微生物的遺傳變異-資料下載頁
2024-12-28 22:45本頁面
【正文】 0。涂平板（原生質體再生）形成菌落檢出重組子菌落（ A+B+）轉基因工程菌株的構建167。 1．提取目的基因 用密度梯度離心方法分別從供體細胞中提取所需要的 DNA即目的基因和作為載體的細菌質?；蚴删w核酸，目的基因也可通過化學方法人工合成。167。 2．處理目的基因 根據(jù)基因工程的 “ 設計藍圖 ” 的要求，在從供體細胞中提取出的目的基因中加入專一性很強的限制性核酸內切酶進行處理，從而獲得帶有特定基因并暴露出粘性末端的DNA單鏈部分。必要時這種粘性末端也可用人工方法合成。167。 對作為載體的細菌質?；蚴删w DNA可采用與處理目的基因同一種類的限制性核酸內切酶進行處理，使其形成并暴露出與目的基因相應的粘性末端。167。 3．體外重組 將上述分別處理過的目的基因和細菌質粒 DNA片段（或噬菌體核酸）放在試管中，在較低溫度（ 5～ 6℃ ）下混合 “ 退火 ” 。由于這兩種 DNA是用同一種限制性核酸內切酶進行處理，具有相同的粘性末端，因此相互之間能夠形成氫鍵，這就是所謂 “ 退火 ” 。而相鄰的核苷酸，在 DNA連接酶的作用下也能形成磷酸二酯鍵，這樣就完成了目的基因與質粒 DNA（或噬菌體 DNA）的重組，得到的是一個完整的具有復制能力的環(huán)狀 DNA重組體，即 “ 雜種質粒 ” （或雜種噬菌體）。167。 4．載體傳遞 即通過載體將供體生物中的遺傳基因導入到受體細胞內。載體必須具有自我復制的能力，一般可利用質粒的轉化作用或噬菌體的轉導作用，將供體基因帶入受體細胞內。167。 5．復制、表達 在理想情況下，進入受體細胞內的雜種質粒（或雜種噬菌體），可通過自我復制到擴增，并使受體細胞表達出作為供體細胞所固有的部分遺傳性狀，成為 “ 工程菌 ” 。167。 6．篩選、繁殖 當前，由于分離純凈的基因功能單位還很困難，所以通過重組后的 “ 雜種質粒 ” 的性狀是否都符合原定的 “ 設計藍圖 ” ，以及它能否在受體細胞內正常增殖和表達等，都還需要經過仔細檢查，以便能在大量個體中設法篩選出所需要性狀的個體，然后才可加以繁殖和利用。第五節(jié) 微生物菌種的保藏和復壯一、菌種的保藏 1．低溫保藏法 斜面菌種直接放入 0～ 4℃ 冰箱中保藏，保存時間不宜過長，一般為 3～ 6個月； 用 20℃ 以下的超低溫冰箱或干冰、液氮（ 195℃ ）凍結保藏，長達數(shù)年。 2．干燥保藏法 主要是指把菌種接種到適當載體上，在干燥條件下進行保藏。這種保藏方法主要適合于細菌的芽胞和霉菌的孢子。細菌芽胞用沙土管保藏；霉菌的孢子多用麩皮管保藏。3．隔絕空氣保藏法 用固體石蠟密封試管口以隔絕空氣， 4．真空冷凍干燥保藏法 其基本過程是：培養(yǎng)菌種 → 加菌種保護劑（一般食品工業(yè)用菌種多用牛乳作保護劑） → 分裝、預凍 → 真空凍干 → 真空封口。 5．寄主保藏法 用常規(guī)方法保藏的動植物病原菌和病毒。 第五節(jié) 微生物菌種的保藏和復壯二、菌種的退化與復壯（一） 常見的菌種退化現(xiàn)象（二） 菌種退化的原因 菌種退化的主要原因是有關基因的負突變。 （三） 防止菌種退化的措施 1．控制傳代次數(shù) 2．創(chuàng)造良好的培養(yǎng)條件 3．利用不同類型的細胞進行移種傳代 4．采用有效的菌種保藏方法 （四） 退化菌種的復壯謝謝觀看 /歡迎下載BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAI
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