微生物的誘變育種ppt課件(完整版)
【正文】 高劑量，然后逐步使用較溫和的誘變劑或低劑量處理； ? (5) 多核細(xì)胞菌株，采用較高劑量更合適。 優(yōu)點(diǎn) 2：大幅度增加篩選量 不足：培養(yǎng)條件與發(fā)酵條件有較大距離，易漏篩 ? 解決辦法：制備瓊脂塊用發(fā)酵培養(yǎng)基 分離和篩選 2. 平板菌落預(yù)篩 ? 搖瓶培養(yǎng)通常分為初篩和復(fù)篩。 數(shù)據(jù)調(diào)整與菌株特性分析 表型 =基因型＋環(huán)境 改變環(huán)境條件（調(diào)整培養(yǎng)配方和培養(yǎng)條件），使變株得到充分表達(dá)的機(jī)會(huì)，使高產(chǎn)性狀及其他優(yōu)良特性完全發(fā)揮出來(lái)， 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的調(diào)整 ? 1 正交的含義 ? 數(shù)學(xué)上：是把各個(gè)因素 (如培養(yǎng)基中各種組成成分 )的不同水平 (各組成成分的不同含量 )相互只遇一次的搭配， ? 正交設(shè)計(jì)：在任意兩因素間保持因素水平的嚴(yán)密正交性。 ? 3. 菌株遺傳物質(zhì)特性，如染色體結(jié)構(gòu)、基因圖譜等，也值得分析。 (5) 通過(guò) 2022多株菌的定向篩選，最后選出了不用乳糖和玉米漿為原料，發(fā)酵周期為 207h，發(fā)酵單位在 37000U/ml以上的高產(chǎn)變株。 ? (2) 營(yíng)養(yǎng)缺陷型鑒定步驟 ? ① 缺陷型類別的測(cè)定 ? a: 氨基酸混合物、酪素水解物或蛋白胨，代表氨基酸 ? b: 酵母浸出液，其中氨基酸、維生素、嘌呤、嘧啶均有 ? c: 維生素混合物，代表維生素類 ? d: 核酸堿基混合液或酵母核酸，代表嘌呤、嘧啶類 營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的分離和篩選 ? ② 缺陷型所需生長(zhǎng)因子的測(cè)定 營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的分離和篩選 ?(2) 營(yíng)養(yǎng)缺陷型鑒定步驟 – 4. 營(yíng)養(yǎng)缺陷型的鑒定 A－ 10 B－ 7 C－ 14 1. 生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用 ? (1) 用于工業(yè)微生物育種，協(xié)助解除代謝反饋調(diào)控機(jī)制，達(dá)到大量積累終產(chǎn)物的目的。 ? 必需基因突變的溫敏株：非許可溫度下， MM和CM中均不生長(zhǎng)。 ? 實(shí)際工作中，有時(shí)會(huì)把細(xì)胞的溶源性引起的免疫性誤認(rèn)為抗性 ? 區(qū)分方法：采用誘變因子誘導(dǎo)菌株，如果是溶源菌將釋放噬菌體。 ： 核染色體上整合有前噬菌體并能正常生長(zhǎng)繁殖而不被裂解的細(xì)菌。 ? 有時(shí)非必需基因突變也可產(chǎn)生溫敏突變株，但這類突變株在非許可溫度下生長(zhǎng)時(shí)，需要補(bǔ)充其他條件，如生長(zhǎng)因子等。 營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的分離和篩選 (4) 限量補(bǔ)充培養(yǎng)法 ? 限量培養(yǎng)：含 ％蛋白胨的基本培養(yǎng)基，用于檢出營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株。最終選出大米粉為碳氮源的種子和發(fā)酵培養(yǎng)基。 查 F分布表得臨界值 F (2, 11)=, FA、 FB、 FC的值均大于 ，說(shuō)明因素A、 B、 C的各水平對(duì)灰黃霉素發(fā)酵特性的影響均有極顯著的差異。 所以，對(duì)搖瓶發(fā)酵液的測(cè)試數(shù)據(jù)要盡量應(yīng)用生物學(xué)統(tǒng)計(jì)方法來(lái)處理，以便從復(fù)雜的差異中，去偽存真，找出其中的規(guī)律性。 誘變育種的基本環(huán)節(jié) 1. 常規(guī)篩選程序 誘變育種的基本環(huán)節(jié) 2. 簡(jiǎn)便篩選程序 誘變育種的基本環(huán)節(jié) 1. 隨機(jī)篩選 ? 即搖瓶篩選 ? 優(yōu)點(diǎn)：不管種子或發(fā)酵過(guò)程的生產(chǎn)條件、生理?xiàng)l件如何，都與發(fā)酵罐大生產(chǎn)條件相近，可以模擬進(jìn)行。 遺傳不穩(wěn)定的 :先選優(yōu)良出發(fā)菌株 ,后溫和誘變 ? (3) 參考出發(fā)菌株原有的誘變系譜來(lái)選擇誘變劑 通常做法：取幾種誘變劑，各取不同劑量做一系列誘變?cè)囼?yàn)，挑選處理后的菌落上千個(gè)，進(jìn)行生產(chǎn)能力的測(cè)定，作出生產(chǎn)能力分布狀況，然后分別統(tǒng)計(jì)它們的正突變株、負(fù)突變株和穩(wěn)定株的頻率。 出發(fā)菌株的純化 1. 供試菌株的孢子或菌體要年輕、健壯 ? 細(xì)胞生理活性方面既要同步，又要處于最旺盛的對(duì)數(shù)期。 ? 其它原因：非遺傳因素，如培養(yǎng)基組成或培養(yǎng)條件的改變等 ? 非遺傳因素產(chǎn)生的“變異”是一種假變異，不能遺傳；菌種重新移回原來(lái)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，形態(tài)可恢復(fù)原狀。第七章 工業(yè)微生物誘變育種 第一節(jié) 誘變育種的試驗(yàn)設(shè)計(jì)和準(zhǔn)備工作 第二節(jié) 誘變育種的步驟與方法 第三節(jié) 突變株的分離與篩選 第四節(jié) 營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的篩選 第五節(jié) 溫敏突變株的篩選 第六節(jié) 抗噬菌體菌株的選育 概念： 選用 理、化致變劑處理均勻而分散的微生物細(xì)胞群，促使其突變率顯著提高；采用簡(jiǎn)便、快速和高效的篩選法篩選出少數(shù)符合育種目的的突變株來(lái)供生產(chǎn)實(shí)踐與研究應(yīng)用。 為了研究遺傳因素引起的不同菌落類型，應(yīng)盡量避免非遺傳因素引起的菌落形態(tài)變化，以免魚(yú)目混珠、干擾試驗(yàn)結(jié)果。 ? 對(duì)于細(xì)菌來(lái)說(shuō)，常常通過(guò)前培養(yǎng)達(dá)到要求。 誘變劑及誘變劑量 2. 最適誘變劑量的選擇 (2) 最大形態(tài)變異率的劑量不一定是誘發(fā)正變的最適劑量。 ? 缺點(diǎn)：在突變率小的情況下，如果菌落挑取少，很難篩選到理想的突變株。 ? 在試驗(yàn)過(guò)程中的每個(gè)階段，都要周密地觀察并記錄菌株特性。 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的調(diào)整 ? 1. 以同工酶 (Isoenzyme) 作為一種生化指標(biāo)，研究各種突變株，以便從分子水平分析
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