【正文】 ?噬菌體對供體菌和受體菌都是溫和噬菌體 ?只能轉(zhuǎn)導供體菌的個別特定基因（一般為噬菌體整合位點兩側(cè)的基因） ?該特定基因由部分缺陷的噬菌體攜帶 局限轉(zhuǎn)導的過程 溫和噬菌體的不正常切離 部分缺陷的溫和噬菌體感染受體菌 低頻轉(zhuǎn)導 ?一般的轉(zhuǎn)導現(xiàn)象中，從宿主染色體上切離時發(fā)生不正常切離的頻率極低，故這種裂解物中的部分缺陷噬菌體的比例是極低的（ 10 – 4 ~ 10 – 6）。把這種裂解物稱為 LFT（低頻轉(zhuǎn)導）裂解物 。 ? LFT裂解物以 低 m. o. i（感染復數(shù)） 感染宿主，就可獲得極少量的局限轉(zhuǎn)導子，即低頻轉(zhuǎn)導。 ? dgal+/ ?（雙重溶源菌） ?(50%) + ?dgal+（ 50%） (受體菌 ) 高頻轉(zhuǎn)導 高頻轉(zhuǎn)導 . ?dgal+ 轉(zhuǎn)導子 噬菌斑 溶源轉(zhuǎn)變 ?概念：當溫和噬菌體感染宿主而使其發(fā)生溶源化時，因噬菌體的基因整合到宿主的核基因組上，而使后者獲得了除免疫性以外的新性狀的現(xiàn)象，稱為溶源轉(zhuǎn)變。 ?性質(zhì)：表面上與轉(zhuǎn)導相似，而本質(zhì)上不同于轉(zhuǎn)導。 ?區(qū)別： ?溫和噬菌體不攜帶來自供體菌的外源基因，是噬菌體自身基因使宿主獲得新性狀 ?溫和噬菌體使完整的，不是缺陷的 ?獲得新性狀的是溶源化的宿主細胞，不是轉(zhuǎn)導子 ?當宿主喪失其原噬菌體時，通過溶源轉(zhuǎn)變而獲得的新性狀也隨之消失 典型實例 Corynebacterium diphtheriae（白喉棒桿菌）：白喉毒素 /?溫和噬菌體 Clostridium botulinum（肉毒梭菌）： C型或D型肉毒毒素 Salmonella anatum（鴨沙門氏菌）：細胞表面多糖 /E15噬菌體 Streptomyces erythreus（紅霉素鏈霉菌）：合霉素合成和氣生菌絲形成 /P4溫和噬菌體 原生質(zhì)體融合 ? 原生質(zhì)體融合：去除細胞壁的原生質(zhì)體在高滲條件下混合 ，用物理或化學方法誘導 ， 通過細胞質(zhì)融合 ， 基因組接觸 、 交換 ， 從而發(fā)生基因組的遺傳重組 。 ? 可以沖破種 、 屬的界線 ， 廣泛地在有生產(chǎn)價值的微生物種間以至屬間進行雜交育種； ? 原生質(zhì)體融合后 ， 兩個親株的整套基因組相互接觸 ， 可以有機會發(fā)生多次交換 ， 產(chǎn)生各種各樣的基因組合而得到多種類型的重組子 ? 重組頻率高 ? 融合工作要求設(shè)備條件不高 ， 一般實驗室都可以進行 。 原生質(zhì)體融合育種的優(yōu)點 原生質(zhì)體融合實例 ? 以酒精酵母和熱帶假絲酵母為親本 ,獲得了既具有糖化酶活性又能高產(chǎn)酒精穩(wěn)定的酵母融合株 ,具有良好的應(yīng)用前景。 ? 利用發(fā)酵力強的葡萄酒酵母與降酸能力強 ,發(fā)酵性能好的杰酒裂母融合 , 獲得的融合子降酸率可達 30 4%,比葡萄酒酵母的降酸性提高 20%。 ? 將能夠分解纖維素的木霉和從葡萄糖產(chǎn)酒精的釀酒酵母進行融合 ,得到具有很強的將濾紙纖維素轉(zhuǎn)化為酒精的融合子。 ? 酒精酵母 (Ｋ酵母 )和產(chǎn)酯酵母 (Ｆ 2)進行了屬間細胞融合 ,獲得既具有高產(chǎn)酒特性 ,又具有高產(chǎn)酯特性的發(fā)酵性能穩(wěn)定的融合子。 原生質(zhì)體融合的主要步驟： 選擇親株 → → 制備原生質(zhì)體 →→ 原生質(zhì)體融合 → → 原生質(zhì)體 再生 → → 篩選優(yōu)良性狀的融合重組子 ? 衰退（ degeneration） ：菌種在培養(yǎng)或保藏過程中，由于自發(fā)突變的存在，出現(xiàn)某些原有優(yōu)良生產(chǎn)性狀的劣化、遺傳標記的丟失等現(xiàn)象，稱為菌種的衰退。 ? 衰退的原因：①基因突變，②分離現(xiàn)象。 ? 常見的衰退現(xiàn)象： ? 