微生物的遺傳變異和育種(9)-wenkub.com
2025-01-15 01:30 本頁面
【正文】 活化的要求是使保藏菌種恢復旺盛的生命活動和顯示其原有的代謝和生產性能。原核生物和真核生物的表達載體有一些共同的要求，但兩者的基因表達調控機制有很大不同，故需要分別采用原核生物和真核生物的調控原件來構建。 重組體的篩選與鑒定 ? 在構建文庫之后就需要從眾多的克隆中，篩選出含有目的基因的重組體，并鑒定其正確性。 ? （ 2）、 cDNA文庫的構建 所謂 cDNA文庫是指生物體全部mRNA的 cDNA克隆總體。 ? 有條件作為載體的，對原核受體細胞來說，主要有細菌質粒（松弛型）和 λ噬菌體兩類 – 對真核微生物受體來說，主要有 SV4O病毒 ? SV4O病毒是猴體內小型環(huán)狀雙鏈 DNA病毒 ? 對植物細胞受體來說，主要是 Ti質粒 基因文庫與 cDNA文庫的構建 ? 利用重組 DNA技術，可將某一原核微生物或真核微生物染色體基因組的全部遺傳信息貯存在由重組體群體（如重組噬菌體群體）構成的基因文庫（ genomic library）或 cDNA文庫（ cDNA library）之中，猶如將文獻資料貯存于圖書庫一樣，以供長期貯存和隨時調取克隆基因使用。 ? 體外 DNA連接方法目前常用的三種：（ 1）用 T4或 DNA連接酶可連接具有互補粘性末端的 DNA片段；（ 2）用 T4 DNA連接酶連接具有平末端 DNA片段；（ 3）先在 DNA片段末端加上人工接頭，使其形成粘性末端，然后再進行連接。 T4DNA連接酶由一條多肽鏈組成，相對分子量為 6 800Da，通常催化粘性末端間的連接效率要比催化平末端連接效率為高。 DNA連接酶主要來自 T4噬菌體和大腸桿菌。以上二類酶兼有切割和修飾（甲基化）的作用，并依賴于 ATP的存在。 第四節(jié)基因工程 ? 生物工程（ bioengineering），又稱生物技術（ biotechnology），是一門迅速發(fā)展中的邊緣學科，它以分子生物學、分子遺傳學、微生物學、生物化學和細胞學的理論和技術為基礎，結合化學工程、計算技術等現(xiàn)代工程技術，運用生物學的最新成就，定向地改造物種，再通過合適的生物反應器，對這類 “ 工程菌 ” 或“ 工程細胞株 ” 進行大規(guī)模的培養(yǎng)，以生產大量有用的代謝產物或發(fā)揮它們獨特生理功能的一門新興技術。頻率極低。 ? F因子的分子量為 5 x 107Da 。 接合 (Conjugation) ? 通過供體菌和受體菌完整細胞間的直接接觸而傳遞大段 DNA的過程，稱為接合。 局限轉導 (Restricted transduction) ? 局限轉導： 通過某些部分缺陷的溫和噬菌體把供體菌的少數(shù)特定基因轉移到受體菌中的轉導現(xiàn)象。 ? 3）被降解 , 轉導失敗，在選擇平板上無菌落形成。 ? 轉導又分為 : 普遍性轉導 局限性轉導，兩類。 誘變育種 ? 利用物理或化學誘變劑處理均勻分散的微生物細胞群，促進其突變頻率大幅度提高，然后簡便、快速和高效地篩選少數(shù)符合育種目的的突變株。 – 條件致死突變型 在某一條件下具致死效應，而在另一條件下無致死效應的突變型 DNA的修復 ? 光復活（ Photoreactivation) ? 切除修復 (Excision repair) ? 重組修復 (Rebination repair) ? SOS修復 二、突變與育種 ? 1）從生產中選育 ? 在日常生產中微生物會以一定頻率發(fā)生自發(fā)突變。 ? 包括基因突變 (gene mutation)和染色體畸變 (chromosomal aberration)兩類 ? 基因突變是由于 DNA鏈上的一對或少數(shù)幾對堿基發(fā)生改變而引起的。致病的產氣莢膜梭菌型 C（ Clostridium perfringens Type C）和引起牙齲的鏈球菌的突變株都含有質粒，前者的質粒可控制腸毒素的合成，后者的質?？煽刂坪铣刹蝗苄园舛嗵?。 ? （ 8）、殺傷性質粒 發(fā)現(xiàn)于真菌的酵母菌（ yeast）和黑粉菌的致死顆粒（ killer particles），其性能如腸桿菌素質粒。 ? 巨大質粒（ mega質粒） 分子量200~300 x 106D，上有一系列固氮基因，存在于根瘤菌中 ? 降解性質粒
研究報告相關推薦
鄂ICP備17016276號-1