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色毛電泳ppt課件(留存版)

2025-06-13 03:25上一頁面

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【正文】 , HPCE中不存在層流,但當(dāng)毛細(xì)管兩端存在壓力差時,出現(xiàn)拋物線形的層流; 產(chǎn)生的原因 :毛細(xì)管兩端液面高度不同。在其等電點(diǎn)時,呈電中性,淌度為零;四、毛細(xì)管等電聚焦(自學(xué)) capillary isoelectric focusing, CIEF 4. 聚焦:具有不同等電點(diǎn)的生物試樣在電場力的作用下遷移,分別到達(dá)滿足其等電點(diǎn) pH的位置時,呈電中性,停止移動,形成窄溶質(zhì)帶而相互分離; 5. 陽極端裝稀磷酸溶液,陰極端裝稀 NaOH溶液; 6. 加壓將毛細(xì)管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測; 7. 電滲流在 CIEF中不利,應(yīng)消除或減小。 ,其濃度達(dá)到臨界濃度,形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。 改善方法:改善方法: (( 1)減小毛細(xì)管內(nèi)徑;)減小毛細(xì)管內(nèi)徑; (( 2)控制散熱;)控制散熱;4).溶質(zhì)與管壁間的相互作用 存在吸附與疏水作用,造成譜帶展寬; 蛋白質(zhì)、多肽帶電荷數(shù)多,有較多的疏水基,吸附問題特別嚴(yán)重,是目前分離分析該類物質(zhì)的一大 難題 。 1. HPCE中 電滲流現(xiàn)象 當(dāng)固體與液體接觸時,固體表面由于某種原因帶一種電荷,則因靜電引力使其周圍液體帶有相反電荷,在液 固界面形成雙電層,二者之間存在電位差 。 1981年, Jenson和 Luckas, 用 75m內(nèi)徑石英毛細(xì)管進(jìn)行電泳分析,柱效高達(dá) 40萬 /m, 促進(jìn)電泳技術(shù)發(fā)生了根本變革,迅速發(fā)展成為可與 GC、 HPLC相媲美的嶄新的分離分析技術(shù) —— 高效毛細(xì)管電泳 。 電場作用下,毛細(xì)管柱中出現(xiàn): 電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象 。 電荷均勻分布,整體移動, 電滲流的流動為平流 , 塞式流動 (譜帶展寬很?。?; 液相色譜中的溶液流動為層流, 拋物線流型 ,管壁處流速為零,管中心處的速度為平均速度的 2倍( 引起譜帶展寬較大引起譜帶展寬較大 )。 實(shí)際操作時,保持毛細(xì)管兩端緩沖溶液平面高度相同。 1. 將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導(dǎo)離子 (充滿毛細(xì)管 )和尾隨離子,試樣離子的淌度全部位于兩者之間,并以同一速度移動。柱便宜、易制備。 3).焦耳熱與溫度梯度的影響電泳過程產(chǎn)生的焦耳熱可由下式計(jì)算:?m— 電解質(zhì)溶液的摩爾電導(dǎo); I— 工作電流: cm— 電解質(zhì)濃度; 散熱過程中,在毛細(xì)管內(nèi)形成溫度梯度(中心溫度高),破壞了塞流,導(dǎo)致區(qū)帶展寬。淌度 μ : 單位電場強(qiáng)度下的平均電泳速度。 按形狀分類: U型管電泳、柱狀電泳、板電泳; 按載體分類:濾紙電泳、瓊脂電泳、聚丙烯酰胺電泳、自由電泳; 傳統(tǒng)電泳分析:操作煩瑣,分離效率低,定量困難,無法與其他分析相比。169。 電滲流的速度約等于一般離子電泳速度的 5~ 7倍; 各種電性離子在毛細(xì)管柱中的遷移速度為: ν + =ν 電滲流 + ν +ef 陽離子運(yùn)動方向與電滲
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