【正文】 其過程如下： 菌絲聯(lián)結(jié)（ anastomosis）； 形成異核體（ heterocaryon）； 核融合（ nuclear fusion） 。 從理論上講，凡能產(chǎn)生有性孢子的酵母菌或霉菌都可應(yīng)用與高等動(dòng)、植物雜交育種相似的有性雜交方法進(jìn)行育種。要獲得真正的融合子，必須在融合原生質(zhì)體后，進(jìn)行幾代自然分離、選擇，才能加以確定。 PEG的分子量采用 4000～ 6000為好；融合時(shí)的終濃度一般為 30～ 40％；由于有 PEG加入使得融合很有效地進(jìn)行，同時(shí) PEG在高濃度下是有毒的，因此聚合時(shí)間不宜過長。 原生質(zhì)體形成率＝ 破壁前菌數(shù)－剩余菌數(shù) 破壁前菌數(shù) 100％ 原生質(zhì)體形成率的計(jì)算 （三）原生質(zhì)體的再生 一般在進(jìn)行原生質(zhì)體再生時(shí)，采用含有滲透壓穩(wěn)定劑的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。酶解時(shí)間過短，原生質(zhì)體形成不完全，結(jié)果會(huì)影響到融合；酶解時(shí)間過長，原生質(zhì)體脫壁太完全，原生質(zhì)體的質(zhì)膜也會(huì)受到損傷，從而會(huì)影響到再生，最終也不利于融合。一方面，隨著溫度的提高，酶解反應(yīng)速度加快；另一方面，隨著溫度的增加，酶蛋白逐漸變性而失活。 一般對于細(xì)菌采用對數(shù)生長期后期為好，對于放線菌采用對數(shù)生長期與穩(wěn)定期之間的轉(zhuǎn)換期最為合適。 （二）原生質(zhì)體的制備 在細(xì)菌和放線菌中主要采用溶菌酶 ； 在酵母菌和霉菌中一般可用蝸牛酶和纖維素酶。 狹義的原生質(zhì)體（ protoplast）即細(xì)胞壁被徹底酶解完全 脫壁后形成的 原生質(zhì)體 廣義的原生質(zhì)體既包括狹義的原生質(zhì)體也包括不完全脫 壁后形成的圓球體（ spheroplast） 物理的 ：瞬時(shí)高壓的交變電場或激光等 助融條件 化學(xué)的：聚乙二醇、二甲亞砜、伴刀豆球蛋白 A、磷 脂酰絲氨酸、溶血卵磷脂等 生物的：仙臺(tái)病毒、雞新城疫病毒、等 關(guān)于原生質(zhì)體概念的解釋： 二、原生質(zhì)體融合在生物工程中的地位 生物工程 （ biotechnology） 細(xì)胞工程 基因工程 酶工程 發(fā)酵工程 固定化細(xì)胞 基因體外重組 染色體移植或引入 細(xì)胞器移植 核移植 固定化酶 酶分子的改造和修飾 發(fā)酵自動(dòng)化 產(chǎn)品后處理 泛指遺傳工程 組織培養(yǎng) 原生質(zhì)體融合 原生質(zhì)體融合是一種更為廣泛，更為隨機(jī)的基因重組方式； 原生質(zhì)體融合方式，可以打破微生物的種屬界限，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣菌株間的基因重組； 原生質(zhì)體融合可以使遺傳物質(zhì)傳遞更為完全，可以獲得更多基因重組的機(jī)會(huì)，有利于提高育種速度； 借助融合劑可同時(shí)將幾個(gè)親本的原生質(zhì)體隨即融合在一起，從而獲得綜合幾個(gè)親本性狀的重組體，加速育種進(jìn)程； 原生質(zhì)體融合可以和其它育種方法相結(jié)合，把從其它方法得到的優(yōu)良性狀通過原生質(zhì)體融合在組合到一個(gè)單株中，提高菌株產(chǎn)量的幾率增大； 三、原生質(zhì)體融合及原生質(zhì)體技術(shù)的理論與實(shí)踐意義 原生質(zhì)體融合可以大大提高遺傳重組的頻率； 在生產(chǎn)菌種的選育中，可以應(yīng)用具有較高產(chǎn)量性狀的菌株作為融合時(shí)出發(fā)菌株，以期達(dá)到理想育種的目的； 可以應(yīng)用滅活的原生質(zhì)體進(jìn)行融合，從而提高篩選效率，省去育種過程中對親株的遺傳標(biāo)記，省去人力、物力和時(shí)間，也可防止因增加標(biāo)記而降低出發(fā)菌株的產(chǎn)量； 原生質(zhì)體技術(shù)有助于建立工業(yè)微生物的轉(zhuǎn)化體系，開辟新的育種途徑； 對微生物制備原生質(zhì)體后直接再生育種、原生質(zhì)體誘變后再生育種、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化育種、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)導(dǎo)育種、原生質(zhì)體固定化等原生質(zhì)體技術(shù)在微生物育種與工業(yè)生產(chǎn)中近年來已日趨廣泛開展； 