微生物的誘變育種ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 ? (2) 誘導(dǎo) ? (3) 復(fù)愈 ? (4) 免疫性 ? (5) 溶源轉(zhuǎn)變 ? 4. 溶源菌的檢驗(yàn)方法 ? 將少量溶源菌與大量敏感性指示菌混合后鋪平板培養(yǎng)，可能產(chǎn)生中央有溶源菌的小菌落、四周有透明圈的特殊噬菌斑。 溫敏突變株的特性 ? 由于此類(lèi)突變株主要由基因錯(cuò)義突變所致，所以使用誘變劑時(shí)，要選擇易于引起堿基臵換的亞硝基類(lèi)、磺酸酯類(lèi)化合物，或亞硝酸、紫外線等誘變劑。 (3) 夾層法 營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的分離和篩選 3. 營(yíng)養(yǎng)缺陷型的分離檢出 主要篩選方法歸納示意圖 營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的分離和篩選 ? 4. 營(yíng)養(yǎng)缺陷型的鑒定 ? (1) 鑒定方法 ? ① 一個(gè)平皿中加入一種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以測(cè)定生長(zhǎng)因子需求情況。 (3) 4541野生菌對(duì)紫外線＋氯化鋰具有高度敏感性，連續(xù)處理 13代后形態(tài)特征發(fā)生明顯變化，獲得了白色孢子變株，單位產(chǎn)量也不斷遞增。 ? 同工酶：同一種屬中，由不同基因位點(diǎn)或等位基因編碼的多肽鏈單體、純聚體或雜聚體，其分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)和生理功能不同，而催化功能相同的多種形式的酶類(lèi)。然后綜合菌落的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征及生化特征作為初篩時(shí)挑選菌落的依據(jù)。 2. 平板菌落預(yù)篩 ? 根據(jù)特定代謝產(chǎn)物的特異性，利用瓊脂平板進(jìn)行篩選和活性粗測(cè)的方法，大幅度擴(kuò)大有效篩選量，提高篩選工作效率。 (1) 使所希望得到的突變株在存活群體中占有最大的比例。 ? 對(duì)于絲狀菌來(lái)說(shuō)，制備菌懸液時(shí)力求 90％以上為單孢子，并務(wù)必除去菌絲片段，因?yàn)橐话憔z是多核的。 誘變前對(duì)出發(fā)菌株的了解 ? 1. 多方面考查菌種的生活史，了解它們的形態(tài)、生理、生化等生物學(xué)特性，以及這些特性與代謝產(chǎn)物合成的關(guān)系。 目標(biāo)： 提高有效產(chǎn)物的產(chǎn)量 改善菌種特性、提高產(chǎn)品質(zhì)量 簡(jiǎn)化工藝條件 開(kāi)發(fā)新品種 誘變育種的目標(biāo)及用途 誘變育種的目標(biāo)及用途 青酶素產(chǎn)生菌選育歷史 第一節(jié) 誘變育種的試驗(yàn)設(shè)計(jì)和準(zhǔn)備工作 微生物 正變株 誘變育種 高產(chǎn)菌株的缺陷： (1)孢子數(shù)量減少 (2)生活周期延長(zhǎng) (3)可能發(fā)生回復(fù)突變 負(fù)變株 發(fā)生概率大 誘變的不可預(yù)測(cè)性 ? 高產(chǎn)突變型菌株是一種數(shù)量性狀的遺傳變異，是由多基因決定的： ? 1. 這些基因不可能通過(guò)一次誘變?nèi)恳鹜蛔? ? 2. 高產(chǎn)菌株產(chǎn)量的提高，是多代誘發(fā)突變積累的結(jié)果。 誘變育種的注意事項(xiàng) ? 誘變育種工作的三個(gè)主要環(huán)節(jié)： ? 1. 誘發(fā)突變 ? 出發(fā)菌株、誘變劑及其劑量的選擇、影響誘變效果的因素等 ? 2. 突變株的篩選 ? 篩選條件 (培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件 )、便捷的篩選方法等 ? 3. 最佳環(huán)境條件的調(diào)整 ? 突變株最佳培養(yǎng)條件的確定 誘變育種的主要環(huán)節(jié) 1. 區(qū)分不同菌落類(lèi)型 誘變前對(duì)出發(fā)菌株的了解 ? 2. 出現(xiàn)不同菌落類(lèi)型的原因 ? 主要原因：遺傳因素 ? 由遺傳因素造成的不同類(lèi)型菌落是一種變異現(xiàn)象，屬不同遺傳特性的個(gè)體，而且可以遺傳給下一代。 ? 常用的純化方法有劃線分離法和稀釋分離法；若仍達(dá)不到要求，則需采用顯微鏡操縱器分離單孢子，培養(yǎng)形成單菌落，得到純菌株。 ? 三種方法： ? 菌絲尖端法 ? 處理單菌落周?chē)舛司z ? 混合處理法 成熟而新鮮的孢子 液體培養(yǎng)基 振蕩培養(yǎng)至孢子剛剛萌發(fā) 振蕩打碎孢子團(tuán)塊 離心洗滌 菌體計(jì)數(shù)，調(diào)整濃度 過(guò)濾 加入緩沖液 單孢子 (或單細(xì)胞 )懸液的制備 2. 菌懸液制備方法 1. 誘變劑種類(lèi)的選擇 ? (1) 選擇誘變劑 ? (2) 根據(jù)菌種特性和遺傳穩(wěn)定性來(lái)選擇誘變劑 遺傳穩(wěn)定的 :先強(qiáng)后弱 。 ? 復(fù)篩：以質(zhì)和精為主，反復(fù)多次，結(jié)合自然分離，選育高產(chǎn)或其他優(yōu)良菌株。 搖瓶液體培養(yǎng) ? 1. 瓊脂平板活性圈法 ? 2. 紙片法 :發(fā)酵液濃度高時(shí) ? 3. 瓊脂薄層紙片法 ? 4. 自動(dòng)生化儀器分析法 產(chǎn)物活性測(cè)定 透明圈 變色圈 生長(zhǎng)圈 抑菌圈 (水解酶、有機(jī)酸） （產(chǎn)酸菌） （工具菌 +待檢菌） （抗生素） ? 菌株產(chǎn)量的檢測(cè)的兩種誤差： A）搖瓶培養(yǎng)條件變化影響遺傳特性的表達(dá)； B）檢測(cè)過(guò)程中的誤差。 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的調(diào)整 2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法步驟 A. 極差分析 (1) 統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果 (2) 計(jì)算 K、 R值 (3) 因素與試驗(yàn)結(jié)果的關(guān)系圖 Na》 大米粉 》 KCl (4) 比較各因素的作用 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的調(diào)整 B. 方差分析 為了判斷實(shí)驗(yàn)因素之間的差異是來(lái)自于隨機(jī)誤差還是來(lái)自于其本質(zhì)的差異，可以通過(guò)計(jì)算方差，得出 F比值。 誘變育種實(shí)例 2. 灰黃霉素耐前體變株 D75
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