【正文】 (三 )、保藏機(jī)構(gòu) 國(guó)內(nèi)：中國(guó)微生物菌種保藏委員會(huì)（ CCCCM） 中國(guó)培養(yǎng)物保藏中心（ CCTCC） 國(guó)外：美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（ ATCC） 荷蘭霉菌中心保藏所（ CBS） 英國(guó)國(guó)家典型菌種保藏所（ NCTC） 日本大板發(fā)酵研究所（ IFO） 。 冷凍干燥保藏法 ● 方法 ：將用滅菌牛奶做成的高濃度的菌液裝入滅菌的安瓿瓶中，放在低溫條件下抽氣干燥，使其中的水分因升華作用逸出，而形成完全干燥的菌塊，然后將安瓿瓶在真空條件下融封。土壤法不洗，風(fēng)干后粉碎過(guò) 24目篩滅菌。裝入小試管、加塞滅菌后，滴入幾滴菌種 (或孢子 )懸液，用接種針攪勻。適用于所有菌種。 液體石蠟法 ● 方法 ： 將無(wú)菌石蠟油加入到上述保藏的菌種中，使菌種與空氣隔絕。 (二 )、保藏方法 斜面培養(yǎng) 定期移植保藏法 液體培養(yǎng) 穿刺培養(yǎng) 特點(diǎn) ：此法一般可保藏 3~6個(gè)月左右。 (二 )、衰退的表現(xiàn) 菌落和細(xì)胞形態(tài)改變 生產(chǎn)性能的下降 對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境的適應(yīng)能力減弱 (三 )、菌種退化的原因 1．有關(guān)基因的自發(fā)突變 2．育種后未經(jīng)很好的分離純化及染雜菌 3．培養(yǎng)基成分的變化及培養(yǎng)條件的改變 保藏條件的變化 (四 )、退化的防治 控制傳代次數(shù) 創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件 選擇優(yōu)良的菌株或孢子保藏及傳代 采用有效的保藏方法 (包括保藏方式及保藏培養(yǎng)基 ) 經(jīng)常進(jìn)行分離純化 二、菌種的復(fù)壯 菌落純：酵母、細(xì)菌 純種分離法 細(xì)胞純：所有菌，如霉菌可進(jìn)行菌絲尖端分離 通過(guò)宿主體復(fù)壯 ：用于病毒 淘汰已衰退的個(gè)體 利用生產(chǎn)菌株的遺傳標(biāo)記 三、菌種的保藏 (一 )、目的及原理 ● 目的：不死、不衰、純粹及便于交換使用。 (二 )、有性雜交方法 甲乙親本菌株 產(chǎn)子囊孢子 離心 (雙倍體 ) (單倍體 ) 涂平板 接產(chǎn)孢子培養(yǎng)基 洗下并破壁 雜交得雙倍體雜種 鑒別并選良種 二、準(zhǔn)性雜交 (一 )、定義 ● 準(zhǔn)性生殖 ： 在同種不同菌株的體細(xì)胞間發(fā)生的融合，它可借減數(shù)分裂而導(dǎo)致低頻率基因重組并產(chǎn)生重組子。 ● 有性雜交：指不同遺傳型的兩性細(xì)胞間發(fā)生的接合和隨之進(jìn)行的染色體重組，繼而產(chǎn)生新遺傳型后代的一種育種技術(shù)。 ● 初生與次生 F/ 菌株 ● 細(xì)菌染色體繪圖原理 四種接合型菌株的關(guān)系 四、原生質(zhì)體融合 定義： 通過(guò)人為的方法，使遺傳性狀不同的兩個(gè)細(xì)胞的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，借以獲得兼有雙親遺傳性狀的穩(wěn)定重組子的過(guò)程。 ● 可與之接合菌株 ： F+菌株 F 雄性菌株 Hfr菌株 ● 定義 ： F質(zhì)粒從游離態(tài)轉(zhuǎn)變成核染色體組特定位點(diǎn)上的整合態(tài)的菌株。 放線菌 ：鏈霉菌屬、諾卡氏菌屬 (三 )、 F+菌株 ● 定義 ：指細(xì)胞內(nèi)存在一至幾個(gè) F質(zhì)粒，并在細(xì)胞表面著生一至幾條性菌毛的菌株。 接合子 ：接合后獲得的具有新遺傳性狀的受體細(xì)胞。 