【正文】 0三糖鐵與雙糖鐵區(qū)別：蔗糖。需氧芽胞菌除炭疽外均有鞭毛。少數(shù)Ag屬此類。共同特點：TIAg刺激機體產(chǎn)生的Ab僅是免疫球蛋白M，不引起回憶應(yīng)答，不引起細胞免疫。 核酸檢驗基本技術(shù) 轉(zhuǎn)錄在生物體內(nèi)，DNA指導(dǎo)的RNA合成過程。大腸菌的RNA聚合酶有5個亞基，其o亞基有啟動子作用。2．變態(tài)反應(yīng)（超敏反應(yīng)）是指機體對某些抗原初次應(yīng)答后，再次接受相同抗原刺激時，發(fā)生的一種以機體生理功能紊亂或組織細胞損傷為主的特異性免疫應(yīng)答。DNA多聚酶只能結(jié)合在一長段DNA單鏈的一小段局部雙鏈結(jié)構(gòu)上，才能順利開始DNA合成。在合成發(fā)生錯誤時，DNA多聚酶會切除錯誤核苷酸，于此處加上正確的核苷酸。大腸桿菌DNA損傷修復(fù)時填補缺口最重要的酶DNA聚合酶Ⅰ。大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段沒有5’3’外切酶活性。在體內(nèi)DNA復(fù)制必須有RNA引物。Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)：即速發(fā)型，又稱過敏反應(yīng)。由IgE介導(dǎo)，肥大細胞和嗜堿粒細胞等效應(yīng)細胞以釋放生物活性介質(zhì)的方式參與反應(yīng)；發(fā)生快，消退亦快；Ⅱ型變態(tài)反應(yīng)：細胞毒型/細胞溶解型，抗體（多屬IgG、少數(shù)為IgM、IgA）首先同細胞本身抗原成分或吸附于膜表面成分相結(jié)合，然后通過四種不同的途徑殺傷靶細胞 Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)：即免疫復(fù)合物型，又稱血管炎型超敏反應(yīng)。 Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)：即遲發(fā)型（細胞介導(dǎo)型），Ⅳ型是由特異性致敏效應(yīng)T細胞釋放的LF介導(dǎo)的。是機體黏膜防御感染的重要因素。產(chǎn)生抗體的細胞是B細胞，本質(zhì)是免疫球蛋白（Ig）。T細胞是：細胞毒性T細胞。特異性B細胞經(jīng)過抗原識別、活化、增殖、分化成為漿細胞?？捎糜跈z測致瀉大腸埃希菌腸毒素的方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測LT和ST、雙向瓊脂擴散試驗檢測LT、乳鼠灌胃試驗檢測ST.瓊脂糖凝膠電泳緩沖液通常用：1**TBE，溴化乙錠是誘變劑。卡介苗簡稱為：BCG鉤瑞螺旋體可以引起肺部感染Vero細胞毒素是O157：H7大腸桿菌的最主要致病物質(zhì)耐熱直接溶血素屬于副溶血弧菌的主要致病物質(zhì)Ag與Ab結(jié)合的部位是：VH+VLAg決定基是: 決定Ag特異性最小化學(xué)基團HIV造成免疫系統(tǒng)的多種功能發(fā)生缺陷的主要原因是: T4淋巴細胞耗竭EBV除引起人類皮膚和黏膜的皰疹樣病變外，還與下列人類鼻咽癌疾病密切相關(guān)核衣殼是病毒粒子的主要結(jié)構(gòu)，核衣殼是由衣殼和核酸成分組成的做補體結(jié)合試驗前血清加熱滅活以破壞它所含有的補體，通常羊血清用58℃溫度滅活我國于1981年開始用地鼠腎細胞疫苗，近幾年又開始應(yīng)用更為先進的狂犬病疫苗，這種疫苗是: Vero細胞狂犬病疫苗當(dāng)進行抗球蛋白試驗查不完Ab時，其中一個重要試劑是第二Ab，在抗球蛋白試驗中第二抗體是雙價抗體在CFT反應(yīng)中有5種成份：Ag、被檢血清、補體、溶血素和SRBC，CFT反應(yīng)中補體的作用是: 非特異性結(jié)合。