定 數(shù)據(jù)調(diào)整與分析 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的調(diào)整 ?營養(yǎng)缺陷型菌株的篩選 ?溫敏突變株的篩選 ?抗噬菌體菌株的選育 。 溫和噬菌體及溶源菌 ? 1. 專一性噬菌體獲得和純化：選擇因子 ? 2. 高效價(jià)噬菌體原液的制備 ? 3. 噬菌體原液效價(jià)測(cè)定：重層瓊脂法 ? 4. 菌株誘發(fā)突變和分離 ? 5. 液體搖瓶振蕩培養(yǎng) ? 6. 進(jìn)一步考查抗性菌株對(duì)周圍環(huán)境中存在的各種噬菌體的抗性 抗噬菌體菌株的選育 ? 1. 抗性菌株穩(wěn)定性試驗(yàn) ? 菌株抗性產(chǎn)生的原因： ? 基因突變引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變，使噬菌體難以吸附和入侵； ? 細(xì)胞生理代謝的改變，即使噬菌體入侵，也不能在細(xì)胞內(nèi)繁殖。 溫和噬菌體及溶源菌 ? 3. 溶源菌的顯著特性： ? (1) 自發(fā)裂解：頻率較低 10－ 1～ 10－ 4。 2. 分離和效價(jià)測(cè)定方法 ? (1) 重層瓊脂法 ? (2) 單層平板法 ? (3) 快速測(cè)定法 ? (4) 斑點(diǎn)試驗(yàn)法 烈性噬菌體及其效價(jià)的測(cè)定 ： 侵入宿主后，噬菌體 DNA只整合在宿主的染色體組上，并長(zhǎng)期隨宿主 DNA的復(fù)制而復(fù)制，在一般情況下不進(jìn)行增殖和引起宿主細(xì)胞裂解。 ? 2. 特殊分離篩選方法 ? 例：由甲醇和甘氨酸合成高產(chǎn)絲氨酸菌株的篩選： ? 首先篩選絲氨酸降解代謝障礙的 TS突變株 ? 然后排除 C4二羧酸分解代謝障礙的 TS突變株 溫敏突變株的篩選方法 1. 溫敏突變株在谷氨酸發(fā)酵中的應(yīng)用 溫敏突變株在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用 ?2. 溫敏突變株在絲氨酸發(fā)酵中的應(yīng)用 溫敏突變株在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用 ? 3. 微生物單細(xì)胞蛋白的生產(chǎn) ? 優(yōu)良菌種篩選的要求： ? 富含蛋白質(zhì)； ? 生長(zhǎng)迅速，底物利用率高； ? 菌體細(xì)胞壁易破碎，容易自溶； ? 細(xì)胞蛋白質(zhì)中的蛋氨酸含量高，提高單細(xì)胞蛋白質(zhì)的營養(yǎng)價(jià)值 溫敏突變株在發(fā)酵工業(yè)中的應(yīng)用 第六節(jié) 抗噬菌體菌株的選育 ?噬菌體是寄生于微生物細(xì)胞內(nèi)的一種病毒，其繁殖過程可分為：對(duì)寄主的吸附、侵入、增殖、成熟和裂解五個(gè)階段。 2. 富集 ? 1. 抗生素法 ? 2. 過濾或離心法 ? 3. H3－前體法 溫敏突變株的篩選方法 3. 分離篩選 ? 1. 常規(guī)法 ? 非必需基因突變溫敏株：非許可溫度， MM中不長(zhǎng)，CM中生長(zhǎng)。 ? 3. TS突變株由許可溫度轉(zhuǎn)入非許可溫度培養(yǎng)時(shí)，并不會(huì)立即停止生長(zhǎng)繁殖，這是工業(yè)發(fā)酵所利用的重要生理生化特性。 ? 2. TS突變株的形成原因： ? 主要由必需基因突變所導(dǎo)致的基因產(chǎn)物 (如酶 )的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變而引起的，即酶蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，而酶的活性中心并未發(fā)生變化。 ? (2) 作為生產(chǎn)菌種雜交、重組育種時(shí)的遺傳標(biāo) 2. 基礎(chǔ)理論研究中的應(yīng)用 ? (1) 闡明微生物代謝途徑 ? (2) 在遺傳規(guī)律中的轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、原生質(zhì)體融合、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子等研究中，營養(yǎng)缺陷型是最常用的標(biāo)記菌種。 ? ②生長(zhǎng)譜法：在同一平皿上測(cè)定許多種生長(zhǎng)因子的需求情況。 ? 補(bǔ)充培養(yǎng)：采用含某種單一氨基酸、維生素或堿基的基本培養(yǎng)基，用于定向篩選某種特定的缺陷型菌株。 ? 篩選營養(yǎng)缺陷株時(shí)，與之有關(guān)的培養(yǎng)基有三類： ? 1. 基本培養(yǎng)基 (minimal medium, MM) ? 2. 完全培養(yǎng)基 (plete medium, CM) ? 3. 補(bǔ)充培養(yǎng)基 (supplemental medium, SM) ? : 亞硝基，亞硝酸，紫外線 ? ? (1) 抗生素法 (以青霉素為例 ) ? (2) 菌絲過濾法 ? (3) 高溫殺菌法 誘變處理后的菌體采用 CM培養(yǎng) 2～ 3代 菌體離心 、洗滌，轉(zhuǎn)移至MM中進(jìn)行饑餓培養(yǎng) 4～ 6h 再轉(zhuǎn)移至含無機(jī)氮的培養(yǎng)基中 3～4h，使野生型細(xì)胞剛剛進(jìn)入對(duì)數(shù)期，加入青霉素培養(yǎng)數(shù)小時(shí)，分
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