【正文】 誘變處理 平板涂布 初篩 復(fù)篩 傳代穩(wěn)定性實驗 放大試驗 致死率確定 性能精測 活菌計數(shù) 性能初測 活菌計數(shù) 性能測定 菌種保藏 并用于生產(chǎn) 出發(fā)菌株選擇 選擇依據(jù)： 1）選用來自于生產(chǎn)的自發(fā)突變菌株； 2）選有利于進一步研究的菌株； 3）選用幾次誘變處理均提高產(chǎn)量的菌株； 4）選用形態(tài)發(fā)生變異以后的菌株等 (二 )、誘變育種要點 孢子（或菌體）懸浮液的制備 (1)、 菌選用原則 a、 單核菌或孢子 酵母菌 :一般是單核的； 細菌 :球菌一般單核，桿菌大多數(shù)含有兩個核；霉菌： 菌絲細胞常是多核，黑曲霉、黃色青霉的分生孢子等也單核，鏈孢霉、米曲霉的孢子中平均有 5～ 6個核；放線菌 :菌絲細胞常是多核，分生孢子大部分單核。 (2)、 制備方法： 微生物細胞 液體中呈分散、懸浮狀態(tài) 通常采用： 用滅過菌的玻璃珠把成團的細胞打碎，再用滅過菌的脫脂棉進行過濾。分為物理誘變劑、 化學(xué)誘變劑和生物誘變劑 三大類。 化學(xué)誘變劑 ① 與一個或多個堿基起化學(xué)變化 → 堿基配對的轉(zhuǎn)換。如 5溴尿嘧啶 ③ DNA上減少或增加一、二個堿基，引起堿基突變點以后全部遺傳密碼轉(zhuǎn)錄和翻譯的錯誤，如吖啶類物質(zhì)。 艾姆氏實驗 (2)、誘變劑處理劑量的選擇 選擇依據(jù) ：以殺菌率為 70～ 90％的劑量為宜 (3)、誘變過程（ 以紫外線誘變?yōu)槔? 開燈預(yù)熱 20min（使光波穩(wěn)定） 加 5mL菌懸液于 φ 6cm 培養(yǎng)皿 距燈 30 cm處照射 無光下置 幾代時間 涂布培養(yǎng) 注意問題： a 波長： 257nm，紫外線燈的功率固定為 15 W，燈與處理物之間的距離一般為 30cm。 (4)、復(fù)合處理： 復(fù)合處理 ：為了獲得更好的誘變效果，有時可用兩種或兩種以上的誘變劑先后處理，或者同時使用，或者一種誘變劑重復(fù)使用。 轉(zhuǎn)化子 ：通過轉(zhuǎn)化方式而形成的雜種后代。 一般 15kb左右，即 15個基因。 感受態(tài) ：指受體細胞最易接受外源 DNA片段并能實現(xiàn)轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài)。 轉(zhuǎn)染 ：用提純的 病毒核酸 去感染其宿主細胞或原生質(zhì)體，可增殖出一群 正常病毒 的現(xiàn)象。 最低 DNA濃度： 1*105μ g/mL 抗鏈霉素基因 鏈霉素敏感基因 (三 )、轉(zhuǎn)化 m的種類 原核 m：肺炎鏈球菌 (G+) 嗜血桿菌屬 (G) 芽孢桿菌屬等 真核 m：釀酒酵母 黑曲霉 粗糙脈孢菌 二、轉(zhuǎn)導(dǎo) (一 )、概念及分類 轉(zhuǎn)導(dǎo) ： 通過完全缺陷或部分 缺陷噬菌體的媒介 ，將供體菌細胞的 小片段 DNA攜帶到受體細胞中，通過交換和整合，使受體細胞獲得供體部分遺傳性狀的現(xiàn)象。 