【正文】 團(tuán)16SrRNA70. 腸球菌屬：能在高鹽（% NaCl）高堿（pH ）40%膽汁培養(yǎng)基上和10～45℃生長，是G+菌中僅次于葡萄球菌的重要院內(nèi)感染病菌。如G+具有矛頭狀雙球菌可初步診斷。病原鑒定：血清群用顯微凝集試驗（MAT），血清型用交叉凝集吸收試驗，分子生物學(xué)技術(shù)。需氧或微需氧，是致病性螺旋體中唯一能人工培養(yǎng)的。生化特征：分解尿素、產(chǎn)生硫化氫。蛋白抗原（A蛋白）種屬特異無型特異，多糖抗原（A，B，C）是半抗原，有型特異。菌種取出須置于干冰或預(yù)冷的鉛質(zhì)容器內(nèi)，用完立即放回不可菌種解凍。無菌動物：體表腸道內(nèi)無菌、體內(nèi)無抗體。 49. 腸桿菌科的強(qiáng)選擇（SS瓊脂）弱選擇（EMB，麥康凱）。熒光顯微鏡的光源為超高壓汞燈（50—200W）。毒力有侵襲力和毒素。G+菌的感受態(tài)是由感受態(tài)因子（CF）的胞外信號誘導(dǎo)的。在人體血液中T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞總數(shù)的60—70%，；在胸導(dǎo)管則占95%以上。（VAP）；血凝素（HAs）。革蘭染色法：初染（草酸銨結(jié)晶紫）、媒染（碘液）、脫色（95%酒精）、復(fù)染（番紅）。質(zhì)粒載體具有特點：復(fù)制起點、抗菌素抗性基因、多種限制酶的單一切點、較高的拷貝數(shù)：只含一種核酸基因組復(fù)制缺乏完整的酶系統(tǒng)RNA病毒的RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA（CDNA）。22. 紫外線波長265～266nm時殺菌力最強(qiáng)。IgG和IgM能在血中直接中和病毒?？梢删謩e接種克氏雙糖鐵（KIA）尿素靛基質(zhì)動力（MIU）來定屬。營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體的方式：易化擴(kuò)散、主動運轉(zhuǎn)（由透性酶完成）、基團(tuán)移位（糖類由磷酸酶磷酸化進(jìn)入胞內(nèi)，不能再透出菌體）。IgE可與肥大細(xì)胞膜上的Fc受體結(jié)合。15. 免疫器官：骨髓、胸腺、脾、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾和黏膜免疫系統(tǒng)。溫和噬菌體是噬菌體基因組整合于宿主菌染色體中，有溶原性周期、溶菌性周期。細(xì)菌質(zhì)粒在重組DNA技術(shù)中常用的載體。增殖：以二分裂、出芽、巨形體釋放顆粒方式。致病性島：由基因編碼決定的一團(tuán)與致病性相關(guān)的基因組。具有快速、敏感、高通量檢測平臺。其具有特異、快速、靈敏、特異性強(qiáng)、操作簡便、能夠定量。各藥敏紙片間距不少于24mm，距平板內(nèi)緣不小于15mm。病毒分類：目、科、亞科、屬、種。3. 藥物敏感試驗：紙碟法、小杯法、凹孔法、試管法。：核酸雜交、PCR技術(shù)、基因芯片技術(shù)。熱變性DNA一般經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性,此過程稱之為 退火，Tm低25℃左右的溫度是復(fù)性的最佳條件。一種是罕見切割酶，一種是常用切割酶。10. 雜交分：斑點，菌落原位，Southern（DNA）印跡，Northern（RNA，DNA）印跡。12. 細(xì)菌的突變：基因突變（又稱點突變；有堿基對的置換、插入、或缺失、錯碼）、染色體畸變 （易位、倒位、重復(fù)、缺失）。