微生物的遺傳變異和育種(9)-資料下載頁(yè)
2025-01-18 01:30本頁(yè)面
【正文】 自主復(fù)制；② 具有便于外源 DNA的插入和限制酶作用的單一切割位點(diǎn)；③ 必須具有可供選擇的遺傳標(biāo)記，例如具有對(duì)抗生素的抗性基因，便于對(duì)陽性克隆的鑒別和篩選。 ? 基因工程中使用的載體基本上均來自微生物，主要包括 6大類：質(zhì)粒載體； λ噬菌體載體；柯斯質(zhì)粒載體； M13噬菌體載體；真核細(xì)胞的克隆載體；人工染色體等。 ? 有條件作為載體的，對(duì)原核受體細(xì)胞來說，主要有細(xì)菌質(zhì)粒（松弛型）和 λ噬菌體兩類 – 對(duì)真核微生物受體來說，主要有 SV4O病毒 ? SV4O病毒是猴體內(nèi)小型環(huán)狀雙鏈 DNA病毒 ? 對(duì)植物細(xì)胞受體來說，主要是 Ti質(zhì)粒 基因文庫(kù)與 cDNA文庫(kù)的構(gòu)建 ? 利用重組 DNA技術(shù)，可將某一原核微生物或真核微生物染色體基因組的全部遺傳信息貯存在由重組體群體（如重組噬菌體群體）構(gòu)成的基因文庫(kù)（ genomic library）或 cDNA文庫(kù)（ cDNA library）之中，猶如將文獻(xiàn)資料貯存于圖書庫(kù)一樣，以供長(zhǎng)期貯存和隨時(shí)調(diào)取克隆基因使用。 基因文庫(kù)和 cDNA文庫(kù)的構(gòu)建 ? 1）、基因文庫(kù)的構(gòu)建 所謂基因文庫(kù)是指生物染色體基因組各 DNA片段的克隆總體。文庫(kù)中的每一個(gè)克隆只含基因組中某一特定的 DNA片段。一個(gè)理想的基因文庫(kù)應(yīng)包括該生物染色體基因組全部遺傳信息即全部 DNA序列。 ? （ 2）、 cDNA文庫(kù)的構(gòu)建 所謂 cDNA文庫(kù)是指生物體全部mRNA的 cDNA克隆總體。 cDNA文庫(kù)中的每一個(gè)克隆只含一種mRNA信息。 ? 由于真核生物基因組十分龐大，因此要求構(gòu)建基因文庫(kù)的庫(kù)容量要足夠大，才能篩選到某一目的基因。但由于細(xì)胞中的 mRNA分子數(shù)要比基因組的基因數(shù)小得多（通常大約僅有 15%左右基因被表達(dá)），因而若由 mRNA逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA，那么所構(gòu)建的 cDNA文庫(kù)的庫(kù)容量相應(yīng)較基因文庫(kù)小。 重組體的篩選與鑒定 ? 在構(gòu)建文庫(kù)之后就需要從眾多的克隆中，篩選出含有目的基因的重組體，并鑒定其正確性。 – 三種鑒定方法 : – （ 1）、重組體表型特征的鑒定 – （ 2）、重組 DNA分子結(jié)構(gòu)特征的鑒定 – （ 3）、外源基因表達(dá)產(chǎn)物的鑒定 表達(dá)載體的構(gòu)建 ? 基因工程的主要目的是使外源基因能在細(xì)菌、酵母或動(dòng)、植物細(xì)胞中得到高效表達(dá)，以便獲得大量有益的基因表達(dá)產(chǎn)物或改變微生物或動(dòng)、植物的遺傳性狀。 ? 所謂表達(dá)載體（ expression vector）是指宿主細(xì)胞基因表達(dá)所需調(diào)節(jié)控制序列，能使克隆的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄和翻譯的載體。也即克隆載體只是攜帶外源基因，使其在宿主細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增；表達(dá)載體不僅可使外源基因擴(kuò)增，還可使其表達(dá)。原核生物和真核生物的表達(dá)載體有一些共同的要求，但兩者的基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制有很大不同，故需要分別采用原核生物和真核生物的調(diào)控原件來構(gòu)建。 基因工程的應(yīng)用 ? 工業(yè)上的應(yīng)用 ? 農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用 ? 醫(yī)療上的應(yīng)用 ? 環(huán)境保護(hù)中的應(yīng)用 第五節(jié)菌種的衰退、復(fù)壯和保藏 ? 菌種保藏原理 菌種保藏的基本原理是將微生物菌種保存在不利于微生物活躍生長(zhǎng)和代謝的不良環(huán)境中，如干燥、低溫、缺氧、黑暗、營(yíng)養(yǎng)饑餓等等，使微生物代謝速率極為緩慢或處于休眠狀態(tài)。而一旦恢復(fù)所保存菌種生長(zhǎng)的正常環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)條件，即可獲得具有高生理活性和保持原種優(yōu)良性狀的菌種培養(yǎng)物。 ? 菌種保藏的方法有多種多樣，常用方法簡(jiǎn)介如下： ? 培養(yǎng)物傳代保藏法 ? 低溫保藏法 ? 干燥保藏法 常用菌種保藏方法的比較 方法 原理 適宜菌種 保藏時(shí)間 特點(diǎn) 冰箱低溫（ 4℃ ） 低溫 各大類微生物 3~6個(gè)月 簡(jiǎn)便 石蠟油封藏 低溫、缺氧 各大類微生物 12年 簡(jiǎn)便 砂土保藏 干燥、無營(yíng)養(yǎng) 產(chǎn)芽孢細(xì)菌、產(chǎn)孢子的放線菌、霉菌 110年 簡(jiǎn)便有效 冷凍干燥保藏 干燥、低溫、無氧 各大類微生物 5~15年以上 繁而高效 保藏菌種的活化 ? 保藏菌種的活化是使用保藏菌種的第一步?；罨囊笫鞘贡２鼐N恢復(fù)旺盛的生命活動(dòng)和顯示其原有的代謝和生產(chǎn)性能。 ? 保藏菌種的活化必須使用保藏菌種時(shí)使用的相同培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，或以保藏菌種生長(zhǎng)和代謝最佳的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，以使保藏菌種能迅速恢復(fù)其原有的代謝速率和生理特性。
研究報(bào)告相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1