完全普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 流產(chǎn)普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 分類 低頻轉(zhuǎn)導(dǎo) (104~106) 局限轉(zhuǎn)導(dǎo) 高頻轉(zhuǎn)導(dǎo) (50%) (二 )、普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)： 通過完全缺陷噬菌體對 供體任何 DNA片段的“誤包”而使受體菌遺傳性狀發(fā)生相應(yīng)改變的現(xiàn)象。 過程 (三 )、局限轉(zhuǎn)導(dǎo) 定義及特點 定義 ：部分缺陷的溫和噬菌體把供體菌的 少數(shù)特定基因 攜帶到受體中，并與后者的基因組 整合、重組 形成轉(zhuǎn)導(dǎo)子的現(xiàn)象。 4）該缺陷噬菌體需通過 Uv等因素對溶源菌誘導(dǎo)產(chǎn)生 低頻轉(zhuǎn)導(dǎo) ：通過一般溶源菌釋放的噬菌體所進行的轉(zhuǎn)導(dǎo)，因形成轉(zhuǎn)導(dǎo)子的頻率低 (104~106)而得名。 雙重溶源菌 ：指同時感染正常噬菌體和缺陷噬菌體的受體菌。 三、接合 (一 )、定義 接合 ： 供體菌（ “ 雄性 ” ）通過性菌毛與受體菌（ “ 雌性 ” ）直接接觸，把 F質(zhì)粒 或其攜帶的不同長度的 核基因組片段 傳遞給后者，使后者獲得若干新遺傳的現(xiàn)象 。 (二 )、可接合的 m種類 細菌 ： 、克雷伯氏菌屬、沙雷氏菌屬、固氮菌屬等。 ● 與 F菌株 的接合過程 ： 轉(zhuǎn)性別頻率： 近 100% F 菌株 ● 定義 ：指細胞內(nèi)無 F質(zhì)粒，細胞表面無性菌毛的菌株。 F質(zhì)粒 F/ F/質(zhì)粒 Hfr菌株 一整套核 DNA 少見 (頻率低 ) ● Hfr菌株與 F菌株接合過程 F/ 菌株 ● 定義： 當(dāng) Hfr菌株細胞內(nèi)的 F質(zhì)粒因不正常切離而脫離核染色體組時，可重新形成游離的但攜帶整合位點臨近一小段核染色體基因的特殊 F質(zhì)粒。 過程： 第五節(jié) 真核微生物的基因重組和雜交育種 一、有性雜交 (一 )、定義 ● 雜交：在細胞水平上進行的一種遺傳重組方式。 ● 產(chǎn)有性孢子的菌均可進行有性雜交。 ● 發(fā)生在無有性生殖的半知菌類中 （如構(gòu)巢曲霉） (二)、準(zhǔn)性生殖過程 三、準(zhǔn)性雜交育種 選擇親本 強制異合 移單菌落 驗穩(wěn)定性 促進變異 穩(wěn)定的雜合 二倍體菌株 第六節(jié) 菌種的衰退、復(fù)壯和保藏 一、菌種的衰退 (一 )、定義 ：由于自發(fā)突變的結(jié)果，使某物種原有一系列生物性狀發(fā)生量變或質(zhì)變的現(xiàn)象。 ● 原理： 根據(jù)微生物的生理、生化特點，選用優(yōu)良菌株，最好是它們的休眠體，人工地創(chuàng)造適合于休眠的環(huán)境條件，即干燥、低溫、缺乏氧氣和養(yǎng)料等，使微生物的代謝活動處于最低的狀態(tài)但又不至于死亡，從而達到保藏的目的 。各類菌種均可用此法進行保藏。 ● 特點 ：此法一般可保藏 1~2年 左右。 砂土管或土壤保藏法 ● 方法 ：取過篩（ 60目）河砂，用 10％鹽酸浸泡、用水洗凈后，烘干。然后放入干燥器中，抽氣干燥，放入低溫處保藏。 ● 特點 ： 此法一般可保藏 1至數(shù)年， 它適用于產(chǎn)生孢子的微生物的保藏。 ● 特點 ： 一般可在 5年以上，它適用于各大類微生