病毒在胞漿內(nèi)繁殖，芽生釋放。發(fā)病一周內(nèi)取血液，第二周以后取尿，有腦膜炎型癥狀者取腦脊液進行檢查。2．人工綜合組織培養(yǎng)營養(yǎng)液：氨基酸、糖類、無機鹽、維生素、輔助生長因子。EDTA、胰蛋白酶分散作用。是評價化學(xué)毒物急性毒性大小最重要的參數(shù)。半數(shù)感染量（ID50）導(dǎo)致半數(shù)組織培養(yǎng)細胞發(fā)生感染的細菌數(shù)量或毒素劑量。一、致死劑量LD: (1)絕對致死劑量LD100 (2)最小致死劑量LD01 (3)最大耐受劑量LD0二、效應(yīng)、反應(yīng)、劑量—效應(yīng)、劑量—反應(yīng)、關(guān)系曲線6．超過濾法：用不同孔徑的火棉膠濾膜過濾病毒懸液。8．遲發(fā)感染的特點：又稱慢發(fā)病毒感染。一旦癥狀出現(xiàn)，多為亞急性、進行性，并造成死亡。9．引起腦膜炎的腸道病毒：腸道病毒70型、腸道病毒71型、柯薩奇A組16型、脊髓灰質(zhì)炎病毒。11. 蓄積系數(shù)經(jīng)值：＜1高度、1—3明顯、3—5中度、＞5輕度。13. 病毒病的常規(guī)實驗室診斷指病毒的分離和鑒定、形態(tài)學(xué)檢查、免疫學(xué)鑒定、分子生物學(xué)鑒定。15. Versen又稱EDTA16. 病毒的形態(tài)學(xué)檢查方法電子顯微鏡（EM）、光學(xué)顯微鏡、超速離心法、超過濾法、X射線晶體衍射法。經(jīng)過69千帕，15分鐘的高壓滅菌，放置在4℃的環(huán)境內(nèi)，保存?zhèn)溆?。加入HEPES具有較強的緩沖能力。20. 原位雜交可直接檢測或定位細胞內(nèi)毒基因。22. 麻疹病毒主要吸附在白細胞上，加抗凝劑可提高分離率。24. 大便標(biāo)本的除菌處理：加抗生素終濃度10 000U/ml，4℃過夜或1000轉(zhuǎn)/ min，離心20分鐘。25. 流式細胞術(shù): (1)一種細胞分選或分析技術(shù)。(2)一種對懸液中細胞、微生物或細胞器等進行單個快速識別、分析和分離的技術(shù)。(3) 用熒光劑對細胞特定成分染色，利用流式細胞儀對處在快速、直線、流動狀態(tài)中的單細胞或生物顆粒進行多參數(shù)、快速定量分析，并能對特定群體加以分選的現(xiàn)代細胞分析技術(shù)。病毒RNA堿基序列與mRNA互補者，稱為負鏈RNA病毒，負鏈RNA病毒的顆粒中含有依賴RNA的RNA多聚酶，可催化合志互補鏈。檢驗技術(shù)資格考試考點精要——微生物學(xué)檢驗（中級下）101. 炭疽桿菌：最大的致病G＋桿菌，菌落灰白色，表面干燥呈“毛玻璃”狀，稍隆起，低倍鏡下菌落邊緣呈明顯卷發(fā)狀如（獅鬃），人工培養(yǎng)呈竹節(jié)狀長鏈，不分解乳糖，對碘和氧化劑敏感，有菌體多糖，莢膜多肽，芽胞，炭疽毒素四抗菌素原，質(zhì)粒編碼：毒力因子毒素、莢膜。