對紫外線敏感1015分鐘失去活性。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有核蛋白體（蛋白合成地），核質(zhì)（主要遺傳物質(zhì)）質(zhì)粒，胞質(zhì)顆粒，是細(xì)菌蛋白質(zhì)和酶類合成的重要場所。IgG在體液中含量最多，分子量小是唯一能通過胎盤的抗體。補(bǔ)體激活酶促級連反應(yīng)。大腸桿菌呈++，產(chǎn)氣桿菌呈++。據(jù)親和性及作用靶點分為:神經(jīng)毒素、細(xì)胞毒素、腸毒素。細(xì)胞膜的主要功能：物質(zhì)納泄、生物合成、呼吸作用、形成中介體。質(zhì)粒：不依賴染色體而復(fù)制，不相容性，轉(zhuǎn)移性，指令性，大多數(shù)質(zhì)粒在自然狀態(tài)下是一種閉合環(huán)狀雙鏈DNA。潔凈度可達(dá)百級，只保護(hù)樣品。銀染B液—5%硝酸銀+濃氨水（）成薄霧狀。干擾素（IFN）具有廣譜抗病毒作用，只能抑制病毒，即通過誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白（AVP）發(fā)揮效應(yīng)。一般有鏈，嗜血，芽胞菌有此功能。41. 基因重組可使基因再激活表現(xiàn)為：交叉復(fù)活和多重復(fù)活。目前以細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)特點作最高一級分類依據(jù)將原核界分為薄，堅，軟，疵壁四門。用綠色濾光片。57. 突變種純系動物：實驗動物正常染色體中某個基因發(fā)生了變異的具有各種遺傳缺陷的突變品系動物。凍干菌種只能使用一次，凍干菌種打開后需要以傳代保存形式保留工作菌種。63. 真菌，霍亂，銅綠及糞堿需在室溫保存，而腦膜炎，淋球，初次分離的流感嗜血菌保存于37℃。靜脈血3—5毫升。病原分離：接種BSK培養(yǎng)基33℃培養(yǎng)。電鏡下基要本結(jié)構(gòu)：柱形原生質(zhì)體、內(nèi)鞭毛、外膜標(biāo)本：血液、腦脊液在發(fā)病后10天內(nèi)，出現(xiàn)發(fā)熱但未用藥前，不能即時送檢，血液用不含枸櫞酸鈉抗凝520℃保存，1周內(nèi)接種。(90%對人致病)B群鏈CAMP試驗陽性（鑒定指標(biāo)35℃卵育），馬尿酸鈉水解試驗陽性D群鏈七葉甘水解試驗變黑色為陽性，%氯化鈉生長試驗(黃色)快速檢測:酶標(biāo)免疫測定法、PCR（A群鏈致熱外毒素A，B，C基團(tuán)speA，speB，speC各溶血素O基團(tuán)slo）。幾乎所有的肺鏈對Optochin敏感。通常采3管腦脊液（化學(xué)、微生物、細(xì)胞學(xué)）含添加劑的巧克力平板（CAP）和血瓊脂平板（BAP），如不能立即接種，則接種至預(yù)熱35℃的轉(zhuǎn)運—分離（TI）培養(yǎng)基中保溫通氣，可保存7天，血液采集后1分鐘內(nèi)注入肉湯中。培養(yǎng)基中應(yīng)含萬古霉素、多粘菌素B。3435℃，分裂為3033小時。密螺抗原試驗（證實試驗）FTAABS作為診斷梅毒“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗。76. 