【正文】 甲型流感病毒HA易發(fā)生點(diǎn)突變，導(dǎo)致氨基酸序列發(fā)生替換，造成抗原性漂。抗體陽(yáng)性應(yīng)兩種方法同時(shí)陽(yáng)性來(lái)最終確認(rèn)陽(yáng)性結(jié)果。負(fù)鏈分節(jié)段RNA，3個(gè)基因節(jié)段：首選乳鼠腦內(nèi)、腹腔接種，取乳鼠腦組織制成抗體進(jìn)行血清學(xué)交叉試驗(yàn)。檢測(cè)抗體經(jīng)典法：血凝抑制試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、中和試驗(yàn)122．克里米亞—?jiǎng)偣鲅獰酑CHE：傳播媒介蜱，宿主蜂，又新疆出血熱。4個(gè)血清型，分離細(xì)胞（C6/36株）。12登革熱DF：乙類(lèi)，傳播媒介伊蚊，屬黃病毒科及屬，正鏈RNA，含有一條單一開(kāi)放讀碼框架，3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白：衣殼蛋白C、膜蛋白M、包膜蛋白E。病毒分離：BHK、C6/36傳代細(xì)胞。最易感染的動(dòng)物是出生2～3天的乳鼠，經(jīng)皮下接種，小鼠是常用的動(dòng)物模型。病毒RNA在細(xì)胞漿內(nèi)直接起mRNA作用，翻譯出結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白，在胞漿粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)裝配成熟，出芽釋放。屬黃病毒科，基因組長(zhǎng)11 kb 單股正鏈RNA，球形，有包膜，根據(jù)E蛋白的核苷酸差異將乙腦分為5個(gè)基因組。用熒光免疫法病毒抗原積聚在細(xì)胞漿內(nèi)。病毒分離必須在生物安全4級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。病毒在胞內(nèi)繁殖，芽生釋放。119. 埃博拉出血熱：傳染性十分強(qiáng)烈的出血性發(fā)熱性疾病。我國(guó)流行的是Ⅰ和Ⅱ型，伴三痛（頭，眼眶，腰）及紅（面，頸，上胸部）。ELISA夾心法用于基層診斷和流行病學(xué)調(diào)查。A549（人肺癌）傳代細(xì)胞、VeroE6（非洲綠猴腎）細(xì)胞、2BS（人胚肺二倍體）細(xì)胞、RL（大白鼠肺）細(xì)胞用于病毒分離。鼠類(lèi)為宿主和傳染源。F蛋白、H蛋白都是中和抗原118. 流行性出血熱：又稱(chēng)腎綜合征出血熱HFRS。在結(jié)構(gòu)基因中，H、N基因最易變異的基因。IgG持續(xù)終身。細(xì)胞分離：Vero細(xì)胞（非洲綠猴腎細(xì)胞）、原代外周血單核細(xì)胞（PBMC）、B95a細(xì)胞（EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細(xì)胞），WHO推薦使用首選Vero/SLAM分離麻疹病毒；用ELISA方法檢測(cè)特異AgM抗體進(jìn)行麻疹診斷。抵抗力弱。血凝素HA只能凝集猴紅細(xì)胞，并能與宿主細(xì)胞吸附；血溶素HL具有溶血和使細(xì)胞發(fā)生融合形成多核巨細(xì)胞的作用。病毒為螺旋對(duì)稱(chēng)，有包膜，單股負(fù)鏈RNA不分節(jié)段，有6個(gè)結(jié)構(gòu)基因。WHO推薦用：人橫紋肌肉瘤細(xì)胞（RD）、轉(zhuǎn)人脊灰病毒受體的小鼠肺細(xì)胞（L20B）117. 麻疹病毒：以發(fā)熱、呼吸道卡他癥狀和全身丘疹為特征的急性傳染病（丙類(lèi)）。患者超14天就診，采5位0—4歲密切接觸糞便?？诜够乙呙纾∣PV），脊灰Ig G≥1：100為陽(yáng)性。按抗原分；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3個(gè)血清型。確證試驗(yàn)法：免疫印跡試驗(yàn)（WB國(guó)常用）、條帶免疫試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn)（RIPA）、免疫熒光試驗(yàn)（IFA）116. 脊髓灰質(zhì)炎病毒：小兒麻痹癥，糞—口傳播。