各型均應(yīng)采血液標(biāo)本。毒力鑒定：質(zhì)粒電泳圖譜分析 PCR擴增其選擇培養(yǎng)基是戊烷脒血平板，鑒定試驗有：青霉素敏感試驗、串珠試驗，噬菌體裂解試驗（AP631株），重碳酸鹽毒力試驗（有毒力形成芽胞呈M型）。102. 產(chǎn)單核李斯特菌：有鞭毛，無牙胞對人致病，在羊血平板上β溶血環(huán)，25℃有動力，37℃動力緩慢（此特征可作為初步判定），能在4℃進行冷增菌，在半固體中可現(xiàn)倒傘狀，致病物質(zhì)為李斯特菌溶素O，通過胎盤或產(chǎn)道感染新生兒是重要特點，常伴EB病毒引起傳單?？沙霈F(xiàn)Koch現(xiàn)象（初次不發(fā)生速發(fā)型過敏反應(yīng)），是Koch在1891年觀察到。結(jié)核菌素舊結(jié)核菌素（OT）與結(jié)核菌素純蛋白衍化物（PPD）的通稱。依賴細胞免疫，遲發(fā)超敏反應(yīng)伴隨細胞免疫存在而存在。每油鏡視野1—9條抗酸菌3+結(jié)核分枝桿菌，無內(nèi)外毒素，致病性與其索狀因子，蠟質(zhì)D，分枝菌酸有關(guān)。104. 麻風(fēng)病原： Hamsen在1937年發(fā)現(xiàn)麻風(fēng)分枝桿菌。G＋，無動力無芽無莢，人是唯一的宿主和傳染源，分瘤型和結(jié)核型。麻風(fēng)菌的有效保護性免疫取決于細胞介導(dǎo)的免疫，沒有體液免疫缺陷。除臨床檢查外，皮膚切刮法涂片查菌及組織病理學(xué)檢查可有助于麻風(fēng)診斷的確定。結(jié)核樣型患者中很少找到細菌。有莢膜，不形成芽胞。最適溫度為37～42℃。主要是污染水、食物。分離培養(yǎng)：采樣棉拭子涂于萬古霉素、多粘菌素的肉湯增菌培養(yǎng)，再接種于哥倫比亞血(5%脫纖維綿羊血)平板上,42℃培養(yǎng)微需氧（85%N、10%CO5%O2）23天，不溶血、灰色扁平、濕潤光澤、像水滴，邊緣完整發(fā)亮。再做42℃、25℃生長試驗（布氏桿菌肉湯），H2S試驗陽性（排除胎兒彎曲菌）、馬尿酸鹽水試驗陽性（排除結(jié)腸彎曲菌）。：條件致病菌，需氧，G－桿菌，有鞭毛，20～42℃長，最適產(chǎn)毒溫度是26℃，是35℃，4℃不長，液面可形成菌膜，色素有：綠膿素（溶于水和氯仿），氧化酶陽性，液化明膠、還原硝酸鹽，在42℃條件下能生長。O抗原有兩種：內(nèi)毒素脂多糖原內(nèi)毒素蛋白OEP（類屬抗原），選擇培養(yǎng)基：NAC（乙酰氨基半乳糖）。要新鮮血液（含Ⅹ和Ⅴ因子）培養(yǎng)基，不溶血，可生長在接種于血平板上的金黃色葡萄球菌的周圍，流感嗜血桿菌菌落較大，越遠越小，即衛(wèi)星現(xiàn)象。莢膜是本菌的主要毒力因子，根據(jù)莢膜多糖抗原分為af 6個血清型，b型致病力最強；依據(jù)吲哚試驗、脲素反應(yīng)、鳥氨酸代謝分為：8個生物型，大部分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型，其中以Ⅰ、Ⅲ型為主，血清型b型生物型為Ⅰ型。接種于巧克力色、含腦心浸液的血瓊脂平板。108. 軍團菌：1976年，USA費城，G—為胞內(nèi)寄生菌。水解馬尿酸是嗜肺軍團菌特征。有雜菌用選擇培養(yǎng)基（GVPC），是在BCYE中加入甘氨酸、多粘菌素B、萬古霉素及放線酮。血液、痰、尿68℃避光、隔熱運送。證實試驗：免疫熒光方法。具有O抗原和K抗原。