微生物的誘變育種ppt課件-資料下載頁
2025-05-03 23:19本頁面
【正文】 nt, TS突變株 )是一類條件致死突變株： ? 在許可的溫度下能正常生長，表型和野生型沒有區(qū)別； ? 在非許可的溫度下不能正常生長，表型和野生型不同。 ? 2. TS突變株的形成原因： ? 主要由必需基因突變所導致的基因產(chǎn)物 (如酶 )的結構發(fā)生改變而引起的，即酶蛋白一級結構發(fā)生改變，而酶的活性中心并未發(fā)生變化。 ? 有時非必需基因突變也可產(chǎn)生溫敏突變株，但這類突變株在非許可溫度下生長時，需要補充其他條件，如生長因子等。 ? 3. TS突變株由許可溫度轉入非許可溫度培養(yǎng)時，并不會立即停止生長繁殖，這是工業(yè)發(fā)酵所利用的重要生理生化特性。 溫敏突變株的特性 ? 由于此類突變株主要由基因錯義突變所致，所以使用誘變劑時，要選擇易于引起堿基臵換的亞硝基類、磺酸酯類化合物，或亞硝酸、紫外線等誘變劑。 2. 富集 ? 1. 抗生素法 ? 2. 過濾或離心法 ? 3. H3－前體法 溫敏突變株的篩選方法 3. 分離篩選 ? 1. 常規(guī)法 ? 非必需基因突變溫敏株：非許可溫度， MM中不長，CM中生長。 ? 必需基因突變的溫敏株：非許可溫度下， MM和CM中均不生長。 ? 2. 特殊分離篩選方法 ? 例：由甲醇和甘氨酸合成高產(chǎn)絲氨酸菌株的篩選： ? 首先篩選絲氨酸降解代謝障礙的 TS突變株 ? 然后排除 C4二羧酸分解代謝障礙的 TS突變株 溫敏突變株的篩選方法 1. 溫敏突變株在谷氨酸發(fā)酵中的應用 溫敏突變株在發(fā)酵工業(yè)中的應用 ?2. 溫敏突變株在絲氨酸發(fā)酵中的應用 溫敏突變株在發(fā)酵工業(yè)中的應用 ? 3. 微生物單細胞蛋白的生產(chǎn) ? 優(yōu)良菌種篩選的要求： ? 富含蛋白質； ? 生長迅速，底物利用率高； ? 菌體細胞壁易破碎，容易自溶； ? 細胞蛋白質中的蛋氨酸含量高，提高單細胞蛋白質的營養(yǎng)價值 溫敏突變株在發(fā)酵工業(yè)中的應用 第六節(jié) 抗噬菌體菌株的選育 ?噬菌體是寄生于微生物細胞內(nèi)的一種病毒，其繁殖過程可分為：對寄主的吸附、侵入、增殖、成熟和裂解五個階段。 1. 概念： 短時間內(nèi)能連續(xù)完成生活史五個階 段而實現(xiàn)繁殖和裂解寄主的噬菌體。 2. 分離和效價測定方法 ? (1) 重層瓊脂法 ? (2) 單層平板法 ? (3) 快速測定法 ? (4) 斑點試驗法 烈性噬菌體及其效價的測定 ： 侵入宿主后，噬菌體 DNA只整合在宿主的染色體組上，并長期隨宿主 DNA的復制而復制，在一般情況下不進行增殖和引起宿主細胞裂解。 ： 核染色體上整合有前噬菌體并能正常生長繁殖而不被裂解的細菌。 溫和噬菌體及溶源菌 ? 3. 溶源菌的顯著特性： ? (1) 自發(fā)裂解：頻率較低 10－ 1～ 10－ 4。 ? (2) 誘導 ? (3) 復愈 ? (4) 免疫性 ? (5) 溶源轉變 ? 4. 溶源菌的檢驗方法 ? 將少量溶源菌與大量敏感性指示菌混合后鋪平板培養(yǎng)，可能產(chǎn)生中央有溶源菌的小菌落、四周有透明圈的特殊噬菌斑。 溫和噬菌體及溶源菌 ? 1. 專一性噬菌體獲得和純化：選擇因子 ? 2. 高效價噬菌體原液的制備 ? 3. 噬菌體原液效價測定：重層瓊脂法 ? 4. 菌株誘發(fā)突變和分離 ? 5. 液體搖瓶振蕩培養(yǎng) ? 6. 進一步考查抗性菌株對周圍環(huán)境中存在的各種噬菌體的抗性 抗噬菌體菌株的選育 ? 1. 抗性菌株穩(wěn)定性試驗 ? 菌株抗性產(chǎn)生的原因： ? 基因突變引起細胞結構改變，使噬菌體難以吸附和入侵； ? 細胞生理代謝的改變，即使噬菌體入侵，也不能在細胞內(nèi)繁殖。 ? 實際工作中，有時會把細胞的溶源性引起的免疫性誤認為抗性 ? 區(qū)分方法：采用誘變因子誘導菌株，如果是溶源菌將釋放噬菌體。 ? 2. 抗性菌株的產(chǎn)量性能 抗性菌株的特性研究 ? 1. 菌種 ? 金霉素鏈霉素 849號菌株 ? 2. 培養(yǎng)基成分 ? 3. 噬菌體的分離純化和原液制備 ? 4. 噬菌體菌株的選育 ? 5. 菌株抗噬菌體性能的檢驗 ? 6. 搖瓶發(fā)酵試驗 ? 7. 發(fā)酵罐發(fā)酵試驗 抗噬菌體菌株選育實例 小 結 ?試驗設計和準備工作：了解出發(fā)菌株 ?誘變育種的步驟與方法：出發(fā)菌株 誘變劑及誘變劑量 誘變劑的處理方式 ?突變株的分離與篩選：分離和篩選 搖瓶液體培養(yǎng) 產(chǎn)物活性測定 數(shù)據(jù)調(diào)整與分析 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的調(diào)整 ?營養(yǎng)缺陷型菌株的篩選 ?溫敏突變株的篩選 ?抗噬菌體菌株的選育
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