HIV1 p24抗原陽(yáng)性結(jié)果須中和試驗(yàn)確認(rèn)。報(bào)告定性結(jié)果時(shí)應(yīng)注明反應(yīng)條件、引物序列，報(bào)告定量結(jié)果時(shí)注明實(shí)驗(yàn)方法、樣品種類(lèi)及量。分離病原：在生物安全3級(jí)實(shí)驗(yàn)室（BSL1）、生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，最敏感的分離技術(shù)是共培養(yǎng)，特征性細(xì)胞病變?yōu)槿诤霞?xì)胞。標(biāo)本：外周全血，抗凝劑：檸檬酸葡萄糖溶液B（ACD）用于新鮮抽提或凍存的血樣、肝素、CPD。HIV屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬，分HIVHIV2型，95%由HIV1造成，球形，由兩條單股正鏈RNA、逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶、蛋白酶、核心蛋白質(zhì)組成。感染后損傷免疫系統(tǒng)，引起致死性機(jī)會(huì)感染或腫瘤，乙類(lèi)。糞—口傳播115. 人類(lèi)免疫缺陷（HIV）：是獲得性免疫缺陷綜合征。戊型（HEV）：無(wú)包膜線狀單股正鏈RNA病毒球形，對(duì)高熱敏感。對(duì)各種滅活劑、脂溶劑敏感，耐干熱。丁型（HDV）：衛(wèi)星病毒科，是一種缺陷病毒，需在（HBV）或嗜肝DNA病毒的輔助下才能復(fù)制增殖。丙型（HCV）：黃科病毒，球型顆粒，1：1000甲醛液（福爾馬林）37度92小時(shí)可滅活。Dane顆粒呈雙層外殼圓形顆粒，攜帶核心抗原（HBcsAg）,抵抗力很強(qiáng)，100℃10分鐘滅活。乙型（HBV）：反轉(zhuǎn)錄病毒，嗜肝DNA病毒科，病毒顆粒3種：22nm小球形外膜顆粒、40—100nm 22nm管形顆粒、完整42nmDane顆粒。1：4000甲醛液（福爾馬林）37度71小時(shí)可滅活。甲型（HAV）：正鏈小RNA病毒科，球形正十二面體，病毒顆粒無(wú)包膜，核酸RNA有感染性。16種支原體中，肺炎、解脲、人型、生殖器、發(fā)酵支原體對(duì)人致病，肺炎支原體引起間質(zhì)性肺炎，其它4種引起泌尿生殖道感染。Giemsa染色呈淡紫色，Dienes染色呈藍(lán)色不易褪色。采樣黏膜組織，～，在95%N2，5%CO2中生長(zhǎng)好，菌落呈“油煎蛋”）樣菌落，取樣：黏膜組織。嚙齒類(lèi)動(dòng)物、兔類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)為傳染源。鼠、蚤傳播媒介，又稱(chēng)鼠型斑疹傷寒。（一）普氏立克次體 () ：是流行性斑疹傷寒的病原體。交叉凝集試驗(yàn)稱(chēng)外斐反應(yīng)（WeilFelix reaction），用于立克次體病的輔助診斷。但恙蟲(chóng)病立克次體的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和抗原成分不同，無(wú)粘液層、無(wú)微莢膜、無(wú)肽聚糖和脂多糖，故另立為東方體屬。雄性豚鼠腹腔接種，,觀察陰囊紅腫（流—，地+）抗原結(jié)構(gòu)：一、可溶性群特異性抗原，與細(xì)胞壁表層的脂多糖構(gòu)成，耐熱。常用姬姆尼次、姬姆薩染色，多形性，無(wú)芽無(wú)鞭。目前常用的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)有雞胚成纖維細(xì)胞、L929細(xì)胞、Vero細(xì)胞,用PCR方法進(jìn)行鑒定。培養(yǎng)特性：動(dòng)物接種是最常用的培養(yǎng)方法 ,采用豚鼠、小鼠可對(duì)多種病原性立克次體進(jìn)行繁殖。人畜共患，立克次體的致病物質(zhì)主要有內(nèi)毒素（脂多糖）和磷脂酶 A。培養(yǎng)物中抑制劑二乙氨基葡聚糖。衣原體的兩種形態(tài)：原生小體（EB，小而致密的顆粒結(jié)構(gòu)，具感染性，姬染紫紅色，無(wú)繁殖力）。專(zhuān)性細(xì)胞內(nèi)寄生。有獨(dú)特發(fā)育周期，能通過(guò)細(xì)菌濾器。