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色毛電泳ppt課件(參考版)

2025-05-02 03:25本頁(yè)面
  

【正文】 五、毛細(xì)管等速電泳(自學(xué)) capillary isotachophoresis , CITP 3. 不同離子的淌度不同,所形成區(qū)帶的電場(chǎng)強(qiáng)度不同(ν =μE ), 淌度大的離子區(qū)帶電場(chǎng)強(qiáng)度??; 沿出口到進(jìn)口,將不同區(qū)帶依次排序 4? ? ? ?電場(chǎng)強(qiáng)度依次增大。所有試樣都按前導(dǎo)離子的速度等速向陽(yáng)極前進(jìn),逐漸形成各自獨(dú)立的區(qū)帶而分離。 1. 將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導(dǎo)離子 (充滿(mǎn)毛細(xì)管 )和尾隨離子,試樣離子的淌度全部位于兩者之間,并以同一速度移動(dòng)。 (水相)間分配,疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢,流出時(shí)間長(zhǎng); ,擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍 ; 1. 根據(jù)等電點(diǎn)差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù); 2. 毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)(合成的具有不同等電點(diǎn)范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物),當(dāng)施加直流電壓( 6~ 8V) 時(shí),管內(nèi)將建立一個(gè)由陽(yáng)極到陰極逐步升高的 pH梯度; 3. 氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液 pH有關(guān),在酸性溶液中帶正電荷,反之帶負(fù)電荷。三、 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜 ( MECC , MEKC)micellar electrokiic capillary chromatography, MEKC 在電場(chǎng)力的作用下,膠束在柱中移動(dòng)。柱便宜、易制備。 特點(diǎn) :抗對(duì)流性好,散熱性好,分離度極高; 但壽命短 。能夠有效減小組分?jǐn)U散,所得峰型尖銳,分離效率高。這是最基本、應(yīng)用廣的分離模式;這是最基本、應(yīng)用廣的分離模式;二、毛細(xì)管凝膠電泳 capillary gel electrophoresis , CGE 將聚丙烯酰胺、瓊脂糖等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。四、高效毛細(xì)管電泳分離模式分離類(lèi)型八種分離類(lèi)型,介紹常用的幾種;根據(jù)試樣性質(zhì)不同,采用不同的分離類(lèi)型;每種機(jī)理的選擇性不同;一、毛細(xì)管區(qū)帶電泳capillary zone electrophoresis , CZE 帶電粒子的遷移速度 =電泳和電滲流速度的矢量和。 實(shí)際操作時(shí),保持毛細(xì)管兩端緩沖溶液平面高度相同。5).其他影響因素 ( 1)電分散作用對(duì)譜帶展寬的影響 當(dāng)溶質(zhì)區(qū)帶與緩沖溶液區(qū)帶的電導(dǎo)不同時(shí),也造成譜帶展寬;盡量選擇與試樣淌度相匹配的背景電解質(zhì)溶液。 細(xì)內(nèi)徑毛細(xì)管柱,一方面有利于散熱,另一方面比表面積大,又增加了溶質(zhì)吸附的機(jī)會(huì)。 3).焦耳熱與溫度梯度的影響電泳過(guò)程產(chǎn)生的焦耳熱可由下式計(jì)算:?m— 電解質(zhì)溶液的摩爾電導(dǎo); I— 工作電流: cm— 電解質(zhì)濃度; 散熱過(guò)程中,在毛細(xì)管內(nèi)形成溫度梯度(中心溫度高),破壞了塞流,導(dǎo)致區(qū)帶展寬。2).進(jìn)樣的影響 當(dāng)進(jìn)樣塞長(zhǎng)度 太大時(shí),引起的峰展寬大于縱向擴(kuò)散。分離度可按譜圖直接由下式計(jì)算: — 區(qū)帶展寬 factors influenced the efficiency—ban
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