主要采痰液，用無菌鹽水洗3次+ 1%胰酶37度水中90分鐘使痰液均質(zhì)化，該菌產(chǎn)生胞外毒性復(fù)合物(ETC)，主要成分為莢膜多糖（63%）、脂多糖（30%）和少量蛋白質(zhì)（7%）。莢膜也與致病力有關(guān)。血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱，菌落大呈黏液型，光亮黏稠，菌落易融合，發(fā)酵乳糖，呈現(xiàn)有色菌落。rmpA基因作該菌輔助診斷。110. 衣原體：嚴(yán)格真核細胞內(nèi)寄生的原核細胞型微生物，非運動性的細菌，多少呈球形、堆狀，G，一般寄生在動物細胞內(nèi)。沙眼，鸚鵡熱嗜衣原體，肺炎嗜衣原體。68日齡雞胚卵黃囊中繁殖，有包涵體。始體（網(wǎng)狀體）（RB，大而疏松的結(jié)構(gòu)，衣原體發(fā)育中的繁殖體，不具感染性，具增殖力色，絲狀分裂增，姬染蘭殖），產(chǎn)生類似于G桿內(nèi)毒素。111. 立克次體：以節(jié)肢動物為傳播媒介，嚴(yán)格細胞內(nèi)寄生的原核細胞型微生物。免疫是以細胞免疫為主，體液免疫為輔。雞胚卵黃囊常用于立克次體的傳代。WHO推薦金標(biāo)方法間接免疫熒光方法（IFA）孵育最適溫度為37℃。標(biāo)本保存—80或160℃。另一種為種特異性抗原，與外膜蛋白構(gòu)成，不耐熱。斑疹傷寒、恙蟲病立克次體的脂多糖與普通變形桿菌某些菌株（如OX 1X2 、OX k 等）的菌體抗原有共同的抗原成分。 補體結(jié)合試驗是立克次體最常用的方法。病人是唯一的傳染源，體虱傳播媒介，在人與人之間傳播（二）莫氏立克次體() ：又名斑疹傷寒立克次體，是地方性斑疹傷寒的病原體。（三）恙蟲病立克次體 () ：恙蟲病立克次體是恙蟲病的病原體。人類通過恙螨幼蟲叮咬而感染112. 支原體：無細胞壁，僅有細胞膜（外，中，內(nèi)，中間是磷脂，內(nèi)外是蛋白質(zhì)及糖）呈高度多形性，能通過濾菌器，最小原核細胞微生物。分離培養(yǎng)是確診支原體感染的可靠方法之一，接種平板后用膠紙封保濕，培養(yǎng)基中加入膽固醇、血清蛋白和酵母浸液，加酚紅，醋酸鉈及抗生素抑菌。40倍鏡下可見油滴狀菌落，100倍下可見桑椹狀菌落?？焖贆z測：雙抗體夾心ELISA法檢測外膜蛋白、免疫印跡技術(shù)檢測抗原114. 肝炎病毒：甲型（HAV）、乙型（HBV）、丙型（HCV）、丁型（HDV）、戊型（HEV）。是在各種條件下抵抗外界變化能力最強的病毒之一。糞—口傳播。前兩者空心包膜，表面抗原（HBsAg）組成，不含核酸，沒感染性。長鏈為—鏈，短鏈為+鏈，短鏈5”末端固定，3”末端不固定。母嬰、輸血、血源性傳播。核心含單股負鏈共價閉合環(huán)裝RNA、HDAg抗原，核衣殼是一粗糙球形結(jié)構(gòu)。輸注含HDV的血液或血制品。有鎂、錳離子存在可保持完整性。簡稱艾滋病（AIDS），主要通過性接觸、血液、母嬰傳播。世界81第一例，我國85。對理化因素抵抗弱，但在2022℃活7天，冷凍血制品中需68℃加熱72小時才滅活，對紫外線不敏感。血量：成、兒1020ml，嬰幼兒12 ml，30小時內(nèi)處理，室溫保存。核酸檢測：定性：PCR、RTPCR技術(shù)；定量：逆轉(zhuǎn)錄PCR 實驗（RTPCR）核酸序列擴增實驗（MASBA）。用ELISA測p24抗原，可使感染的窗口期縮短1左右。