三亞種區(qū)別：IMViC試驗(yàn)：肺炎亞種――＋＋，臭鼻亞種－＋－d，鼻硬結(jié)亞種－＋――。利用莢膜腫脹試驗(yàn)分型，3型和12型，magA基因作該菌診斷。動(dòng)力和鳥(niǎo)氨酸脫羧酶陰性是本菌最大特點(diǎn)。有些菌株還可產(chǎn)生LT和ST腸毒素。是人呼吸道及腸道定殖菌，條件致病菌。感染臨床主要有2種形式：軍團(tuán)菌病LD（肺炎型）龐提阿克熱PF109. 克雷伯桿菌：又稱(chēng)肺炎桿菌，以肺炎克雷伯菌多見(jiàn)，G—有較厚莢膜，多數(shù)有菌毛，無(wú)芽孢和鞭毛，菌體呈卵圓形或球桿狀成雙排列，有時(shí)菌落出現(xiàn)黏液型用接種環(huán)可成絲。并取3份，一份酸處理，一份熱處理50℃水30分鐘。試管凝集法抗體的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：1≥320水是人類(lèi)感染的主要來(lái)源，水樣1L，樣本采集到濃縮培養(yǎng)最長(zhǎng)不超過(guò)14天，最好不超過(guò)2天。活性炭酵母浸出液瓊脂（含焦磷酸鐵、L半胱氨酸），菌落呈灰白色，如加溴甲酚紫，菌落呈淺綠色。無(wú)芽胞、無(wú)莢膜、有鞭毛，需氧菌（5%CO2剌激生長(zhǎng)）常規(guī)不易著色，最適為36℃，初次分離要L半胱氨酸，含鐵鹽可促進(jìn)生長(zhǎng)，主要可用活性碳－酵母浸出液平板（BCYE），不分解糖。病原鑒定方法： 標(biāo)本：腦脊液、血液、胸水。副流感嗜血桿菌生長(zhǎng)只要Ⅴ因子。在含1%蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露并加有Ⅹ和Ⅴ因子的酚紅肉湯培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)，是鑒別所有嗜血桿菌菌株的方法。107. 流感嗜血桿菌：寄生人體鼻咽部，抵抗力弱，嬰幼兒易感，G—球桿菌，用石碳酸復(fù)或美藍(lán)單染呈現(xiàn)兩端濃染。熒光素是綠色熒光素（溶于水不溶于氯化）。多引物一步PCR擴(kuò)增法空腸彎曲菌mapA基因特異彩片段等。病原鑒定：氧化酶、過(guò)氧化酶陽(yáng)性，G—呈S型、螺旋狀、紡錘形可初步確定為彎曲菌。標(biāo)本采0—5日內(nèi)用藥前，于運(yùn)送培養(yǎng)基中4小時(shí)內(nèi)檢。內(nèi)毒素能侵襲小腸和大腸粘膜引起急性腸炎，致病因素：粘附、侵襲、產(chǎn)生毒素和分子模擬機(jī)制（并發(fā)癥一格林一巴利綜合征），產(chǎn)生細(xì)胞緊張性腸毒素、細(xì)胞毒素和細(xì)胞致死性膨脹毒素而致病臨床：腹痛、腹瀉、發(fā)熱，多見(jiàn)散發(fā)，是夏秋季腹瀉和旅行者腹瀉的主要病因之一。微需氧菌，～5%氧和10%CO2的環(huán)境中生長(zhǎng)最好。：菌體輕度彎曲似逗點(diǎn)狀，菌體一端或兩端有鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，在暗視野鏡下觀察似飛蠅。一般瘤型和界線類(lèi)患者標(biāo)本中可找到細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)存在，有診斷意義。主要用涂片染色顯微鏡檢查，鼻黏膜或皮損處取材，用抗酸性染色后檢查。免疫功能決定了感染后是否發(fā)病及臨床類(lèi)型。具有多形性、抗酸性、聚集性，典型胞內(nèi)菌。蠟質(zhì)D為細(xì)胞壁主要成份，是一種肽糖脂與分枝菌酸復(fù)合物，能引起遲發(fā)性過(guò)敏反應(yīng)，并具有佐劑作用。結(jié)核病動(dòng)物接種的鑒別診斷所接種的敏感動(dòng)物豚鼠，腹股溝皮下。結(jié)核病的診斷依據(jù)：臨床表現(xiàn)、X線檢查特征的肺結(jié)核表現(xiàn)、結(jié)核菌的痰涂片檢查、以及結(jié)核菌素試驗(yàn)為主要手段的免疫測(cè)試。結(jié)核菌素試驗(yàn)紅腫硬結(jié)：50IU/ml制劑，≤5㎜陰性，≥5㎜陽(yáng)性；≥15㎜強(qiáng)陽(yáng)性。103. 