工業(yè)微生物育種誘變劑(2)(參考版)
2025-01-16 22:20本頁面
【正文】 作業(yè)： 。 ?Mu噬菌體是大腸桿菌的溫和噬菌體，為線性雙鏈 DNA分子，但不同于 ?噬菌體，其 DNA幾乎可插入到宿主染色體的任何一個(gè)位點(diǎn)上，當(dāng) Mu噬菌體發(fā)生轉(zhuǎn)座插入到宿主染色體上時(shí)，會(huì)引起突變，是典型的生物誘變劑。 ?這類具有轉(zhuǎn)座功能的溶源性噬菌體即轉(zhuǎn)座噬菌體，能引起突變，具有明顯的誘變效應(yīng)。 56 電離輻射誘變機(jī)理 ? 直接作用：打斷化學(xué)鍵 ? 間接作用：通過自由基打斷化學(xué)鍵，引起缺失和損傷 效應(yīng)：染色體畸變，堿基置換，移碼突變 ? ? 57 三、快中子 ? 中子可以從回旋加速器、靜電加速器或原子反應(yīng)堆中產(chǎn)生 ? 快中子具有的能量最高，為 ~10MeV ? 快中子的應(yīng)用：可將放在安瓿管中的菌懸液或長在平皿上的菌落置射線源一定距離處進(jìn)行處理 用 10~30krad的劑量進(jìn)行處理，控制致死率為 50~85%，產(chǎn)生的正突變率可達(dá) 50% 58 四、離子注入 ? 一種較為新型的物理誘變手段 ? 離子注入的質(zhì)量、電荷、能量參數(shù)可以按需要進(jìn)行不同組合，可使誘變具有較高的方向性和可控性 ；產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)比單一輻射更為豐富。 55 二、電離輻射（ X射線和 γ 射線） ? X射線波長是 ~136納米， X射線一般由 X光機(jī)產(chǎn)生。紫外燈波長 2537 197。 ? 非電離輻射類的紫外線 、激光和離子束等， ? 電離輻射的 X射線、 γ 射線和快中子等。 ?使用化學(xué)誘變劑一般要求避光、密封、低溫、干燥等； ?盡可能不觸及人體任何部位； ?對(duì)殘余物要及時(shí)進(jìn)行消毒、稀釋處理。 ? 重視化學(xué)誘變劑的操作安全 化學(xué)誘變劑多數(shù)是極毒的致癌藥品，在進(jìn)行誘變操作后的處置以及誘變劑的保藏等方面的安全防護(hù)都是及其重要的。 ? 烷化劑時(shí)具有很高的活性，而且能與水起作用，所以溶液必須在使用前配。 46 使用化學(xué)誘變劑注意事項(xiàng) ? 移碼誘變劑作用于生長態(tài)的細(xì)胞 ,，須通過 DNA的復(fù)制才形成突變。 44 移碼突變劑的誘變機(jī)理 B嵌入到舊鏈上導(dǎo)致插入突變 A嵌入到新合成鏈上導(dǎo)致缺失突變 ? 移碼誘變劑的嵌入并不導(dǎo)致突變，必須通過 DNA的復(fù)制才形成突變，因此這類誘變劑只能作用于生長態(tài)的細(xì)胞。 42 ? 甲基磺酸乙脂 （ EMS） 使 G的第 6位烷化 ， 使 T的第 4位上烷化 ， 結(jié)果產(chǎn)生的 O6EG和 O4ET分別和 T、 G配對(duì) ， 導(dǎo)致 G∶C 對(duì)轉(zhuǎn)換成 A∶T 對(duì)； T∶A 對(duì)轉(zhuǎn)換成 C∶G G O 6 E G A T O 4 E T C C T T A G G43 三、移碼誘變劑 ? 是一類能夠嵌入到 DNA分子中的物質(zhì) ? 吖啶類染料（ acridine dye）、溴化乙錠（ ethidium bromide）和一系列 ICR類化合物 溴化乙錠（ EtBr） 由美國的腫瘤研究所合成，故名。 除以上直接以溶液處理外，也可以進(jìn)行如下方法誘變處理： ?NTG是一種強(qiáng)烈的致癌物質(zhì)，操作時(shí)要帶橡皮手套，穿工作服，帶口罩，用稱量瓶稱量，最好在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。 用冷的生理鹽水稀釋到 50倍以上或在低溫下進(jìn)行離心洗滌，除去藥液，加無菌水使沉淀懸浮并作成一定稀釋度分離于平皿。 NTG溶液混合于一試管內(nèi)，置該菌生長適宜的溫度下保溫處理若干時(shí)間。使用時(shí)取母液 ，加菌懸液 ， NTG最后處理濃度為 100μ g/ml。常用的由磷酸緩沖液和 Tris緩沖液 . ，用一定 pH值的緩沖液或 Tris緩沖液洗下細(xì)菌制成菌懸液。 通常在 。 ? NTG的水溶液中隨著不同的 pH將產(chǎn)生不同的分解產(chǎn)物，從而影響誘變效應(yīng)。其中處理細(xì)菌、放線菌等微生物時(shí)，不經(jīng)淘汰，就可以直接得到 10%以上的營養(yǎng)缺陷型突變株。 ? NTG不溶于水，須加助溶劑，使用時(shí)現(xiàn)配現(xiàn)用。 烷化劑名稱 理化特性 pH7水中半衰期 /h 分子量 狀態(tài) 水溶性 溶點(diǎn)或沸點(diǎn) 20℃ 30℃ 37℃ 甲基磺酸乙酯 (EMS) 無色液體 約 8% 沸點(diǎn)85~86℃/1
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