【正文】 凝集試驗（MAT），血清型用交叉凝集吸收試驗，分子生物學(xué)技術(shù)。2型致病其屬于R群，屬特異基團(tuán)tuf、種特異基團(tuán)16SrRNA70. 腸球菌屬：能在高鹽（% NaCl）高堿（pH ）40%膽汁培養(yǎng)基上和10～45℃生長，是G+菌中僅次于葡萄球菌的重要院內(nèi)感染病菌。：菌體形似彈簧，運動活潑，兩端尖直，有細(xì)胞壁和膜，原生質(zhì)圓柱體且有34根周漿鞭毛，G抵抗力極弱，對青霉素、四環(huán)素、紅霉素、砷劑敏感。腸致病型（EPEC）：作用小腸，水樣腹瀉，是嬰兒腹瀉主要病原菌。發(fā)熱、惡寒、嘔吐、腹痛、水樣腹瀉。鼠疫耶爾森：有莢無芽無鞭，兩極濃染，28～30℃，～，液體中培養(yǎng)好，底部可有鐘乳石樣，常用1%溶血的胰酶消化肉瓊脂（赫氏瓊脂）加入亞硫酸鈉或脫纖維血有刺激生長，用腐敗材料分離，培養(yǎng)基中加入甲紫、膽酸鈉抑制雜菌，龍膽紫亞硫酸鈉為其選擇性培養(yǎng)基，3%氯化鈉上生長呈多形性。食品及水樣常用堿性蛋白胨水增菌培養(yǎng)后再接種，鈉離子可剌激生長，但在＞8%NaACI中不生長。傳染源主要是人，糞口途徑。所致疾病為氣性壞疽，有捻發(fā)感，青霉素為首選，萬古為次選?？色@持久免疫力咳碟法：包姜培養(yǎng)基（含青霉素G）置10cm使飛沫直射于培養(yǎng)基上，37℃23天鼻咽拭子法：—%蛋白胨生理鹽水中2小時內(nèi)檢 99. TBETris硼酸緩沖液，長時間電泳選用。生物安全柜三級：2．普通光學(xué)顯微鏡：,不能觀察細(xì)菌的亞結(jié)構(gòu)3．暗視野顯微鏡：,、 mm4．熒光顯微鏡：5．—,。（分析大分子物質(zhì)）瓊脂糖凝膠電泳核酸分離與純化1%瓊脂糖作支持介質(zhì)，有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。細(xì)菌的培養(yǎng)技術(shù)一、培養(yǎng)基：營養(yǎng)物質(zhì)：蛋白胨、肉浸汁和牛肉膏、糖醇類、血液、動物血清與雞蛋、無機鹽類、生長因子。細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗糖醇類代謝試驗：糖發(fā)酵試驗、甲基紅試驗、VP試驗、葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗（O/F試驗）、七葉苷水解試驗、B半乳糖苷滲透酶試驗。DNA多聚酶只能結(jié)合在一長段DNA單鏈的一小段局部雙鏈結(jié)構(gòu)上，才能順利開始DNA合成。是機體黏膜防御感染的重要因素。2．人工綜合組織培養(yǎng)營養(yǎng)液：氨基酸、糖類、無機鹽、維生素、輔助生長因子。11. 蓄積系數(shù)經(jīng)值：＜1高度、1—3明顯、3—5中度、＞5輕度。25. 流式細(xì)胞術(shù): (1)一種細(xì)胞分選或分析技術(shù)?？沙霈F(xiàn)Koch現(xiàn)象（初次不發(fā)生速發(fā)型過敏反應(yīng)），是Koch在1891年觀察到。結(jié)核樣型患者中很少找到細(xì)菌。要新鮮血液（含Ⅹ和Ⅴ因子）培養(yǎng)基，不溶血，可生長在接種于血平板上的金黃色葡萄球菌的周圍，流感嗜血桿菌菌落較大，越遠(yuǎn)越小，即衛(wèi)星現(xiàn)象。具有O抗原和K抗原。始體（網(wǎng)狀體）（RB，大而疏松的結(jié)構(gòu)，衣原體發(fā)育中的繁殖體，不具感染性，具增殖力色，絲狀分裂增，姬染蘭殖），產(chǎn)生類似于G桿內(nèi)毒素。 補體結(jié)合試驗是立克次體最常用的方法。糞—口傳播。世界81第一例，我國85。標(biāo)本：糞便（分離主要標(biāo)本），糞便排出病毒主要在麻痹前期、麻痹后2周內(nèi)，排毒呈間歇性，故采樣在14天內(nèi)采集2份糞便，時間間隔24—48小時，量5—8克。