【正文】 的篩選 瓊脂塊培養(yǎng)法 (2)、抗藥性突變株的篩選 梯度平板法 (3)、 營養(yǎng)缺陷型突變株的篩選 ● 概念： 基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、補(bǔ)充培養(yǎng)基 野生型、營養(yǎng)缺陷型、原養(yǎng)型 ● 篩選步驟 誘變 淘汰野生型 檢出缺陷型 鑒定缺陷型 ● 篩選方法 ① 淘汰野生型： a 抗生素法 b 菌絲濃縮法 ② 檢出缺陷型 夾層培養(yǎng)法 一個(gè)平皿培養(yǎng) 方法 限量補(bǔ)充營養(yǎng)法 逐個(gè)檢出法 兩個(gè)平皿培養(yǎng) 影印接種法 夾層培養(yǎng)法 影印平板法 絨布 適溫培養(yǎng) 菌落轉(zhuǎn)移 粘取菌落 ③ 鑒定缺陷型 例：生長譜法 原理： 在混有供試菌的平板表面點(diǎn)加微量營養(yǎng)物，視某營養(yǎng)物周圍是否長菌來確定該供試菌的營養(yǎng)要求 方法 第四節(jié) 原核生物的基因重組 一、轉(zhuǎn)化 (一 )、幾個(gè)概念 轉(zhuǎn)化 ：受體菌 直接吸收 供體菌的 DNA片段 而獲得后者部分遺傳性狀的現(xiàn)象。 效果較好的有：亞硝酸、硫酸二乙酯（ DES）、亞硝基胍（ NTG）、氮芥、乙烯亞胺、 5溴尿嘧啶、吖啶黃等。 物理誘變劑： 非電離輻射： 紫外線、 激光和離子束 電離輻射： x射線、 γ 射線、快中子、 α 射線、 β 射線 和超聲波等。 b、菌齡： 細(xì)菌：對(duì)數(shù)期的細(xì)胞；真菌和放線菌：剛成熟的孢子。 精測(cè) (復(fù)篩 ) ：定量測(cè)定產(chǎn)物，并確認(rèn)產(chǎn)物。 切除修復(fù) 第三節(jié) 育種 選種 ：根據(jù)微生物的特性，采用各種分離篩選方法，從自然界中或從生產(chǎn)實(shí)踐中選出適合人們要求的菌種。 染色體畸變： 某些強(qiáng)烈理化因子引起 染色體結(jié)構(gòu)上的缺失、重復(fù)、插入、移位和倒位，以及染色體數(shù)目的變化。 其作用是 ：通過活細(xì)胞的代謝活動(dòng)摻入到 DNA分子中。 (1)、種類 ①轉(zhuǎn)換： 從一種嘌呤變到另一嘌呤 或從一種嘧啶到另一嘧啶，可稱為轉(zhuǎn)換 ； ②顛換： 從嘌呤到嘧啶或從嘧啶到嘌呤，則稱它為顛換。 Newbe的涂布試驗(yàn) (1)、試驗(yàn)方法 自發(fā)突變假說 獲得免疫性假說 (2)、試驗(yàn)結(jié)果： 重新涂布平板 上微菌落后， 長出抗性菌落 遠(yuǎn)高于未重新 涂布的。 突變率可用某一單位群體在每一世代產(chǎn)生突變株的數(shù)目表示。 二、基因突變的類型 按 突變株表型 分 營養(yǎng)缺陷型： 喪失合成某些生長因子的能力 選擇性突變株 抗性突變型： 對(duì)藥物或致死物理因子產(chǎn)生抗性 條件致死突變型 ： 某條件能生長，另?xiàng)l件不能 分 形態(tài)突變型： 個(gè)體或菌落形態(tài)發(fā)生變異 非選擇性突變株 抗原突變型： 細(xì)胞抗原結(jié)構(gòu)發(fā)生變異 產(chǎn)量突變型： 代謝產(chǎn)物產(chǎn)量變異 從突變產(chǎn)生的原因來分 自發(fā)突變： 是指某些微生物在自然條件下，沒有人工參與而發(fā)生的基因改變。 存在菌 ： 假單胞菌屬 第二節(jié) 基因突變 一、基因突變的概念 基因突變 ：簡稱突變，是指細(xì)胞內(nèi)（或病毒粒子內(nèi)）遺傳物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)或數(shù)量突然發(fā)生的可遺傳的變化。 作用 ：毛狀根離體培養(yǎng)，可合成次生代謝物，可作外源基因的載體。 及作用 col Ib： 與 F因子相似，具有通過接合而轉(zhuǎn)移的功 能，屬嚴(yán)緊型控制。 抗性決定子 ：無轉(zhuǎn)移功能，含各種抗性基因。 c 是一種獨(dú)立存在于胞內(nèi)的復(fù)制子。 少數(shù)例外。 (1)、原核生物的基因調(diào)控系統(tǒng) (2)、真核生物 密碼子水平 遺傳密碼： DNA鏈上決定各具體氨基酸的特定核苷酸排列順序。每個(gè)基因大體在 1000~1500bp，相對(duì)分子量約為 105。 飾變（ modification） ：指不涉及遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)而只發(fā)生在轉(zhuǎn)錄、翻譯水平上的表型變化，不遺傳。 表型（ phenotype） ：指某一生物所具有的一切外表特征和內(nèi)在特性的總和，是遺傳型在合適條件下的具體表現(xiàn)。 遺傳型（ genotype） ：也稱基因型，指某一生物個(gè)體所含有的全部遺傳因子即基因組所攜帶的遺傳信息。變異頻率一般為 105~10變化后新性狀穩(wěn)定，可遺傳。m質(zhì)粒 環(huán)狀雙鏈結(jié)構(gòu) DNA 原核生物 F因子 R因子 核外染色體 Col質(zhì)粒 Ti質(zhì)粒 巨大質(zhì)粒 降解性質(zhì)粒 染色體水平 (1)、染色體數(shù) 高等動(dòng)植物體細(xì)胞：雙倍體 (2)、染色體倍數(shù) 原核：一般為單倍體 微生物 雙倍體不穩(wěn)定 真核：一般為單倍體 接合成合子后可成雙倍體 核酸水平 (1)、種類及結(jié)構(gòu) 多數(shù)為 DNA，大多為雙鏈，也有環(huán)狀及螺旋狀等 僅病毒有 RNA，其 DNA、 RNA 也有單鏈、雙鏈等 (2)、長度 (即堿基對(duì)， bp) 介紹已測(cè)序的微生物基因組大小 基因水平 基因 ：是生物體內(nèi)一切具有自主復(fù)制能力的最小遺傳功能單位。 c 基因能夠發(fā)生突變：如同 DNA發(fā)生變化一樣，基因也會(huì)發(fā)生變化，即變異。 核苷酸水平 核苷酸單位為最低突變單位或交換單位 絕大多數(shù)生物的 DNA含：腺苷酸 (AMP)、胸苷酸(TMP)、鳥苷酸 (GMP)、胞苷酸 (CMP)。 b 質(zhì)粒上攜帶核基因缺少的基因，具接合、產(chǎn)毒、抗藥、固氮、產(chǎn)特殊酶等作用。 質(zhì)粒在基因工程中的應(yīng)用 質(zhì)粒的分離與鑒定 (1)、分離過程：細(xì)胞裂解 蛋白質(zhì)和 RNA的去