1在理論上，微生物的原生質(zhì)體融合可用于研究噬菌體與寄主間的關(guān)系，深入了解溶源機(jī)理及免疫因子和存在部位；研究原噬菌體的 DNA在寄主染色體上的結(jié)合位點(diǎn)； 1在細(xì)胞學(xué)研究方面，通過原生質(zhì)體融合，有助于研究核質(zhì)關(guān)系及細(xì)胞質(zhì)遺傳問題； 1微生物原生質(zhì)體融合，可用于遺傳性分析等理論研究。所謂噬菌體效價(jià)就是1ml培養(yǎng)液中含有活噬菌體的數(shù)目。加入氯仿以殺死仍活著的供體菌，待完全溶菌后低速離心以除去菌體殘?jiān)?，上清液?jīng) Dnase處理和微孔濾膜除菌后，即制成供體菌裂解液。 六、轉(zhuǎn)導(dǎo)育種 利用轉(zhuǎn)導(dǎo)法選育目的菌，首要的任務(wù)是要 獲得轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體 。 當(dāng)轉(zhuǎn)導(dǎo)的 DNA片段進(jìn)入受體后，與受體同源分子進(jìn)行重組，當(dāng)另一個(gè)基因的標(biāo)記被選擇時(shí)，那么另一個(gè)鄰近基因的發(fā)現(xiàn)頻率隨著它們二者之間距離的減少而增大，這個(gè)頻率稱為 共轉(zhuǎn)導(dǎo)頻率（ cotransduction frequency）。 高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)： 用低 m . o . i .的 HFT裂解物去感染受體細(xì)胞，則可高頻率的發(fā)生局限轉(zhuǎn)導(dǎo)，這就是高頻轉(zhuǎn)導(dǎo)。 m . o . i . ： 稱作感染復(fù)數(shù)，是指每一個(gè)敏感細(xì)胞所能吸附的相應(yīng) phage的數(shù)量。 特點(diǎn)： 只能是個(gè)別特定基因； 該特定基因由部分缺陷噬菌體攜帶； 缺陷噬菌體是由于在其形成過程中所發(fā)生 的低頻率“誤切”或由于雙重溶源菌的裂解而形 成。 （二 ） 流產(chǎn)普遍轉(zhuǎn)導(dǎo) 簡稱流產(chǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)（ abortive transduction）。 因此可以證明：過濾性因子就是溫和型噬菌體 P22。 轉(zhuǎn)導(dǎo)有兩種類型，即普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)和局限轉(zhuǎn)導(dǎo)。通過這樣的實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)化基因的連鎖情況可以方便的繪制出遺傳圖譜。 二、轉(zhuǎn)化過程的基因重組及育種 （一）轉(zhuǎn)化技術(shù)用于基因定位 在轉(zhuǎn)化過程中，兩個(gè)連鎖的基因可以同時(shí)轉(zhuǎn)化，但能夠同時(shí)轉(zhuǎn)化的基因卻不一定是連鎖的，因?yàn)榘@兩個(gè)基因的 DNA片段可以同時(shí)被受體細(xì)菌所吸收。 感受態(tài)可在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移 感受態(tài)因子（ CF） 1963年， 和 首次從鏈球菌中分離得到； 1972年， Leonard 和 Cale 純化的一種蛋白質(zhì)，稱為 CF。 （二）受體細(xì)胞的特點(diǎn) 受體細(xì)胞的感受態(tài) （ 1）概念 只有在某一特定條件下培養(yǎng)的部分細(xì)胞才有吸收DNA的能力，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。 能發(fā)生轉(zhuǎn)化作用的核苷酸鏈至少不低于 450bp。 （一）轉(zhuǎn)化 DNA的特點(diǎn) 轉(zhuǎn)化子的數(shù)目與 DNA濃度的關(guān)系 在一定條件下轉(zhuǎn)化子的數(shù)目與轉(zhuǎn)化 DNA的濃度成正比。 第二節(jié) 轉(zhuǎn)化與育種 轉(zhuǎn)化（ transformation） ： 受體細(xì)胞直接吸收來自供體細(xì)胞的離體