志賀氏菌分：痢疾（A群），福氏（B群），鮑氏（C群）（半透明、光滑型菌落），宋內(nèi)（D群）（扁平粗糙型菌落）四群，我國以福氏和宋內(nèi)常見，無莢無芽無鞭，KIA：K/A，產(chǎn)氣＋/－，H2S－，MIU－＋/――，最后可用診斷血清作群型鑒定群血清型葡萄糖乳糖甘露醇鳥氨酸脫羧酶痢疾志賀菌A110+福氏B16++鮑氏C118++宋內(nèi)D1+++只有一個血清型，Ⅰ相和Ⅱ相加熱60℃10分鐘殺死，有強(qiáng)烈的內(nèi)毒素，作用于腸黏膜，使其通透性增高。所致疾病4類型：（1）、腸熱癥：第一次菌血癥，發(fā)熱、不適、全身痛，與菌的感染劑量有關(guān)，通常潛伏期為2周，第二次菌血癥，高熱710天，緩脈、肝脾腫大，皮膚出現(xiàn)玫瑰疹，外周白細(xì)胞明顯下降，嚴(yán)重者有出血或腸穿孔等并發(fā)癥。尿素酶試驗與變形桿菌區(qū)別。有明顯多形性，呈球狀或絲狀，生長于10～43℃，在固體培養(yǎng)基上普通和奇異呈遷徙生長現(xiàn)象，三屬氧化酶陰性，苯丙氨酸脫氨酶陽性G桿菌，加入1%石炭酸或苯乙醇使終濃度為1g/%可抑制變形菌遷徒樣生長?？焖贆z測；PCR（高度特異性基因：fra、pla、inu、hms）、免疫檢測（F1抗原）所有疑似鼠疫病人都需采取血標(biāo)本，疑似腺鼠疫病人取腫大淋巴結(jié)穿剌液；肺鼠疫病人取咳痰、咽拭子標(biāo)本。83. 沙雷菌：最適溫10～36℃，4%氯化鈉下可長，產(chǎn)生靈紅霉素（非水溶）和吡羧酸（水溶），關(guān)鍵生化是DNA＋和葡萄糖酸鹽＋。深入鑒定：流行株與非流行株依靠噬菌體生物分型法。87. 氣單胞菌最適生長溫度30℃，但在0～45℃皆可生長。91. 有芽胞的厭氧菌：只有梭菌屬包括83個種。氣液相色譜已成為鑒定厭氧菌及其分類比較可靠的方法。白喉毒素是一種毒性強(qiáng)、抗原性強(qiáng)的蛋白質(zhì)，B棒狀桿菌噬菌體毒素基因（tox+）編碼的蛋白質(zhì)，PCR擴(kuò)增tox+基因輔助診斷不能確診。臨床分為3個期：卡他期痙咳期恢復(fù)期。莢膜的重要功能：抗吞噬。生物安全防護(hù)水平（BSL4）。二、層析凝膠過濾法（分子篩層析法）主要用于蛋白或核酸分離。十二烷基硫酸鈉作用是解離蛋白，常用蛋白染料考馬斯亮藍(lán)，甘氨酸—緩沖瓊脂免疫電泳蛋白分離和鑒定脈沖電場凝膠電泳（PFGE）核酸分離用瓊脂糖作介質(zhì)。方法是以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑和標(biāo)本滴加在膜上，通過滲濾而逐步反應(yīng)，全程可于數(shù)分鐘內(nèi)完成，陽性在膜上呈紅色斑點?！?在酶切圖譜制作過程中,分離鑒定和純化DNA片段的標(biāo)準(zhǔn)方法聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）、瓊脂糖凝膠電泳。㎏15分鐘。我國第一部實驗室生物安全國家標(biāo)準(zhǔn)是：《實驗室生物安全通用要求》。TIAg的特點: 非胸腺依靠性抗原,不需T細(xì)胞輔助即可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。反轉(zhuǎn)錄病毒基因組一般不具感染性。復(fù)制最主要的DNA聚合酶DNA聚合酶Ⅲ，該酶的核心聚合酶中，具有3’5’外切酶活性的亞基是e亞基。特點：游離抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物（IC），若IC不能被及時清除，即可在局部沉積，通過激活補(bǔ)體，并在血小板、中性粒細(xì)胞及其他細(xì)胞參與下，引發(fā)一系列連鎖反應(yīng)而致組織損傷。漿細(xì)胞來源于活化B細(xì)胞。