過(guò)程： LFT裂解物 gal 高 感染 λ dgal λ 雙重溶源菌 Uv λ dgal +λ 等量 低 感染 gal gal+ gal 等量 (四 )、溶源轉(zhuǎn)變 溶源轉(zhuǎn)變 ：當(dāng)正常的溫和噬菌體感染其宿主而使其發(fā)生溶源化時(shí)，因噬菌體基因整合到宿主的核基因上，而使宿主獲得了除免疫性外的新遺傳性狀的現(xiàn)象。 低頻轉(zhuǎn)導(dǎo) 以低的 少量局限轉(zhuǎn)導(dǎo)子 合成生物 素基因 發(fā)酵半乳 糖基因 噬菌體基因 過(guò)程 高頻轉(zhuǎn)導(dǎo) 高頻轉(zhuǎn)導(dǎo) ：在局限轉(zhuǎn)導(dǎo)中，若對(duì)雙重溶源菌進(jìn)行誘導(dǎo)，會(huì)產(chǎn)生50%左右局限轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體的高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)裂解物，用此裂解物去轉(zhuǎn)導(dǎo)受體菌，可獲得 50%左右的轉(zhuǎn)導(dǎo)子，故名。 特點(diǎn) ： 1) 能轉(zhuǎn)導(dǎo)供體菌的個(gè)別特定基因（一般為噬菌體整合位點(diǎn)兩側(cè)的基因）； 2) 特定基因由部分缺陷的溫和噬菌體攜帶； 3) 缺陷噬菌體是由于其在形成過(guò)程中所發(fā)生的低頻率（可形成 105左右） “ 誤切 ” ，或由于雙重溶源菌的裂解而形成。 完全普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 過(guò)程 由 P22噬菌體引起的完全普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 感染復(fù)數(shù)小于 1 流產(chǎn)普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 定義 ：經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體的媒介而獲得了供體菌DNA片段的受體菌，如這段外源 DNA在其內(nèi)既 不進(jìn)行交換、整合和復(fù)制 ，也不迅速消失，而僅表現(xiàn)為 穩(wěn)定的轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯和性狀表達(dá) 。 轉(zhuǎn)導(dǎo)子 ：由轉(zhuǎn)導(dǎo)而獲得部分新性狀的重組細(xì)胞。 (二 )、轉(zhuǎn)化過(guò)程 轉(zhuǎn)化頻率： %~1%， 最高為 20%。 相關(guān)因素 ：菌種類、培養(yǎng)時(shí)間、特異蛋白 (DNA結(jié)合蛋白、胞壁自溶素、核酸酶 )。 G：細(xì)胞僅吸收 dsDNA，進(jìn)入后需酶解為 轉(zhuǎn)化因子進(jìn)入 ssDNA可整合 細(xì)胞方式 G+： 僅 ssDNA可進(jìn)入細(xì)胞。 轉(zhuǎn)化因子 ： 起轉(zhuǎn)化作用的 供體細(xì)胞 DNA片段 稱為轉(zhuǎn)化因子 。 在攪拌下 無(wú)可見(jiàn)光有紅光 突變株的篩選 (1)、產(chǎn)量突變株 的篩選 瓊脂塊培養(yǎng)法 (2)、抗藥性突變株的篩選 梯度平板法 (3)、 營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株的篩選 ● 概念： 基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、補(bǔ)充培養(yǎng)基 野生型、營(yíng)養(yǎng)缺陷型、原養(yǎng)型 ● 篩選步驟 誘變 淘汰野生型 檢出缺陷型 鑒定缺陷型 ● 篩選方法 ① 淘汰野生型： a 抗生素法 b 菌絲濃縮法 ② 檢出缺陷型 夾層培養(yǎng)法 一個(gè)平皿培養(yǎng) 方法 限量補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)法 逐個(gè)檢出法 兩個(gè)平皿培養(yǎng)