F蛋白是一種具有膜融合特性的糖蛋白。急性期血標(biāo)本接種于Vero（非洲綠猴腎）細(xì)胞培養(yǎng)，或豚鼠腹腔內(nèi)。屬布尼亞病毒科、內(nèi)羅畢病毒屬。E蛋白主要有A、B、C三個不重疊抗原區(qū)，為主要的毒粒，能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體，直接從標(biāo)本中分離病毒是確診登革熱的可靠方法。單股負(fù)鏈RNA，長絲狀。IgM在出疹7—10天達(dá)高峰，28天內(nèi)都能檢測到。小RNA病毒科，單股正鏈無包膜，圓球形顆粒，耐寒70度保存活力8年，不耐熱。有鎂、錳離子存在可保持完整性?？焖贆z測：雙抗體夾心ELISA法檢測外膜蛋白、免疫印跡技術(shù)檢測抗原114. 肝炎病毒：甲型（HAV）、乙型（HBV）、丙型（HCV）、丁型（HDV）、戊型（HEV）。另一種為種特異性抗原，與外膜蛋白構(gòu)成，不耐熱。沙眼，鸚鵡熱嗜衣原體，肺炎嗜衣原體。血液、痰、尿68℃避光、隔熱運送。：條件致病菌，需氧，G－桿菌，有鞭毛，20～42℃長，最適產(chǎn)毒溫度是26℃，是35℃，4℃不長，液面可形成菌膜，色素有：綠膿素（溶于水和氯仿），氧化酶陽性，液化明膠、還原硝酸鹽，在42℃條件下能生長。麻風(fēng)菌的有效保護(hù)性免疫取決于細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，沒有體液免疫缺陷。毒力鑒定：質(zhì)粒電泳圖譜分析 PCR擴增其選擇培養(yǎng)基是戊烷脒血平板，鑒定試驗有：青霉素敏感試驗、串珠試驗，噬菌體裂解試驗（AP631株），重碳酸鹽毒力試驗（有毒力形成芽胞呈M型）。22. 麻疹病毒主要吸附在白細(xì)胞上，加抗凝劑可提高分離率。一旦癥狀出現(xiàn)，多為亞急性、進(jìn)行性，并造成死亡。病毒在胞漿內(nèi)繁殖，芽生釋放。由IgE介導(dǎo)，肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞以釋放生物活性介質(zhì)的方式參與反應(yīng)；發(fā)生快，消退亦快；Ⅱ型變態(tài)反應(yīng)：細(xì)胞毒型/細(xì)胞溶解型，抗體（多屬IgG、少數(shù)為IgM、IgA）首先同細(xì)胞本身抗原成分或吸附于膜表面成分相結(jié)合，然后通過四種不同的途徑殺傷靶細(xì)胞 Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)：即免疫復(fù)合物型，又稱血管炎型超敏反應(yīng)。大腸菌的RNA聚合酶有5個亞基，其o亞基有啟動子作用。2003年8月1日實行。絕大多數(shù)Ⅱ類限制酶識別長度為4或6個核苷酸。分離DNA片段最佳范圍5500bp十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）蛋白分離聚丙烯酰胺濃度越大，線性分離范圍越小。第四階段：慢性毒性試驗和致癌試驗GB 19489—2004《實驗室生物安全通用要求》分級：危害等級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。細(xì)菌不進(jìn)入血流。紫外線下出現(xiàn)熒光也是厭氧菌參考之一，卡那霉素用于梭桿菌與類桿菌的區(qū)分，甲硝唑用于厭氧菌和非厭氧菌的區(qū)別。86. 副溶血弧菌：嗜鹽性弧菌（與霍亂顯著區(qū)別），是我國沿海地區(qū)最常見的食物中毒病原菌，兩極濃染，NaCl最適35g/L，無鹽不長，～，最適pH ，不耐熱，不耐酸，在TCBS上不發(fā)酵蔗糖菌落綠色，＞80g/L鹽內(nèi)不長，神奈川現(xiàn)象（β溶血），KP+是致病株能使人或兔紅細(xì)胞發(fā)生溶血對馬紅細(xì)胞不溶血為陽性。膽汁溶菌試驗用于肺炎鏈球菌與甲型鏈球菌鑒別ONPG試驗—遲緩分解乳糖的細(xì)菌試驗為陽性。