WHO及我國推薦HIV感染診斷用：血清學(xué)抗體檢測（監(jiān)測、診斷、血液篩查），篩查試劑須是HIV1/2混合型。小RNA病毒科，單股正鏈無包膜，圓球形顆粒，耐寒70度保存活力8年，不耐熱。脊灰病毒基因組呈單鏈線性，病毒的主要抗原是VP1蛋白。標(biāo)本：糞便（分離主要標(biāo)本），糞便排出病毒主要在麻痹前期、麻痹后2周內(nèi)，排毒呈間歇性，故采樣在14天內(nèi)采集2份糞便，時間間隔24—48小時，量5—8克。糞便須進行氯仿處理，可除支細菌、真菌、有包膜病毒、細胞毒性脂類，使聚集的病毒分散。副黏病毒科。包膜表面兩種刺突；血凝素HA、血溶素HL，均為中和抗原可誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。只有一個血清型，多個基因型。病原分離：取出疹前3天至疹后3天的咽拭子，尿液標(biāo)本或血中淋巴細胞，不超過出疹前后5天。IgM在出疹7—10天達高峰，28天內(nèi)都能檢測到。IgG用于人群抗體陽性率調(diào)查、抗體水平測定、疫苗初免結(jié)果觀察。F蛋白是一種具有膜融合特性的糖蛋白。由漢坦病毒HV引起的自然疫源性疾病。單負分節(jié)段RNA，基因組分3個片段（L、M、S），分別編碼RNA聚合酶、包膜糖蛋白、核衣殼蛋白。發(fā)病5日之內(nèi)靜脈血接種，用標(biāo)準(zhǔn)抗體做免疫熒光試驗、標(biāo)準(zhǔn)毒株抗血清做中和試驗、交叉阻斷試驗，ELISA、反向間接血凝試驗測抗原。目前我國所使用的流行性出血熱的疫苗是: 細胞培養(yǎng)滅活疫苗。新疆出血熱病毒。單股負鏈RNA，長絲狀。病毒基因組長19kb，由7個連續(xù)排列的基因組成，分別編碼；核蛋白、基質(zhì)蛋白、多聚酶、3種小蛋白。急性期血標(biāo)本接種于Vero（非洲綠猴腎）細胞培養(yǎng)，或豚鼠腹腔內(nèi)。120. 流行性乙型腦炎：又日本腦炎，（乙類），經(jīng)三帶啄庫蚊傳播媒介，豬主要宿主和傳染源。病毒的結(jié)構(gòu)蛋白有：M（包膜內(nèi)），C（衣殼內(nèi)），E（嵌在包膜上的糖蛋白）三種，組成血凝素，囊膜內(nèi)尚有內(nèi)膜蛋白（M），參與病毒的裝配。乙腦病毒以接種卵黃囊最佳，常用檢測標(biāo)本：血液、腦脊液、尸檢標(biāo)本、蚊蟲，保持冷鏈。抵抗力弱不耐熱。乙腦早期診斷：潛伏期是4—21天，用發(fā)病4—7天血液、腦脊液用ELISA測特異性IgM抗體.。E蛋白主要有A、B、C三個不重疊抗原區(qū)，為主要的毒粒，能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生保護性中和抗體，直接從標(biāo)本中分離病毒是確診登革熱的可靠方法。用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）檢測登革熱RNA。屬布尼亞病毒科、內(nèi)羅畢病毒屬。反向間接血凝（RPHA）、雙抗體心ELISA法檢測急性末梢血液，可早期快速診斷。 123．流行性感冒病毒：正黏科分節(jié)單負鏈RNA病毒，多呈球形，核心由RNA蛋白和P蛋白組成，據(jù)病毒粒核蛋白（NP蛋白）膜蛋白（MP蛋白）的抗原特性分甲、乙、丙三型，包膜（由血紅細胞凝集素HA、神經(jīng)氨酸酶NA）后者是劃分流感病毒亞型的依據(jù)，