【正文】 除 質(zhì)粒 DNA與染色體 DNA的分離 (2)、鑒定： a 電鏡 b 瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠電泳 c 密度剃度離心法 質(zhì)粒的種類 按其作用分為 5大類 有：接合性、抗藥性、產(chǎn)細(xì)菌素和抗生素、具生理功能的和產(chǎn)毒質(zhì)粒 質(zhì)粒的三種構(gòu)型 典型質(zhì)粒介紹 (1)、 F質(zhì)粒 ★ 構(gòu)成： ★ 作用：決定性別并有轉(zhuǎn)移能力 ★ 存在菌：大腸桿菌、假單胞菌屬、鏈球菌屬 (2)、 R質(zhì)粒 ★ 構(gòu)成： 抗性轉(zhuǎn)移因子 RTF：含調(diào)節(jié) DNA復(fù)制和拷貝數(shù)的基因及轉(zhuǎn)移基因，具轉(zhuǎn)移功能。 ★ 存在菌：痢疾志賀氏菌 (3)、 col質(zhì)粒 (又叫大腸桿菌素質(zhì)粒 ) 大腸桿菌素 ：由 ，具有通過(guò)抑制復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯或能量代謝等方式而專一地殺死它種腸道菌或同種其他菌株的能力 col E1： 無(wú)接合作用，是松弛型控制、多拷貝的 種類 可用于重組 DNA的研究和體外復(fù)制系統(tǒng)上。 存在菌 ：根癌土壤桿菌或根癌農(nóng)桿菌 (5)、 Ri質(zhì)粒 與 Ti質(zhì)粒相似，但不形成癌，僅生出可再生新植株的毛狀根。 (7)、降解性 質(zhì)粒 作用 ：可為降解復(fù)雜有機(jī)物的酶編碼，如 CAM(樟腦 )質(zhì)粒、 OCT(辛烷 )質(zhì)粒、 TOL(甲苯 )質(zhì)粒、XYL(二甲苯 )質(zhì)粒、 NAP(萘 )質(zhì)粒等。 染色體畸變： 某些因素使 DNA發(fā)生大的損傷，使染色體產(chǎn)生畸變，結(jié)構(gòu)上出現(xiàn)缺失 、重復(fù) 、倒位 和易位的現(xiàn)象 ，數(shù)目上有所增減。 回復(fù)突變： 突變型基因會(huì)再次發(fā)生突變而成為野生型基因 三、突變率 ：某一細(xì)胞（或病毒粒子）在每一世代中發(fā)生某一性狀突變的幾率。 結(jié)論： 噬菌體性狀的產(chǎn) 生，非環(huán)境因素 誘導(dǎo)，是自發(fā)產(chǎn) 生。 堿基置換： 一對(duì)堿基被另一對(duì)堿基所置換。 間接引起置換的誘變劑： 堿基類似物，如 5溴尿嘧啶， 5氨基尿嘧啶， 8氮鳥 2氨基嘌呤， 6氯嘌呤等。吖啶橙和 5氨基吖啶對(duì)噬菌體有效； ICR－ 191對(duì)細(xì)菌有效， 溴化乙錠對(duì)酵母菌小菌落有效 作用機(jī)制： 它們的結(jié)構(gòu)與一個(gè)嘌呤 嘧啶對(duì)很相似，能嵌入兩個(gè)相鄰的 DNA堿基對(duì)間，使雙螺旋部分解開，造成堿基 增添或缺失。 (二 )、修復(fù)方式 光復(fù)活作用 (需要可見光 ) 帶嘧啶二聚體的 DNA分子在黑暗中與光解酶結(jié)合，在可見光下酶被激活，使二聚體分解成單體。 一、從自然界中選種 步驟 ：樣品采集 增殖培養(yǎng) 初篩 復(fù)篩 傳代穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 菌株終選 性能測(cè)定 粗測(cè) (初篩 )： 定性鑒別產(chǎn)物，一般在培養(yǎng)皿上進(jìn)行。 (一 )、誘變育種的程序 出發(fā)菌株 菌種純化 制備斜面孢子或菌懸液 誘變處理 平板涂布 初篩 復(fù)篩 傳代穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 放大試驗(yàn) 致死率確定 性能精測(cè) 活菌計(jì)數(shù) 性能初測(cè) 活菌計(jì)數(shù) 性能測(cè)定 菌種保藏 并用于生產(chǎn) 出發(fā)菌株選擇 選擇依據(jù)： 1）選用來(lái)自于生產(chǎn)的自發(fā)突變菌株； 2）選有利于進(jìn)一步研究的菌株； 3）選用幾次誘變處理均提高產(chǎn)量的菌株； 4）選用形態(tài)發(fā)生變異以后的菌株等 (二 )、誘變育種要點(diǎn) 孢子（或菌體）懸浮液的制備 (1)、 菌選用原則 a、 單核菌或孢子 酵母菌 :一般是單核的； 細(xì)菌 :球菌一般單核，桿菌大多數(shù)含有兩個(gè)核；霉菌： 菌絲細(xì)胞常是多核，黑曲霉、黃色青霉的分生孢子等也單核，鏈孢霉、米曲霉的孢子中平均有 5～ 6個(gè)核；放線菌 :菌絲細(xì)胞常是多核，分生孢子大部分單核。分為物理誘變劑、 化學(xué)誘變劑和生物誘變劑 三大類。如 5溴尿嘧啶 ③ DNA上減少或增加一、二個(gè)堿基，引起堿基突變點(diǎn)以后全部遺傳密碼轉(zhuǎn)錄和翻譯的錯(cuò)誤，如吖啶類物質(zhì)。 (4)、復(fù)合處理： 復(fù)合處理 ：為了獲得更好的誘變效果，有時(shí)可用兩種或兩種以上的誘變劑先后處理，或者同時(shí)使用，或者一種誘變劑重復(fù)使用。 一般 15kb左右，即 15個(gè)基因。 轉(zhuǎn)染 ：用提純的 病毒核酸 去感染其宿主細(xì)胞或原生質(zhì)體，可增殖出一群 正常病毒 的現(xiàn)象。 完全普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 流產(chǎn)普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 分類 低頻轉(zhuǎn)導(dǎo) (104~106) 局限轉(zhuǎn)導(dǎo) 高頻轉(zhuǎn)導(dǎo) (50%) (二 )、普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)： 通過(guò)完全缺陷噬菌體對(duì) 供體任何 DNA片段的“誤包”而使受體菌遺傳性狀發(fā)生相應(yīng)改變的現(xiàn)象。 4）該缺陷噬菌體需通過(guò) Uv等因素對(duì)溶源菌誘導(dǎo)產(chǎn)生 低頻轉(zhuǎn)導(dǎo) ：通過(guò)一般溶源菌釋放的噬菌體所進(jìn)行的轉(zhuǎn)導(dǎo)，因形成轉(zhuǎn)導(dǎo)子的頻率低 (104~106)而得名。 三、接合 (一 )、定義 接合 ： 供體菌（ “ 雄性 ” ）通過(guò)性菌毛與受體菌（ “ 雌性 ” ）直接接觸，把 F質(zhì)粒 或其攜帶的不同長(zhǎng)度的 核基因組片段 傳遞給后者，使后者獲得若干新遺傳的現(xiàn)象 。 ● 與 F菌株 的接合過(guò)程 ： 轉(zhuǎn)性別頻率： 近 100% F 菌株 ● 定義 ：指細(xì)胞內(nèi)無(wú) F質(zhì)粒，細(xì)胞表面無(wú)性菌毛的菌株。 過(guò)程： 第五節(jié) 真核微生物的基因重組和雜交育種 一、有性雜交 (一 )、定義 ● 雜交：在細(xì)胞水平上進(jìn)行的一種遺傳重組方式。 ● 發(fā)生在無(wú)有性生殖的半知菌類中 （如構(gòu)巢曲霉） (二)、準(zhǔn)性生殖過(guò)程 三、準(zhǔn)性雜交育種 選擇親本 強(qiáng)制異合 移單菌落 驗(yàn)穩(wěn)定性 促進(jìn)變異 穩(wěn)定的雜合 二倍體菌株 第六節(jié) 菌種的衰退、復(fù)壯和保藏 一、菌種的衰退 (一 )、定義 ：由于自發(fā)突變的結(jié)果，使某物種原有一系列生物性狀發(fā)生量變或質(zhì)變的現(xiàn)象。各類菌種均可用此法進(jìn)行保藏。 砂土管或土壤保藏法 ● 方法 ：取過(guò)篩（ 60目）河砂，用 10％鹽酸浸泡、用水洗凈后，烘干。 ● 特點(diǎn) ： 此法一般可保藏 1至數(shù)年， 它適用于產(chǎn)生孢子的微生