普羅威登斯屬有：產(chǎn)堿，斯氏，雷極，摩根菌只有摩氏摩根菌。傷寒沙門菌、甲型副傷寒沙門菌、肖氏沙門菌、希氏沙門菌。專用紙片圈內(nèi)（18mm）可定性和半定量。細(xì)菌培養(yǎng)是目前世衛(wèi)推薦的唯一方法，用培養(yǎng)法查女病人宮頸口表面分泌物。氨基糖苷類合用，β溶鏈致病性最強，α溶鏈為條件致病菌。對酸堿敏感，～，最適溫28～30℃，12h分裂一次。血清凝集試驗（SAT）是常用診斷實驗，虎紅平板凝集試驗（RBPT），補體結(jié)合試驗（CFT）、免疫熒光試驗（IFT）等。60. 菌種保存：“凍干”保存—穩(wěn)定劑（脫脂乳、蔗糖）。適用于對活體細(xì)胞生活狀態(tài)下的生長、運動、增殖情況、及細(xì)微結(jié)構(gòu)的觀察。40. 原生質(zhì)融合：兩種經(jīng)過處理失去細(xì)胞壁的原生體混合和可發(fā)生融合后的雙倍體可發(fā)生染色體間的重組。：干擾素（IFN）、NK細(xì)胞 。27. 超凈工作臺應(yīng)采用層流技術(shù)凈化空氣、選擇垂直氣流通風(fēng)方式。G菌細(xì)胞壁的主要成份：肽聚糖、脂蛋白、外膜、脂多糖（LPS）（類脂A、核心多糖、特異性多糖），菌體脂多糖（LPS）能引起發(fā)熱故稱熱原質(zhì)，又稱為細(xì)菌的內(nèi)毒素。細(xì)菌生長繁殖分為四期：遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期、衰亡期19.（腸道桿菌）細(xì)菌的四種生化反應(yīng)：吲哚（I）、甲基紅（M）、VP（V）、枸櫞酸鹽利用（C），合稱為IMViC。體液免疫：（B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，CD4+Th輔助，Th2細(xì)胞能分泌細(xì)胞因子ILILILIL10）；效應(yīng)是抗體（Ab）；病毒中和抗體（不能直接滅活病毒，IgG、IgM、IgA）血凝抑制抗體（HLAb）補體結(jié)合抗體。大多數(shù)DNA噬菌體的DNA為線狀雙鏈（有尾噬菌體的核酸）；RNA噬菌體的RNA為線狀單鏈（無尾噬菌體的核酸為環(huán)狀單鏈DNA或線狀單鏈RNA）。9. 奧普托欣試驗：肺炎鏈球菌敏感。3）增色效應(yīng)。2. 結(jié)核菌可利用甘油為碳源，梭狀芽胞菌可以氨基酸為碳源，流感嗜血桿菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生長。藥物敏感實驗判定標(biāo)準(zhǔn) ：抑菌圈直徑（毫米）：20以上極敏、15~20高敏、10~14中敏、10以下低敏。核酸雜交（基因探針雜交技術(shù)）是指單鏈RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA，根據(jù)堿基配對原則，借氫鍵相連而形成雜交分子的過程。一般菌落有：油煎蛋樣（L），顆粒型（G），絲狀菌落（F），鑒定要點：染色易變多形性，生長在增菌液中微渾，顆粒樣沉淀或沿試管壁生長，返祖現(xiàn)象。噬菌體可以根據(jù)不同細(xì)菌的表面受體來裂解目標(biāo)菌是判定某些種類病原體的重要依據(jù)。補體C：存在血清中，不耐熱，可輔助特異性抗體介導(dǎo)的溶菌作用，是抗體發(fā)揮溶細(xì)胞作用的必要補充條件。細(xì)菌代謝所需能量主要以生物氧化作用而來。23. ，另外以石棉板為濾板的金屬濾器稱Seitz濾器（蔡氏濾器）按濾孔大小分K：最大，澄清用，EKS最小，可阻止大病毒通過EK：居中，除去一般細(xì)菌?？顾崛旧ǎ?%石炭酸復(fù)紅、5%鹽酸酒精脫色、美蘭復(fù)染。B細(xì)胞第一個合成產(chǎn)物是u鏈。：菌體表面結(jié)構(gòu)，菌毛，侵襲性酶（凝固酶，透明質(zhì)酸酶，鏈激酶，膠原酶等）。50. 