工業(yè)微生物育種誘變劑 (2)-文庫(kù)吧
2024-12-29 22:20 本頁(yè)面
【正文】 常見的堿基修飾劑 （ a）亞硝酸（ b）羥胺（ c）甲基磺酸乙酯（ d） N甲基 N’硝基 N亞硝基胍 17 1．脫氨劑 ? 亞硝酸（ nitrous acid）是典型的脫氨劑 亞硝酸可直接作用于正在復(fù)制或未復(fù)制的 DNA分子 ， 脫去堿基中的氨基變成酮基 ， 改變堿基氫鍵的電位 ， 引起堿基轉(zhuǎn)換而發(fā)生變異 。 如脫氨基的結(jié)果： G 黃嘌呤 X（ xanthine ） C U A 次黃嘌呤 H 18 亞硝酸的脫氨基作用及其誘發(fā)的突變 19 ? 亞硝酸誘發(fā)的突變 H N O 2 A H G G A A T C C C U T H N O 2 A:T G┆ C ? 亞硝酸的處理方法 （ 1） 1mol/ （ 2） （ 3） （以處理濃度 ） ? 取孢子懸液 1ml， 2ml及 液 1ml，最后處理濃度為 。于 25— 26℃ 保溫 10—20min，加入 、 20ml，使pH下降至 ，以終止反應(yīng)。稀釋分離于平板。 ? 如果是處理細(xì)菌，亞硝酸最后濃度以 ： 將斜面新鮮菌體移入肉湯培養(yǎng)基，適溫培養(yǎng)到對(duì)數(shù)期，將培養(yǎng)液進(jìn)行離心，棄去上清液，用生理鹽水洗滌。 沖液和 :1濃度加入沉淀的菌體中，使之懸浮。于 35— 37℃ 處理 5— 10min、加入 5倍的 酸氫二鈉溶液，使 pH下降到 。取一定量進(jìn)行后培養(yǎng)— 2h。然后稀釋分離于平板上。 注：在亞硝酸處理菌體或孢子時(shí)要嚴(yán)格控制好溫度，否則會(huì)影響誘變效果。 22 2. 羥化劑 ? 羥胺（ hydroxylamine）是典型的羥化劑 ? 羥胺的分子式為 NH2OH（簡(jiǎn)稱 HA） ,常以鹽酸羥胺形式存在（分子式為 NH2OHHCl），為白色晶體，溶于水，不穩(wěn)定易分解，具腐蝕性，容易吸濕，故要密封、干燥保存。 ? 羥胺是具有特異效應(yīng)的誘變劑，專一地誘發(fā) G:C A:T的轉(zhuǎn)換。 羥胺的誘變機(jī)制 改變了結(jié)構(gòu)的胞嘧啶 ? 根據(jù)誘變機(jī)制，羥胺不能使突變回復(fù)，即不能使A:T G:C轉(zhuǎn)換，進(jìn)行逆向突變。 ? 由于羥胺是誘發(fā) G:C A:T的專一性誘變劑，因此，可以用來(lái)鑒別突變體是 A:T G:C還是 G:C A:T轉(zhuǎn)換。 ? 羥胺的處理方法： 常用濃度為 — 5%，可直接在溶液中處理，時(shí)間 1— 2h，然后分離培養(yǎng)。但一般都加到瓊脂平板或振蕩培養(yǎng)基中，然后接入孢子或細(xì)菌，在適溫下培養(yǎng)，生長(zhǎng)過(guò)程中處理，所用濃度比直接處理時(shí)低些。 3．烷化劑 —— 烷化劑是誘發(fā)突變中一類相當(dāng)有效的化學(xué)誘變劑，這類誘變劑具有一個(gè)或多個(gè)活性烷基，它們易取代 DNA分子中活潑的氫原子，直接與一個(gè)或多個(gè)堿基起烷化反應(yīng)，從而改變 DNA分子結(jié)構(gòu)，引起突變。 雙功能烷化劑 單功能烷化劑 多功能烷化劑 根據(jù)烷化劑中活性烷基的數(shù)目 亞硝基類、磺酸酯類、硫酸酯類、重氮烷類、乙烯亞胺類化合物 硫芥子、氮芥子類等 26 烷化堿基 部分烷化劑 部分烷化劑 和 烷化堿基 甲基磺酸甲酯 亞硝基乙基脲 7甲基鳥嘌呤 3甲基腺嘌呤 O6甲基鳥嘌呤 ? 烷化劑的誘變機(jī)制 —— 烷化劑主要使通過(guò)烷化基團(tuán)使 DNA分子上的堿基及磷酸部分烷化， DNA復(fù)制時(shí)導(dǎo)致堿基配對(duì)錯(cuò)誤而引起突變。 ? 堿基中容易發(fā)生烷化作用的是嘌呤類。其中鳥嘌呤 N7是最易起反應(yīng)的位點(diǎn)，幾乎可以和所有烷化劑起烷化作用；甲基磺酸乙酯主要使嘌呤 N7烷基化。 ? 其次引起烷化的位點(diǎn)是鳥嘌呤 N腺嘌呤 N腺嘌呤 N7和胞嘧啶 N
高考資料相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1