微生物遺傳學(xué)ppt課件(2)-資料下載頁
2025-05-03 23:20本頁面
【正文】 （ 4）自發(fā)回變 （ 5）回變特性 ——診斷性試驗 ? 應(yīng)用： 1．斑點試驗只局限于能在瓊脂上擴散的化學(xué)物質(zhì)，大多數(shù)多環(huán)芳烴和難溶于水的化學(xué)物質(zhì)均不適宜用此法。此法敏感性較差，主要是一種定性試驗，適用于快速篩選大量受試化合物。 2．平板摻入試驗可定量測試樣品致突變性的強弱。此法較斑點試驗敏感，獲陽性結(jié)果所需的劑量較低。點試獲陽性結(jié)果的濃度用于摻入試驗（每皿 ），往往出現(xiàn)抑（殺）菌作用。 3．致變作用遲緩或有抑菌作用的試樣，培養(yǎng)時間延長至 72h。 4．揮發(fā)性的液體和氣體試樣，可用干燥器內(nèi)試驗法進行測試。 5．目前， Ames試驗作為檢測環(huán)境誘變劑的一組試驗中的首選試驗，廣泛應(yīng)用于致突變化學(xué)物的初篩。但是，與今天快信息、高效率的社會要求相比，該試驗程序還嫌繁瑣，方法不夠簡便，有待于創(chuàng)建新的更為快速靈敏、簡單易行的環(huán)境誘變劑短期生物測試法。 ? 用途：廣泛用于檢測環(huán)境和食品中是否存在化學(xué)致癌物。 ? 特點：快速、準(zhǔn)確、費用廉價 三、 DNA損傷的修復(fù) 除了 DNA聚合酶進行校正外，還通過幾種不同的機制進行 DNA的修復(fù)： 187。(1) 光復(fù)活作用 187。(2) 切除修復(fù) 187。(3) 重組修復(fù) 187。(4) SOS修復(fù) 紫外線誘變時必須在暗室、紅光下進行 （ 1）光復(fù)活作用（ photoreactivation） 可見光可大大降低經(jīng)紫外線照射后微生物死亡率的現(xiàn)象。 機理： 經(jīng) UV照射后帶有嘧啶二聚體的 DNA分子，在黑暗中會和一種光激活酶 —— 光解酶結(jié)合，形成酶 ‐ DNA復(fù)合物，該復(fù)合物暴露在可見光下時，光解酶會因獲得光能而被激活，并使二聚體重新分解成單體，光解酶也從復(fù)合物中釋放出來，再結(jié)合到其它二聚體上。 這種修復(fù)機制不是移去和取代核苷酸，而是胸腺嘧啶二聚體直接被修復(fù)，所以是一種無錯誤的修復(fù)。 （ 2）切除修復(fù)（ excision repair， 又稱暗修復(fù)） 一種普遍的修復(fù)系統(tǒng)。能移去胸腺嘧啶二聚體和修復(fù)大多數(shù)引起的 DNA扭曲損傷。該修復(fù)系統(tǒng)不需要可見光，通過酶切作用移去損傷的堿基（包括損傷位點附近的一些堿基），隨后合成一段正常 DNA鏈。 內(nèi)切核酸酶 4種酶參與 外切核酸酶 DNA聚合酶 DNA連接酶 （ 3）重組修復(fù) 這是一種越過損傷而進行的修復(fù)。這種修復(fù)不將損傷的堿基除去，而是通過復(fù)制后，經(jīng) 染色體交換，使子鏈上的空隙部位不再面對著嘧啶二聚體，而是面對著正常的單鏈，在這種情況下， DNA聚合酶和連接酶便能起作用，把空隙部分進行修復(fù)。留在親鏈上的二聚體仍要依靠再一次的切除修復(fù)加以除去，或經(jīng)細胞分裂而稀釋掉。 ? (4) SOS修復(fù) – 這是在 DNA分子受到較大范圍的重大損傷時誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種應(yīng)急反應(yīng)。涉及幾個基因： recA、 lexA、 uvrA、uvrB、 uvrC的共同作用。 – 此外，經(jīng)紫外線照射的大腸桿菌還可能誘導(dǎo)產(chǎn)生一種稱為錯誤傾向（ errorprone）的 DNA聚合酶，催化空缺部位的 DNA修復(fù)合成，但由于它們識別堿基的精確度低，所以容易造成復(fù)制的差錯，這是一種以提高突變率來換取生命存活的修復(fù)，又稱錯誤傾向的 SOS修復(fù)。
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