【正文】 綱（ Class） ? 目（ Order） ? 科（ Family） ? 屬（ Genus） ? 種（ Species） ? 種是最基本的分類單位。 第 六 章 ?分子生物學(xué)分析方法已被用于流行病學(xué)調(diào)查 ?質(zhì)粒指紋圖（ PEP） ?對噬菌體的敏感性，對細(xì)菌素的敏感性 第 六 章 ?基因工程是根據(jù)遺傳變異中細(xì)菌可因基因轉(zhuǎn)移和重組而獲得新性狀的原理設(shè)計的 ?切取目的基因 —— 連接到載體上 —— 轉(zhuǎn)移到工程菌內(nèi)，大量表達(dá)目的基因產(chǎn)物 ?目前已大量生產(chǎn)胰島素、干擾素、多種生長激素、 rIL2等細(xì)胞因子和乙肝疫苗等生物制品 第 六 章 基因工程 1. 基因工程總體策略 2. 目標(biāo)基因的克隆與鑒定 3. 宿主和載體 4. 重組蛋白的生產(chǎn) 第 六 章 基因工程總體策略 基因工程指用人為的方法將所需要的某一供體生物的 DNA提取出來，在適當(dāng)?shù)臈l件下用適當(dāng)?shù)拿盖懈詈?，把它與載體 DNA分子連接起來形成具有自我復(fù)制能力的 DNA分子 ——復(fù)制子，并將它轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)。 制備： 物理誘變劑 —— 生理鹽水（ %NaCl) 化學(xué)誘變劑 —— 緩沖液 濃度： 細(xì)菌、放線菌 108個 /ml 霉菌、酵母菌 106個 /ml 第 六 章 表型遲延現(xiàn)象 :指某一突變在 DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂后，才在表型上顯示出來，造成不純的菌落。當(dāng)前發(fā)酵工業(yè)和其他微生物生產(chǎn)部門所使用的高產(chǎn)菌株 ， 幾乎毫無例外地都是通過誘變育種而明顯提高其生產(chǎn)性能的 。原生質(zhì)體融合不僅能在不同菌株或種間進(jìn)行，還能做到屬間、科間甚至更遠(yuǎn)緣的微生物或高等生物細(xì)胞間的融合。通過接合而獲得新性狀的受體細(xì)胞就稱接合子。 第 六 章 可轉(zhuǎn)化的性狀 莢膜多糖的合成 專一性酶的合成 專一性蛋白質(zhì)的合成 抗藥性 第 六 章 混合培養(yǎng) (二 )、轉(zhuǎn)導(dǎo)（ transduction） （ 1952）在Salmonella typhimurium中發(fā)現(xiàn)的。 第 六 章 生長快、產(chǎn)量低 生長慢、產(chǎn)量高 基因重組 生長快、產(chǎn)量高 第 六 章 細(xì)菌的基因重組 ?基因重組的方式 ?轉(zhuǎn)化 ?轉(zhuǎn)導(dǎo) ?接合 ?原生質(zhì)體融合 第 六 章 ?定義 ： 受體菌自然或在人工技術(shù)作用下直接攝取來自供體菌的游離 DNA片段，并把它整合到自己的基因組中，而獲得部分新的遺傳性狀的基因轉(zhuǎn)移過程，稱為轉(zhuǎn)化。 第 六 章 環(huán)出效應(yīng) ? 即環(huán)狀突出效應(yīng)。 ? 幾種自發(fā)突變的可能機(jī)制 ? 微生物自身有害代謝產(chǎn)物的誘變效應(yīng) ? 過氧化氫是普遍存在于微生物體內(nèi)的一種代謝產(chǎn)物。 ? 染色體內(nèi)畸變 ：只涉及一條染色體上的變化， ? 如發(fā)生染色體的部分 缺失 或 重復(fù) 時，其結(jié)果可造成基因的減少或增加； ? 如發(fā)生 倒位 或 易位 時，則可造成基因排列順序的改變，但數(shù)目卻不改變。與染色體畸變相比，移碼突變也只能算是 DNA分子的微小損傷。 對某一具體誘變劑來說，即可同時引起轉(zhuǎn)換與顛換，也可只具其中的一種功能。 第 六 章 (二 ) 突變機(jī)制 誘變劑（ mutagen） ：凡能提高突變率的任何理化因子，就稱為誘變劑 . 種類： 誘變劑的種類很多，作用方式多樣。 ?獨立性 ：各種突變獨立發(fā)生 ， 不會互相影響 。（ dwarf clone, 侏儒菌落） 第 六 章 糖代謝能力的 變異 營養(yǎng)成份的合成能力改變 第 六 章 第二節(jié) 細(xì)菌變異的機(jī)制 一、基因突變（ mutation ） 指生物體的表型突然發(fā)生的可遺傳的變化。 ? 