微生物的遺傳變異和育種(3)-資料下載頁
2025-01-14 00:14本頁面
【正文】 合轉(zhuǎn)移 F+xF=2F+ Hfr x F= Hfr+F 通過人工的方法，使遺傳性狀不同的兩細(xì)胞的原生質(zhì)體發(fā)生融合并產(chǎn)生重組體的過程稱為原生質(zhì)體融合（ protoplast fusion） 。 微生物細(xì)胞融合的研究開始于 1976年。其一般原理和主要過程是：先準(zhǔn)備兩個(gè)有選擇性遺傳標(biāo)記的突變株，在高滲溶液中，用適當(dāng)?shù)拿摫诿溉コ?xì)胞壁，再將形成的原生質(zhì)體離心聚集，并加入促融合劑 PEG(聚乙二醇 )促進(jìn)融合，然后在高滲溶液中稀釋，涂在能使其再生細(xì)胞壁或進(jìn)行分裂的培養(yǎng)基上，待形成菌落后，通過影印接種法，將其接種到各種選擇性培養(yǎng)基上，最后鑒定它們是否是重組子。 原生質(zhì)體融合操作過程 第四節(jié) 真菌的基因重組 一 、 有性生殖 粗糙脈孢菌的子囊孢子在子囊中的排列有六種方式 AAAAaaaa aaaaAAAA AAaaAAaa aaAAaaAA AAaaaaAA aaAAAAaa 接合型基因座 (A或 a)與著絲粒之間未發(fā)生染色體交換 接合型基因座 (A或 a)與著絲粒之間發(fā)生了染色體交換 粗糙脈孢菌的有性雜交 二、準(zhǔn)性生殖 準(zhǔn)性生殖是一種類似于有性生殖 ， 但比它更為原始的一種生殖方式 ， 它可使同種生物不同菌株的體細(xì)胞發(fā)生融合 ， 不經(jīng)過減數(shù)分裂的方式而導(dǎo)致低頻率的基因重組并產(chǎn)生重組子 。 ?生殖： 準(zhǔn)性生殖包括 下面四個(gè)過程 : ①菌絲聯(lián)結(jié) ②異核體形成 ③核配 ④體細(xì)胞交換和 單倍體化四個(gè) 階段。 在準(zhǔn)性生殖中 ,有絲分裂產(chǎn)生非整倍體核 ,非整倍體核在繼續(xù)分裂中丟失染色體 ,導(dǎo)致重組單倍體的發(fā)生 在準(zhǔn)性生殖中 ,有絲分裂時(shí)雜合二倍體染色體的偶然交換會(huì)導(dǎo)致基因重組的發(fā)生 準(zhǔn)性生殖和有性生殖的比較 比 較項(xiàng)目 準(zhǔn)性生殖 有性生殖 參與接合的親本細(xì)胞 形態(tài)相同的體細(xì)胞 形態(tài)或生理上有分 化 的性細(xì)胞 獨(dú)立生活的異核體階段 有 無 接合后雙倍體的細(xì)胞形態(tài) 與單倍體基本相同 與單倍體明顯不同 雙倍體變?yōu)閱伪扼w的途徑 通過有絲分裂 通過減數(shù)分裂 接合發(fā)生的幾率 偶然發(fā)現(xiàn)，幾率低 正常出現(xiàn)，幾率高 幾種代表性質(zhì)粒： ? 1. F–因子（ fertility factor） ： 又稱致育因子或性因子， 62 106Dalton， ，相當(dāng)于核染色體 DNA2%的環(huán)狀雙鏈DNA， 足以編碼 94個(gè)中等大小多肽，其中 1/3基因（ tra區(qū)）與接合作用有關(guān)。存在于腸細(xì)菌屬、假單胞菌屬、嗜血桿菌、奈瑟氏球菌、鏈球菌等細(xì)菌中，決定性別。 最初發(fā)現(xiàn)于痢疾志賀氏菌（ Shigella dysenteriae）， 后來發(fā)現(xiàn)還存在于 Salmonella、 Vibrio、 Bacillus、 Pseudomonas和Staphylococcus中。 –R因子由相連的兩個(gè) DNA片段組成，即抗性轉(zhuǎn)移因子（ resistence transfor factor， RTF ） 和抗性決定 R因子（ rdeterminant）， RTF為分子量約為 11 106Dalton，控制質(zhì)粒 copy數(shù)及復(fù)制，抗性決定質(zhì)粒大小不固定，從幾百萬到 100 106Dalton以上。其上帶有其它抗生素的抗性基因。 –R因子在細(xì)胞內(nèi)的 copy數(shù)可從 1~2個(gè)到幾十個(gè)，分為嚴(yán)緊型和松弛型兩種，經(jīng)氯霉素處理后，松弛型質(zhì)?？蛇_(dá)2022~3000個(gè) /細(xì)胞。 2. R因子（ resistence factor） ? 產(chǎn)大腸桿菌素因子。 ? 大腸桿菌素是由 ，能通過抑制復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯或能量代謝等而專一地殺死其它腸道細(xì)菌。其分子量約 4 104~8 104Dalton。 大腸桿菌素都是由 Col因子編碼的。 ? Col因子可分為兩類，分別以 ColE1和 ColIb為代表。 ? ColE1分子量約為 5 106Dalton， 無接合作用，是多copy的； ColE1研究得很多，并被廣泛地用于重組DNA 的研究和用于體外復(fù)制系統(tǒng)上。 ? ColIb分子量約為 80 106Dalton， 它與 F因子相似， 具有通過接合作用轉(zhuǎn)移的功能，屬于嚴(yán)緊型控制，只有1~2個(gè) copy。 ? 凡帶 Col因子的菌株，由于質(zhì)粒本身編碼一種免疫蛋白，從而對(duì)大腸桿菌素有免疫作用，不受其傷害。 ?3. Col因子 （ colicinogenic factor） ?降解性質(zhì)粒 – 只在假單胞菌屬中發(fā)現(xiàn)。它們的降解性質(zhì)?？蔀橐幌盗心芙到鈴?fù)雜物質(zhì)的酶編碼，從而能利用一般細(xì)菌所難以分解的物質(zhì)做碳源。這些質(zhì)粒以其所分解的底物命名，例如有分解 CAM（ 樟腦）質(zhì)粒， XYL（ 二甲苯）質(zhì)粒，SAL（ 水楊酸）質(zhì)粒， MDL（ 扁桃酸）質(zhì)粒，NAP（ 奈）質(zhì)粒和 TOL（ 甲苯）質(zhì)粒等。 4. 降解性質(zhì)粒 ? 即誘癌質(zhì)粒。 ? 存在于根癌土壤桿菌（ Agrobacterium tumefaciens） 中 ,可引起許多雙子葉植物的根癌 ? 。當(dāng)細(xì)菌侵入植物細(xì)胞中后，在其細(xì)胞中溶解，把細(xì)菌的 DNA釋放到植物細(xì)胞中。這時(shí)，含有復(fù)制基因的 Ti質(zhì)粒的小片段與植物細(xì)胞中的核染色體發(fā)生整合，破壞控制細(xì)胞分裂的激素調(diào)節(jié)系統(tǒng)，從而使它轉(zhuǎn)變成癌細(xì)胞。 ? Ti質(zhì)粒長 200kb， 是一個(gè)大型質(zhì)粒。當(dāng)前， Ti質(zhì)粒已成為植物遺傳工程研究中的重要載體。一些具有重要性狀的外源基因可借 DNA重組技術(shù)設(shè)法插入到 Ti質(zhì)粒中，并進(jìn)一步使之整合到植物染色體上，以改變該植物的遺傳性，達(dá)到培育植物優(yōu)良品種的目的。 ?5. Ti質(zhì)粒 （ tumor inducing plasmid）
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