結(jié)核分枝桿菌：人型和牛型，專(zhuān)性需氧，曾發(fā)現(xiàn)G＋非抗酸顆粒稱(chēng)Much顆粒，無(wú)芽無(wú)鞭無(wú)莢，燭缸法不適，應(yīng)用二氧化碳培養(yǎng)皿，常用羅－琴或米氏7H10培養(yǎng)基，35～40℃可長(zhǎng)，35～37最適，～，18h分裂一代，2～6周才能長(zhǎng)出菌落，不發(fā)酵糖類(lèi)，人型的煙酸，硝酸鹽還原，煙酰胺酶試驗(yàn)均陽(yáng)性。用1:1000的升汞固定5min。鏡檢：革蘭、莢膜染色。毒素基因位于大質(zhì)粒pXO1上，莢膜基因位于小質(zhì)粒pXO2上，二者是致病必須的。27. 蠟樣桿菌能耐受100℃30min。26. 病毒RNA的堿基序列與mRNA完全相同，稱(chēng)為正鏈RNA病毒，這種病毒RNA可直接起病毒mRNA的作用。用以分析細(xì)胞大小、細(xì)胞周期、DNA含量、細(xì)胞表面分子以及進(jìn)行細(xì)胞分選等。即以熒光素標(biāo)記抗體結(jié)合相應(yīng)細(xì)胞，用激光束激發(fā)單行流動(dòng)的細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞所攜帶熒光(強(qiáng)度或類(lèi)別)進(jìn)行分選或分析。將含病毒的懸液20006000轉(zhuǎn)/ min，離心3040分鐘，可除去90%以上的細(xì)胞碎片和雜質(zhì)。23. 鼻咽拭子的除菌處理：加抗生素終濃度20 000U/ml，4℃作用4小時(shí)，2000轉(zhuǎn)/ min，離心20分鐘。21. 乙腦病毒主要存在于血清中，用一于分離病的血清一般不加抗凝劑。19. 中和試驗(yàn)必須制備高效價(jià)免疫血清或取高滴度病人恢復(fù)期血清。18. 常用的細(xì)胞培養(yǎng)液：MEM、1640。17. Alsever液是一種紅細(xì)胞保存液，含有抗凝劑檸檬酸鈉和細(xì)胞需要的養(yǎng)分葡萄糖。14. 空斑試驗(yàn)用于測(cè)定病毒的感染力。12. 協(xié)同作用一種物質(zhì)的存在能促進(jìn)其他物質(zhì)效應(yīng)的作用。10. C6/36是白蚊伊蚊細(xì)胞：分離登革熱、乙腦病毒。包涵體病毒在增殖過(guò)程中使寄主細(xì)胞內(nèi)形成一種蛋白質(zhì)性質(zhì)的病變結(jié)構(gòu)，在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)，多為圓形、卵圓形或不定形。潛伏期很長(zhǎng)可達(dá)數(shù)月、數(shù)年或數(shù)十年之久。7．中和抗體抗病毒機(jī)制：改變病毒表面的構(gòu)型，阻止病毒吸咐、穿入易感細(xì)胞進(jìn)行繁殖。TCID50—半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物感染量。（大小鼠、雌雄各半，初成年，受試后14天內(nèi)總死亡數(shù)）最小全數(shù)致死量（MLD）引起全部動(dòng)物死亡的最小感染劑量。4．細(xì)胞病變（CPE）、二甲亞砜（DMSO）細(xì)胞保護(hù)劑、5．半數(shù)致死量（LD50）導(dǎo)致半數(shù)動(dòng)物死亡的細(xì)菌感染量。MEM、RPMI 16403．細(xì)胞培養(yǎng)液分生長(zhǎng)液、維持液，兩者區(qū)別在血清含量不同。病毒檢驗(yàn)基本技術(shù)1．組織培養(yǎng)用玻璃器皿：硫酸、重鉻酸鉀液浸泡。急性期標(biāo)本接種于Vero細(xì)胞培養(yǎng)或藤鼠腹腔與小兒頑固性腹瀉有關(guān)的是：腸集聚粘附性大腸埃希氏菌引起旅游者腹瀉的最主要的是：腸產(chǎn)毒性大腸埃希氏菌鉤體病的主要傳染源是：鼠類(lèi)動(dòng)物。在CFT反應(yīng)中為了查Ag，常常降低反應(yīng)溫度，稱(chēng)為冷CFT，冷CFT反應(yīng)溫度通常是：4℃目前已知的可以在臨床上造成出血熱的病毒如下：布尼亞病毒科：流行性血熱、克里米亞剛果出血熱黃病毒科：登革出血熱絲狀病毒科：艾博拉出血熱。鑒別宋內(nèi)志賀菌與其他志賀菌的生化反應(yīng)是：鳥(niǎo)氨酸試驗(yàn)?？梢员３值鞍踪|(zhì)活性的蛋白質(zhì)沉淀方法是：硫酸銨、聚乙二醇、免疫沉淀法。漿細(xì)胞來(lái)源于活化B細(xì)胞。