項(xiàng)目層析技術(shù)ppt課件(參考版)
2025-05-10 08:39本頁(yè)面
【正文】 許多類型的柱層析都可用 HPLC來(lái)代替，如分配層析、離子交換層析、吸附層析、凝膠過(guò)濾等。 工作原理 高壓液相層析（ HPLC） ? 特點(diǎn) ①使用的固相支持劑顆粒很細(xì)，表面積很大 ,因而分辨率很高。 吸附原理 ? 待測(cè)物被柱子中 免疫吸附劑上的抗體 所吸附 ， 通過(guò) 淋洗 除去柱上吸附的雜質(zhì) ， 最后待測(cè)樣品被一種 易蒸發(fā)的溶劑 洗脫下來(lái) 。 親和層析法 + C C C 配基 蛋白質(zhì) 固體載體 免疫親和層析柱（ IAC） ? 近年來(lái)免疫親和層析柱 （ IAC）開始被用于有選擇性地從復(fù)雜基體樣本中提取 （ 凈化 ）小分子待測(cè)物 ， 如藥物 、 激素 、 農(nóng)藥和真菌毒素等 。 ? 將待純化物質(zhì)的 特異配體 通過(guò)適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)反應(yīng) 共價(jià) 的連接到 載體 上 ， 待純化的物質(zhì)可被配體吸附 ， 雜質(zhì)則不被吸附 ， 通過(guò) 洗脫雜質(zhì) 即可除去 。 ?物質(zhì)在樹脂上結(jié)合的牢固程度即 親和力大小 有差異，因此選用適當(dāng)?shù)?洗脫液 便可將混合物中的組分逐個(gè)洗脫下來(lái)，達(dá)到分離純化的目的。 ? 離子交換樹脂通常是 不溶于水的高分子物質(zhì) ，分子中含有可解離的基團(tuán) .含有酸性可解離基團(tuán)的稱為 陽(yáng)離子交換樹脂 ，可解離出 H+，含有堿性可解離基團(tuán)的稱 為 陰離子交換樹脂 ，可解離出 OH 離子交換層析法 離子交換層析的基本原理 + + + + + + — — — + + + + + ?若選擇陽(yáng)離子交換樹脂，則帶正電荷的物質(zhì)與 H+發(fā)生交換而結(jié)合在樹脂上。 原理 根據(jù)離子交換樹脂對(duì)需要分離的各種離子的親和力不同 而達(dá)到分離的目的。 原理 凝膠顆粒內(nèi)部具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，被分離的混合物流過(guò)層析柱時(shí)，比凝膠孔徑大的分子不能進(jìn)入凝膠孔內(nèi)，在凝膠顆粒之間的空隙向下移動(dòng)，并最先被洗脫出來(lái)；比網(wǎng)孔小的分子能不同程度的自由出入凝膠孔內(nèi)外，在柱內(nèi)經(jīng)過(guò)的路程較長(zhǎng)移動(dòng)速度較慢，最后被洗脫出來(lái)。 若樣品的分配系數(shù)是 1， 則它在固相與液相間等量分配 。因此可彼此分開 特點(diǎn)： 液 液層析法適合于分離 同系物 或 同分異構(gòu)體 A B C D E 32 16 16 8
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