急性期標(biāo)本接種于Vero細(xì)胞培養(yǎng)或藤鼠腹腔與小兒頑固性腹瀉有關(guān)的是：腸集聚粘附性大腸埃希氏菌引起旅游者腹瀉的最主要的是：腸產(chǎn)毒性大腸埃希氏菌鉤體病的主要傳染源是：鼠類動物。（大小鼠、雌雄各半，初成年，受試后14天內(nèi)總死亡數(shù)）最小全數(shù)致死量（MLD）引起全部動物死亡的最小感染劑量。包涵體病毒在增殖過程中使寄主細(xì)胞內(nèi)形成一種蛋白質(zhì)性質(zhì)的病變結(jié)構(gòu)，在光學(xué)顯微鏡下可見，多為圓形、卵圓形或不定形。17. Alsever液是一種紅細(xì)胞保存液，含有抗凝劑檸檬酸鈉和細(xì)胞需要的養(yǎng)分葡萄糖。23. 鼻咽拭子的除菌處理：加抗生素終濃度20 000U/ml，4℃作用4小時，2000轉(zhuǎn)/ min，離心20分鐘。26. 病毒RNA的堿基序列與mRNA完全相同，稱為正鏈RNA病毒，這種病毒RNA可直接起病毒mRNA的作用。用1:1000的升汞固定5min。結(jié)核病動物接種的鑒別診斷所接種的敏感動物豚鼠，腹股溝皮下。主要用涂片染色顯微鏡檢查，鼻黏膜或皮損處取材，用抗酸性染色后檢查。內(nèi)毒素能侵襲小腸和大腸粘膜引起急性腸炎，致病因素：粘附、侵襲、產(chǎn)生毒素和分子模擬機(jī)制（并發(fā)癥一格林一巴利綜合征），產(chǎn)生細(xì)胞緊張性腸毒素、細(xì)胞毒素和細(xì)胞致死性膨脹毒素而致病臨床：腹痛、腹瀉、發(fā)熱，多見散發(fā)，是夏秋季腹瀉和旅行者腹瀉的主要病因之一。熒光素是綠色熒光素（溶于水不溶于氯化）。病原鑒定方法： 標(biāo)本：腦脊液、血液、胸水。并取3份，一份酸處理，一份熱處理50℃水30分鐘。動力和鳥氨酸脫羧酶陰性是本菌最大特點。專性細(xì)胞內(nèi)寄生。培養(yǎng)特性：動物接種是最常用的培養(yǎng)方法 ,采用豚鼠、小鼠可對多種病原性立克次體進(jìn)行繁殖。但恙蟲病立克次體的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和抗原成分不同，無粘液層、無微莢膜、無肽聚糖和脂多糖，故另立為東方體屬。嚙齒類動物、兔類、鳥類為傳染源。甲型（HAV）：正鏈小RNA病毒科，球形正十二面體，病毒顆粒無包膜，核酸RNA有感染性。丙型（HCV）：黃科病毒，球型顆粒，1：1000甲醛液（福爾馬林）37度92小時可滅活。糞—口傳播115. 人類免疫缺陷（HIV）：是獲得性免疫缺陷綜合征。分離病原：在生物安全3級實驗室（BSL1）、生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，最敏感的分離技術(shù)是共培養(yǎng)，特征性細(xì)胞病變?yōu)槿诤霞?xì)胞。按抗原分；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3個血清型。病毒為螺旋對稱，有包膜，單股負(fù)鏈RNA不分節(jié)段，有6個結(jié)構(gòu)基因。IgG持續(xù)終身。A549（人肺癌）傳代細(xì)胞、VeroE6（非洲綠猴腎）細(xì)胞、2BS（人胚肺二倍體）細(xì)胞、RL（大白鼠肺）細(xì)胞用于病毒分離。病毒在胞內(nèi)繁殖，芽生釋放。病毒RNA在細(xì)胞漿內(nèi)直接起mRNA作用，翻譯出結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白，在胞漿粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)裝配成熟，出芽釋放。