【正文】 體細(xì)胞交換（ somatic crossingover） 項(xiàng)目 準(zhǔn)性生殖 有性生殖 參與接合的親本細(xì)胞 獨(dú)立生活的異核體階段 接合后二倍體的形態(tài) 雙倍體變?yōu)閱伪扼w的途徑 接合發(fā)生的幾率 形態(tài)相同的體細(xì)胞 有 與單倍體基本相同 有絲分裂 偶爾發(fā)生、幾率低 形態(tài)或生理上有分化的性細(xì)胞 無(wú) 與單倍體明顯不同 減數(shù)分裂 正常出現(xiàn)、幾率高 準(zhǔn)性生殖與有性生殖的比較 。 準(zhǔn)性生殖常見(jiàn)于某些真菌中，如半知菌。 第五節(jié) 真菌的有性雜交和準(zhǔn)性雜交 雜交是細(xì)胞水平上發(fā)生的一種遺傳重組方式。 例如： 通過(guò)北京棒桿菌 1134衍生株（ Hser－ ， Bio－ ，Nal+， AEC r，）和枯草芽孢桿菌 BR151衍生株 （ Met－ ， Trp－ ， Rif r）之間的原生質(zhì)體融合獲得 了融合子 Q4413（ Met＋ , Trp＋ , Hser＋ ,Bio＋ , Rif r , AEC r， Nalr） 一、有性雜交（ Sexual Hybridization） 有性雜交一般指性細(xì)胞間接合和隨之發(fā)生的染色體重組，并產(chǎn)生新遺傳性后代的一種育種技術(shù)。 一般采用影印法。 真正的融合，即產(chǎn)生雜合的二倍體或單倍重組體； 兩者均可以在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，一般前者較穩(wěn)定，而后一種則不穩(wěn)定。 在融合時(shí)，一般也加入 Ca2+，濃度以 ／ L為好。 原生質(zhì)體再生率的計(jì)算 原生質(zhì)體再生率＝ 再生菌數(shù)－剩余菌數(shù) 破壁前菌數(shù)－剩余菌數(shù) 100% ＝ 再生菌數(shù)－總菌數(shù) （ 1－制備率） 總菌數(shù) 制備率 100% （四）原生質(zhì)體的融合 在進(jìn)行原生質(zhì)體融合是通常要加入聚合劑聚乙二醇（ PEG）。滲透壓穩(wěn)定劑的選擇同制備時(shí)是一樣的。 滲透壓穩(wěn)定劑的選擇： 細(xì)菌－蔗糖、丁二酸鈉、 NaCl等 酵母菌－山梨醇、甘露醇等 霉菌－ KCL、 NaCl等 滲透壓穩(wěn)定劑的濃度一般采用 ～ ％ mol/L。 因此，選擇一個(gè)最適的酶解時(shí)間對(duì)于原生質(zhì)體融合是非常重要的。 酶解時(shí)間 原生質(zhì)體的制備質(zhì)量與酶解時(shí)間有密切的關(guān)系。因此，最適溫度是這兩方面的共同結(jié)果。 酶解溫度 溫度對(duì)酶解作用有雙重影響。 酶濃度 一般來(lái)講，酶濃度增加，原生質(zhì)體形成率增加，但是超過(guò)一定范圍，則原生質(zhì)體形成率增加的效果不明顯；酶濃度過(guò)低，則導(dǎo)致原生質(zhì)體再生率下降。 菌體的培養(yǎng)時(shí)間 為了使菌體易于原生質(zhì)體化，一般選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體。 影響原生質(zhì)體制備的因素 菌體的預(yù)處理 為了使酶的作用效果更好一些，可對(duì)菌體進(jìn)行預(yù)處理，包括菌體培養(yǎng)階段的預(yù)處理和酶解前的預(yù)處理。 一般可以采用 營(yíng)養(yǎng)缺陷標(biāo)記 和 抗藥性標(biāo)記 。 （ 1）標(biāo)記菌株的篩選； （ 2）原生質(zhì)體的制備； （ 3）原生質(zhì)體的再生； （ 4）原生質(zhì)體的融合； （ 5）融合子的選擇； （ 6）實(shí)用型菌株的篩選。通過(guò)細(xì)胞質(zhì)融合、核融合，而后發(fā)生基因組間的交換、重組，進(jìn)而可以在適宜的條件下再生出微生物的細(xì)胞壁來(lái)，從而獲得重組子的過(guò)程。 第四節(jié) 微生物原生質(zhì)體融合和育種 一、原生質(zhì)體融合的概念 所謂 原生質(zhì)體融合 ，就是將雙親株的微生物細(xì)胞分別通過(guò)酶解脫壁，使之成為原生質(zhì)體。 首先要進(jìn)行噬菌體效價(jià)的測(cè)定。 將受體菌培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，向其中加入供體菌裂解液，待轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體吸附后，低速離心收集菌體。 轉(zhuǎn)導(dǎo)育種的過(guò)程 操作過(guò)程如下： 先將供體菌培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，然后向其中加入噬菌體，繼續(xù)培養(yǎng)是一部分供體菌發(fā)生裂解反應(yīng)而釋放出轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體。 轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體的獲得： 噬菌體侵染供體菌后，在感染末期，少數(shù)噬菌體會(huì)將供體菌的 DNA誤認(rèn)為是它們自己的 DNA，并以其外殼蛋白將細(xì)菌 DNA包圍起來(lái)，從而形成轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體。 這兩個(gè)基因之間的距離為 （約 10kb）。 用下式表示： F＝（ 1－ d／ L） 3 d為兩個(gè)基因之間的距離， L是 P1基因組或轉(zhuǎn)導(dǎo)片段長(zhǎng)度（在遺傳圖譜上用分鐘表示）。 兩個(gè)鄰近的基因一起被轉(zhuǎn)導(dǎo)的現(xiàn)象稱為 共轉(zhuǎn)導(dǎo)（ co－transduction)。 五、轉(zhuǎn)導(dǎo)用于基因定位 普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體通?？梢杂糜诶L制供體菌遺傳圖譜。 由雙重溶源菌形成的裂解物稱為 HFT裂解物。 （二 ） 高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)（ HFT， high frequency transduction） 雙重溶源菌： 在高 m . o . i .情況下，受體菌會(huì)同時(shí)吸附缺陷型 phage和完整 phage， 并且可以同時(shí)整合在受體菌的核染色體組上，這時(shí)的受體菌稱為雙重溶源菌。 LFT裂解物在低 m . o . i .情況下感染宿主，可獲得極少量的局限轉(zhuǎn)導(dǎo)，這就是低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)。 局限轉(zhuǎn)導(dǎo) （一 ） 低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)（ LFT， low frequency transduction） 由于宿主染色體上進(jìn)行不正常的切離的頻率極低，因此在裂解物中所含的部分缺陷 phage的比例也極低。 四、局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)（ specialized transduction） 指通過(guò)部分缺陷的溫和噬菌體把供體菌的少數(shù)特定基因攜帶到受體菌中，并獲得表達(dá)的轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象。 經(jīng)轉(zhuǎn)導(dǎo)而獲得了供體菌 DNA片段的受體菌，如果其外源DNA在體內(nèi)既不進(jìn)行交換、整合、復(fù)制，也不迅速消失，而進(jìn)行轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯及性狀表達(dá)，這種現(xiàn)象稱為流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)。 由完全缺陷噬菌體介導(dǎo)的普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)稱為完全普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)。 三、普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)（ generalized transduction） 通過(guò)完全缺陷的 phage 對(duì)供體菌任何 DNA小片段的“誤包”，而實(shí)現(xiàn)其遺傳性狀傳遞至受體菌的轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象，稱為普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)。 過(guò)濾性因子是噬菌體（ phage） 的證明： a. 過(guò)濾性因子不會(huì)因 DNase 處理而失去活性，說(shuō)明它不是裸露在溶液中的 DNA， 故可以排除轉(zhuǎn)化作用，另外由于兩個(gè)菌是隔離培養(yǎng)的因而也可以排除接合作用； b. 過(guò)濾性因子與從溶源性菌分離到的噬菌體 P22具有相同大小的質(zhì)量； c. 用抗 P22的血清或加熱處理，使 P22的感染性和過(guò)濾性因子的功能失活的速率相同； d. 抗 P22