有些細(xì)菌還表現(xiàn)為同時耐受多種抗菌藥物，即多重耐藥性，甚至產(chǎn)生藥物依賴性。 ?通過基因工程的方法 。著名的 卡介苗 BCG 第 六 章 ?在含有抗血清 ， 噬菌體或抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 。 ?例如魏氏梭菌與八疊球菌共生時毒力變強(qiáng) ，無毒的白喉棒狀桿菌被溫和 β噬菌體感染后產(chǎn)生白喉毒素 ， 成為有毒細(xì)菌 。一些具有重要性狀的外源基因可借 DNA重組技術(shù)設(shè)法插入到 Ti質(zhì)粒中，并進(jìn)一步使之整合到植物染色體上，以改變該植物的遺傳性，達(dá)到培育植物優(yōu)良品種的目的。這些質(zhì)粒以其所分解的底物命名，例如有分解 CAM（樟腦）質(zhì)粒， XYL（二甲苯）質(zhì)粒，SAL（水楊酸）質(zhì)粒， MDL（扁桃酸）質(zhì)粒，NAP（奈）質(zhì)粒和 TOL（甲苯）質(zhì)粒等。大腸桿菌素都是由 Col因子編碼的。 “耐藥性” 2. R因子（ resistence factor） 第 六 章 R100質(zhì)粒 (89kb)可使宿主對下列藥物及重金屬具有抗性： 汞（ mercuric ion ， mer）四環(huán)素（ tetracycline， tet ）鏈霉素(Streptomycin, Str)、磺胺 (Sulfonamide, Su)、氯霉素(Chlorampenicol, Cm)、 夫西地酸（ fusidic acid， fus） 并且負(fù)責(zé)這些抗性的基因是成簇地存在于抗性質(zhì)粒上。 第 六 章 質(zhì)粒編碼細(xì)菌各種重要的生物學(xué)性狀 . 致育質(zhì)粒或 F質(zhì)粒 。 第 六 章 遺傳物質(zhì)的復(fù)制 雙鏈 DNA的復(fù)制 （半保留復(fù)制） 第 六 章 原核生物的染色體 第 六 章 核外 DNA的種類 核外染色體 真核生物的 “ 質(zhì)粒 ” 原核生物的質(zhì)粒 線粒體 細(xì)胞質(zhì)基因 葉綠體 （ 質(zhì)體 ） 中心體 動 體 共生生物： 卡巴顆粒 酵母菌的 2?m質(zhì)粒 F因子 R因子 Col質(zhì)粒 Ti質(zhì)粒 巨大質(zhì)粒 降解性質(zhì)粒 第 六 章 質(zhì) 粒 質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外的遺傳物質(zhì)，多為環(huán)狀雙螺旋 DNA分子。 McCarty從熱死 S型 S. pneumoniae中提純了可能作為轉(zhuǎn)化因子的各種成分 ，并在離體條件下進(jìn)行了轉(zhuǎn)化試驗： 只有 S型細(xì)菌的 DNA才能將 S. pneumoniae的 R型轉(zhuǎn)化為 S型 。認(rèn)為遺傳物質(zhì)是一種具有特定分子結(jié)構(gòu)的化合物。 代謝 發(fā)育 概述 第 六 章 變異 (variation):生物體在外因或內(nèi)因的作用下 ， 遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或數(shù)量發(fā)生改變 。特點：具穩(wěn)定性。第 六 章 ? 微生物是研究現(xiàn)代遺傳學(xué)和其它許多主要的生物學(xué)基本理論問題中最熱衷的 研究對象 。 遺傳 (heredity)： 親代生物的性狀在子代得到表現(xiàn)；親代生物傳遞給子代一套實現(xiàn)與其相同形狀的遺傳信息。是一種 現(xiàn)實存在， 是具一定遺傳型的生物在一定條件下所表現(xiàn)出的具體性狀。 第 六 章 細(xì)菌在培養(yǎng)基上的生長表現(xiàn) 粘質(zhì)沙雷氏菌的菌落特征 第 六 章 二、 遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ) ? 種質(zhì)連續(xù)理論： 18831889年間 Weissmann提出。 第 六 章 經(jīng)典試驗 1. 肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化試驗 格里菲斯 第 六 章 ?① 加 S菌 DNA ?② 加 S菌 DNA及 DNA酶以外的酶 ?③加 S菌的 DNA和 DNA酶 ?④加 S菌的 RNA ?