層析法理論ppt課件(參考版)
2025-05-06 22:12本頁(yè)面
【正文】 親和層析的應(yīng)用 ?純化生物大分子 ?稀溶液的濃縮 ?從純化的分子中除去殘余的污染物 層析方法的選擇原則 ? 易溶于有機(jī)溶劑而難溶于水的混合物的分離常用吸附層析法， ? 可電離的水溶性混合物最適宜用離子交換層析法分離， ? 在水和有機(jī)溶劑中都可溶的混合物用分配層析法分離。 親和層析的應(yīng)用 親和層析純化過(guò)程簡(jiǎn)單、迅速，且分離效率高。 方法： （ 1） oligo(dT)纖維素層 析柱法 （ 2） oligo(dT)纖維素液 相結(jié)合離心法 （ 3）磁珠分離法 oligo(dT)纖維素層析柱法 磁珠分離法 配體與載體結(jié)合 （固相化） 裝柱 （親和層析柱） 親和吸附 （生物高分子與配體專一結(jié)合） 解吸附 洗柱 親和層析 的基本過(guò)程 配體與載體的聯(lián)接方法 ? 吸附法：配體吸附于固相載體或離子交換劑上 ? 共價(jià)偶聯(lián)法：配體通過(guò)化學(xué)共價(jià)鍵聯(lián)結(jié)于固相載體 ? 交聯(lián)法：依靠雙功能試劑造成分子之間交聯(lián)，聚集成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。Wr（吸水值） ?凝膠顆?；|(zhì)所占的容積 Vr ?峰洗脫體積 Ve：被分離物質(zhì)通過(guò)凝膠柱所需洗脫液的體積 層析柱的重要參數(shù) ?分配系數(shù) Kd Kd = Ve V0 Vi 凝膠層析的實(shí)驗(yàn)技術(shù) ?層析柱 (r、 h） ?凝膠的選擇 ?凝膠的準(zhǔn)備 ?樣品溶液的處理 ?防止微生物污染 五、親和層析 （ Affinity chromatography） 親和層析是利用 待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力 ，從而達(dá)到分離目的的一類特殊層析技術(shù)。 層析柱的重要參數(shù) ?內(nèi)水體積 Vi：凝膠顆粒內(nèi)部微孔的總?cè)莘e。 凝膠層析的應(yīng)用 分離提純蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子(脫鹽 ) 酶、蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、激素、生物堿等物質(zhì)的分離精制 測(cè)定高分子物質(zhì)的分子量 高分子溶液的濃縮 層析柱的重要參數(shù) ?柱體積 Vt：凝膠裝柱后，從柱的底板到凝膠沉積表面的體積。 主要用于大分子物質(zhì)的分離。L1 HCl) K+ 親和力大的先被交換上去 , 后被洗脫下來(lái) . 樹(shù)脂類型 陽(yáng)離子交換樹(shù)脂 : 含酸性活性基團(tuán)的樹(shù)脂。 C O O H C H 2 C H O H C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 3 C H C H 3 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 2 C H C H 3 C H C H 2 C H C H 2 H 2 S O 4 S O 3 H S O 3 H S O 3 H S O 3 H S O 3 H S O 3 H + H C = C H H C = C H H C = C H （ 催 化 劑 ） n
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