4個血清型，分離細(xì)胞（C6/36株）。甲型流感病毒HA易發(fā)生點突變，導(dǎo)致氨基酸序列發(fā)生替換，造成抗原性漂。檢測抗體經(jīng)典法：血凝抑制試驗、補(bǔ)體結(jié)合試驗、中和試驗122．克里米亞—剛果出血熱CCHE：傳播媒介蜱，宿主蜂，又新疆出血熱。最易感染的動物是出生2～3天的乳鼠，經(jīng)皮下接種，小鼠是常用的動物模型。病毒分離必須在生物安全4級實驗室進(jìn)行。ELISA夾心法用于基層診斷和流行病學(xué)調(diào)查。在結(jié)構(gòu)基因中，H、N基因最易變異的基因。血凝素HA只能凝集猴紅細(xì)胞，并能與宿主細(xì)胞吸附；血溶素HL具有溶血和使細(xì)胞發(fā)生融合形成多核巨細(xì)胞的作用。口服脊灰疫苗（OPV），脊灰Ig G≥1：100為陽性。報告定性結(jié)果時應(yīng)注明反應(yīng)條件、引物序列，報告定量結(jié)果時注明實驗方法、樣品種類及量。感染后損傷免疫系統(tǒng)，引起致死性機(jī)會感染或腫瘤，乙類。丁型（HDV）：衛(wèi)星病毒科，是一種缺陷病毒，需在（HBV）或嗜肝DNA病毒的輔助下才能復(fù)制增殖。1：4000甲醛液（福爾馬林）37度71小時可滅活。采樣黏膜組織，～，在95%N2，5%CO2中生長好，菌落呈“油煎蛋”）樣菌落，取樣：黏膜組織。交叉凝集試驗稱外斐反應(yīng)（WeilFelix reaction），用于立克次體病的輔助診斷。目前常用的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)有雞胚成纖維細(xì)胞、L929細(xì)胞、Vero細(xì)胞,用PCR方法進(jìn)行鑒定。衣原體的兩種形態(tài)：原生小體（EB，小而致密的顆粒結(jié)構(gòu)，具感染性，姬染紫紅色，無繁殖力）。利用莢膜腫脹試驗分型，3型和12型，magA基因作該菌診斷。感染臨床主要有2種形式：軍團(tuán)菌病LD（肺炎型）龐提阿克熱PF109. 克雷伯桿菌：又稱肺炎桿菌，以肺炎克雷伯菌多見，G—有較厚莢膜，多數(shù)有菌毛，無芽孢和鞭毛，菌體呈卵圓形或球桿狀成雙排列，有時菌落出現(xiàn)黏液型用接種環(huán)可成絲。無芽胞、無莢膜、有鞭毛，需氧菌（5%CO2剌激生長）常規(guī)不易著色，最適為36℃，初次分離要L半胱氨酸，含鐵鹽可促進(jìn)生長，主要可用活性碳－酵母浸出液平板（BCYE），不分解糖。107. 流感嗜血桿菌：寄生人體鼻咽部，抵抗力弱，嬰幼兒易感，G—球桿菌，用石碳酸復(fù)或美藍(lán)單染呈現(xiàn)兩端濃染。標(biāo)本采0—5日內(nèi)用藥前，于運送培養(yǎng)基中4小時內(nèi)檢。一般瘤型和界線類患者標(biāo)本中可找到細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)存在，有診斷意義。蠟質(zhì)D為細(xì)胞壁主要成份，是一種肽糖脂與分枝菌酸復(fù)合物，能引起遲發(fā)性過敏反應(yīng)，并具有佐劑作用。103. 結(jié)核分枝桿菌：人型和牛型，專性需氧，曾發(fā)現(xiàn)G＋非抗酸顆粒稱Much顆粒，無芽無鞭無莢，燭缸法不適，應(yīng)用二氧化碳培養(yǎng)皿，常用羅－琴或米氏7H10培養(yǎng)基，35～40℃可長，35～37最適，～，18h分裂一代，2～6周才能長出菌落，不發(fā)酵糖類，人型的煙酸，硝酸鹽還原，煙酰胺酶試驗均陽性。27. 蠟樣桿菌能耐受100℃30min。將含病毒的懸液20006000轉(zhuǎn)/ min，離