菌落和細胞形態(tài)的改變； ? 生長速度緩慢，產(chǎn)孢子越來越少； ? 抵抗力、抗不良環(huán)境能力減弱等。 ? 代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力或其對宿主寄生能力下降； 第四節(jié) 菌種的衰退、復壯及保藏 ① 控制傳代次數(shù) （一般在 DNA的復制過程中，堿基的錯配率是 5x104，自發(fā)突變的頻率為 108~109） ； ②選擇合適的培養(yǎng)條件； ③采用不同類型的細胞進行傳代 （對絲狀微生物而言，通常采用穩(wěn)定的單核孢子進行接種） ； ④采用有效的菌種保藏方法。 防止菌種衰退的方法： 菌種的復壯 ：使衰退的菌種恢復原來優(yōu)良性狀。 狹義的復壯 是指在菌種已發(fā)生衰退的情況下，通過純種分離和生產(chǎn)性能測定等方法，從衰退的群體中找出未衰退的個體，以達到恢復該菌原有典型性狀的措施； 廣義的復壯 是指在菌種的生產(chǎn)性能未衰退前就有意識的經(jīng)常、進行純種的分離和生產(chǎn)性能測定工作，以期菌種的生產(chǎn)性能逐步提高。實際上是利用自發(fā)突變（正變）不斷地從生產(chǎn)中選種。 菌種的復壯（ rejuvenation） 菌種的復壯措施： ?純種分離： （平板劃線法、涂布法、傾注法、單細胞挑取法等 ） ?通過寄主體內(nèi)生長進行復壯（ 如 Bacillus thuringiensis的復壯） ?淘汰已衰退的個體 （采用比較激烈的理化條件進行處理，以殺死生命力較差的已衰退個體） ?采用有效的菌種保藏方法 微生物菌種的保藏 ? 目的 ： 保持菌種優(yōu)良的生產(chǎn)性能和生活能力，盡量減少、推遲負變，防止死亡，并確保不被污染，隨時為生產(chǎn)、科研提供優(yōu)良菌種 ? 原理 ： 選用優(yōu)良的純種，（最好是休眠體，如分生孢子、芽胞等），創(chuàng)造降低微生物代謝活動強度，生長繁殖受抑制，難以發(fā)生突變的環(huán)境條件（干燥、低溫、缺氧、缺營養(yǎng) 以及添加保護劑等），使之能長時間地保存。 菌種保藏的常用方法 ? 低溫保藏法 方法：菌種管置 4℃ 冰箱保藏 （保存時間 36個月） ，定時傳代 原理：低溫下，微生物代謝強度明顯下降 。 ? 石蠟油低溫保藏法： （保存時間 12年） 橡皮塞取代棉塞、加石蠟油。 液氮超低溫保藏法 ?將菌種置于保護劑中，預凍后保存在液氮超低溫冰箱中（ 196℃ ）。 ?適用于各種微生物的較理想的保藏方法。 （保存時間 510年） ?保護劑：甘油（ 1020%）、二甲基亞砜（ 510%） 、血清蛋白、吐溫 80、聚二烯氮戊環(huán)（ ) ?加有保護劑的菌懸液在凍結(jié)狀態(tài)下予以真空干燥 ,然后真空狀態(tài)下密封瓶口隔絕氧氣，置于低溫下保藏。 ?適用于各種微生物，便于大量保藏，菌種存活時間長（保存時間 510年） ，是目前最好的保藏方法。 真空冷凍干燥法 干燥保藏法 ? 沙土管保藏法 ? 沙土制備： 選取黃沙土 ——10%鹽酸浸泡 4h，沖洗至中性 ——烘干 ——過篩（ 60目） ——除掉鐵質(zhì) 地表土壤 —10%鹽酸浸泡 4h，沖洗至中性 ——烘干 ——過篩（ 120目） ——除掉鐵質(zhì) 黃沙土與地表土壤按 1： 1或 3： 2混合，裝入試管（ ~)加塞，滅菌 ——烘干 ? 菌種制備：生長健壯、孢子豐滿 ? 埋沙土適量的無菌水洗下孢子 孢子懸液（ 108個 /ml).取`，抽真空（ 4h） ? 低溫干燥保藏。（保藏期 2~5年）。 ? 麩皮保藏：麩皮：水 =1： ~ ? 大、小米保藏。 菌種保藏的注意事項 ?保藏的菌種要用良好的培養(yǎng)基，采用新鮮培養(yǎng)的菌體，健壯的菌體，豐滿的孢子，適宜的菌齡。細菌要求在穩(wěn)定期，孢子要充分成熟。 ?移接孢子要控制孢子量，不要過多過密。 ?嚴格無菌操作，以防污染。 ?保藏菌種恢復培養(yǎng)時，要移接到保藏以前所用的同一培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，以維持優(yōu)良形狀的穩(wěn)定