工業(yè)微生物育種誘變劑(2)-wenkub
2023-01-28 22:20:30 本頁面
【正文】 （真菌或放線菌）須進(jìn)行前培養(yǎng)，可用有關(guān)培養(yǎng)基代替以上緩沖液，孢子培養(yǎng)時(shí)間控制在大部分孢子處在萌動階段，經(jīng)離心、洗滌，用緩沖液制成懸液，濃度約在106107ml1； NTG的誘變處理方法： NTG母液： 由于 NTG不溶于水，配制需加助溶劑甲酰胺或丙酮少許，然后加緩沖溶液，其比例為 9： 1（緩沖溶液 9ml： NTG丙酮溶液 1ml），一般 NTG母液濃度配成1mg/ml。 ?當(dāng)溶液 pH低于 ， NTG分解成 HNO2, HNO2本身就具誘變作用； ?當(dāng)溶液 pH在 ， NTG會分解產(chǎn)生重氮甲烷（ CH2N2），對核酸起烷化作用，引起微生物突變； ?當(dāng)溶液 pH為 ， NTG本身和 DNA起烷化反應(yīng)而導(dǎo)致突變。 ? NTG有超誘變劑之稱，能使細(xì)胞發(fā)生一次或多次突變，誘變效果好，尤其適合于誘發(fā)營養(yǎng)缺陷型突變株。 —— 另外，配制烷化劑溶液時(shí)，要采用合適的 pH緩沖液。 —— 它們大部分半衰期很短，其長度與溫度、溶液 pH關(guān)系很大。 GC就可能變?yōu)槿魏螇A基對 G:C—— A:T轉(zhuǎn)換及 G:C—— C: G或 G:C—— T: A 顛換而導(dǎo)致突變。這些位點(diǎn)引起堿基置換的僅占烷化作用的 10%左右。 雙功能烷化劑 單功能烷化劑 多功能烷化劑 根據(jù)烷化劑中活性烷基的數(shù)目 亞硝基類、磺酸酯類、硫酸酯類、重氮烷類、乙烯亞胺類化合物 硫芥子、氮芥子類等 26 烷化堿基 部分烷化劑 部分烷化劑 和 烷化堿基 甲基磺酸甲酯 亞硝基乙基脲 7甲基鳥嘌呤 3甲基腺嘌呤 O6甲基鳥嘌呤 ? 烷化劑的誘變機(jī)制 —— 烷化劑主要使通過烷化基團(tuán)使 DNA分子上的堿基及磷酸部分烷化， DNA復(fù)制時(shí)導(dǎo)致堿基配對錯(cuò)誤而引起突變。 ? 由于羥胺是誘發(fā) G:C A:T的專一性誘變劑，因此，可以用來鑒別突變體是 A:T G:C還是 G:C A:T轉(zhuǎn)換。 22 2. 羥化劑 ? 羥胺（ hydroxylamine）是典型的羥化劑 ? 羥胺的分子式為 NH2OH（簡稱 HA） ,常以鹽酸羥胺形式存在（分子式為 NH2OH于 35— 37℃ 處理 5— 10min、加入 5倍的 酸氫二鈉溶液，使 pH下降到 。于 25— 26℃ 保溫 10—20min，加入 、 20ml，使pH下降至 ，以終止反應(yīng)。 據(jù)報(bào)道，如果菌體先用 5BU等堿基類似物進(jìn)行處理，使它們首先滲入到 DNA分子中，然后用輻射線照射，誘變效果會比單獨(dú)使用輻射線更好。 ?細(xì)菌采用對數(shù)期的細(xì)菌，霉菌、放線菌采用孢子，但要進(jìn)行前培養(yǎng)，使孢子處于萌動狀態(tài)，并要加大 5BU的濃度，處理過程要進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。 ? 主要誘變劑 ： 5溴尿嘧啶（ 5BU） /T 2氨基嘌呤（ 2AP） /A ? 誘發(fā)的突變 ： AT GC的 轉(zhuǎn)換 。 ? 誘變劑 mutagen ： 凡是能誘發(fā)生物基因突變，且突變頻率遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過自發(fā)突變率的物理因子或化學(xué)物質(zhì) 。 ? 在第二次世界大戰(zhàn)中，又發(fā)現(xiàn)化學(xué)物質(zhì)氮芥也能導(dǎo)致細(xì)菌性狀變異，其效應(yīng)與 X射線相類似。 ? 陸續(xù)發(fā)現(xiàn)許多物理因子與化學(xué)物質(zhì)都具有誘發(fā)基因突變的作用。 ? 誘變劑種類： 化學(xué)誘變劑、物理誘變劑和生物誘變劑 4 第一節(jié) 化學(xué)誘變劑 ? 定義： 一類能對 DNA起作用，改變 DNA結(jié)構(gòu)，并引起遺傳變異的化學(xué)物質(zhì)。 1. 2. 6 ? 在 DNA復(fù)制過程中取代正常堿基，整合進(jìn)DNA分子 ? 它們產(chǎn)生異構(gòu)體的頻率高，出現(xiàn)堿基錯(cuò)配的概率也高 堿基類似物是如何提高突變頻率的 ? （一）堿基類似物的誘變機(jī)制 —— 現(xiàn)以 5BU為例來分析堿基類似物的誘變機(jī)制。 12 2氨基嘌呤（ 2AP） ? 比較容易誘發(fā) AT→GC這一轉(zhuǎn)換 13 A 2 A P 2 A P * GT T C C（二）堿基類似物的誘變處理方法（以 5BU為例） 5BU是白色結(jié)晶粉末，能溶于水或乙醇。因此，堿基類似物也是一種輻射誘變的增敏
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