免疫球蛋白（Ig）的分類(lèi)主要依據(jù)—重鏈恒定部份CH的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。免疫原性含義：剌激機(jī)體免疫系統(tǒng)，有誘生抗體和致敏淋巴細(xì)胞的能力。分泌型IgA（S IgA）分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道黏膜表面。特點(diǎn)：游離抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物（IC），若IC不能被及時(shí)清除，即可在局部沉積，通過(guò)激活補(bǔ)體，并在血小板、中性粒細(xì)胞及其他細(xì)胞參與下，引發(fā)一系列連鎖反應(yīng)而致組織損傷。特點(diǎn)：過(guò)敏原進(jìn)入機(jī)體后，誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體。合成中tRNA搬運(yùn)氨基酸作用、rRNA構(gòu)成核糖體骨架、mRNA直接決定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。逆轉(zhuǎn)錄酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具備的。復(fù)制最主要的DNA聚合酶DNA聚合酶Ⅲ，該酶的核心聚合酶中，具有3’5’外切酶活性的亞基是e亞基。與人工合成DNA區(qū)別。DNA在合成中單核苷酸分子必須順序以共價(jià)鏈連接在已形成核酸鏈3’末端的羥基上。在合成DNA時(shí)限制性核酸內(nèi)切酶不是合成DNA的必要條件。反轉(zhuǎn)錄病毒基因組一般不具感染性。合成RNA時(shí)DNA雙鏈要解旋，解旋部位稱(chēng)為啟動(dòng)子。鑒定腸桿菌科基本條件；發(fā)酵葡萄糖、氧化酶陰性、還原硝酸鹽。如細(xì)菌多糖、聚合鞭毛蛋白等。TIAg的特點(diǎn): 非胸腺依靠性抗原,不需T細(xì)胞輔助即可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。糖類(lèi)發(fā)酵是鑒定細(xì)菌最常用的生化反應(yīng)。糖發(fā)酵試驗(yàn)原理：多糖→單糖→丙酮酸→酸性產(chǎn)物（或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）→PH下降→指示劑呈酸性變色。WHO制定的生物安全指南：《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》2004年11月出版第3版。我國(guó)第一部實(shí)驗(yàn)室生物安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)是：《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》?？瞻咝纬蓴?shù)PFU我國(guó)最早實(shí)驗(yàn)室生物安全衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)是：微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用守則?；罹?jì)數(shù)最準(zhǔn)確的方法傾注平板計(jì)數(shù)法。MPN法稀釋培養(yǎng)測(cè)數(shù)法。㎏15分鐘。固培養(yǎng)基2—3%，—%明膠:主含蛋白質(zhì),24℃以上溶解,20℃以下凝固四、抑制劑：五、指示劑：酚紅、溴甲酚紫、中性紅、甲基紅、溴香草酚藍(lán)、中國(guó)藍(lán)、酸性復(fù)紅等酸堿指示劑；美藍(lán)氧化還原指示劑。二、水分。要使＞2kb DNA片段的分辯率達(dá)到最大，所加電壓不得超過(guò)5V/cm?！?在酶切圖譜制作過(guò)程中,分離鑒定和純化DNA片段的標(biāo)準(zhǔn)方法聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）、瓊脂糖凝膠電泳。純化的mRNA在70%的乙醇中可保存1年以上。病毒的分子生物學(xué)鑒定：病毒核酸和蛋白質(zhì)測(cè)定。MPS單核