直接鏡檢2h報告，最后鑒定和藥敏一般不過3天，除血外，必須在24h內(nèi)預(yù)報53. α溶血是草綠色，β溶血是透明環(huán)，γ溶血紅細(xì)胞不溶解，雙環(huán)。冷凍干燥保存法是最有效的方法，利用各種斜面和半固體加石蠟油是最常用和最簡便的方法，一般不含糖，不用液體。診斷標(biāo)準(zhǔn)：血清試管凝集試驗（SAT）1：100++以上，補體結(jié)合試驗（CFT）：1；10++67. 萊姆病原：伯道疏螺旋體引起萊姆病，細(xì)胞結(jié)構(gòu)：原生質(zhì)柱、表層、外膜、鞭毛。69. 致病性鏈球菌：沉淀生長（肺鏈為混濁），在含腹水的培養(yǎng)物上生長良好，溶血株呈絮狀或顆粒狀生長，不溶血株呈均勻混濁生長。臨床上分離最高的是糞腸球菌，可分慶霉素高耐藥和低耐藥，一般用β內(nèi)酰胺類和氨基糖苷類聯(lián)合。標(biāo)本：Ⅰ期梅毒取下疳滲出液（20分鐘內(nèi)查）；Ⅱ梅毒取梅毒疹滲出液或局部淋巴結(jié)抽出液；先天性梅毒取臍血；神經(jīng)梅毒取腦脊液。腸侵襲性型（EIEC）：作用大腸，志賀樣腹瀉，很像菌痢，發(fā)熱腹痛膿血便及里急后重。（3）、敗血癥：無癥狀帶菌者：標(biāo)本：第12周采血，接種于室溫＞20℃平衡血培養(yǎng)瓶，不能超過2小時送樣，不能即時送樣放在室溫，切勿放冰箱；第34周取糞便；第3周起還可取尿液；整病程均可取骨髓液。小腸耶爾森：無動無芽無莢G－，25℃有動力，有周鞭毛，最適溫20～28℃，VP試驗25℃陽性，37℃陰性，KIA只利用葡萄糖，MIU22℃動力陽性37℃陰性。常用的保存或運送及增菌用堿性蛋白胨水，文臘二氏，卡布。標(biāo)本：胃黏膜活檢組織；病原鑒定：生物特性是具有大量高活性的尿素酶，迅速分解尿素，氧化酶＋、觸酶＋，具有堿性磷酸酶、r谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性，硝酸鹽還原＋，可生長于5%甘氨酸、%氯化三苯四氮唑培養(yǎng)基中，三糖鐵中不產(chǎn)生硫化氫，微需氧5～8%，37℃生長，25℃和42℃均不生長的G－菌，初次分離要3～4天。95. 肉毒梭菌：G+，芽胞膠囊于次極端呈湯匙狀或網(wǎng)球拍狀，嚴(yán)格厭氧，8型，以A，B多見，毒素不耐熱，1min煮沸即死。MIC最小抑菌濃度101．決定細(xì)菌的形態(tài)因素：培養(yǎng)基的成份、PH、培養(yǎng)時間、溫度。微量吸管5—1000ul。用水平電泳槽，充分分離DNA片段最佳范圍200bp50kb等電聚焦電泳（IFE）蛋白質(zhì)分離以兩性電解質(zhì)制造凝膠有不同PH，使帶不同電荷的多肽在電泳條件下于等電點停留。二、水分。糖發(fā)酵試驗原理：多糖→單糖→丙酮酸→酸性產(chǎn)物（或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）→PH下降→指示劑呈酸性變色。DNA在合成中單核苷酸分子必須順序以共價鏈連接在已形成核酸鏈3’末端的羥基上。免疫原性含義：剌激機體免疫系統(tǒng)，有誘生抗體和致敏淋巴細(xì)胞的能力。MEM、RPMI 16403．細(xì)胞培養(yǎng)液分生長液、維持液，兩者區(qū)別在血清含量不同。12. 協(xié)同作用一種物質(zhì)的存在能促進(jìn)其他物質(zhì)效應(yīng)的作用。即以熒光素標(biāo)記抗體結(jié)合相應(yīng)細(xì)胞，用激光束激發(fā)單行流動的細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞所攜帶熒光(強度或類別)進(jìn)行分選或分析。結(jié)核菌素試驗紅腫硬結(jié)：50IU/ml制劑，≤5㎜陰性，≥5㎜陽性；≥15㎜強陽性。：菌體輕度彎曲似逗點狀，菌體一端或兩端有鞭毛，運動活潑，在暗視野鏡下觀察似飛蠅。在含1%蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露并加有Ⅹ和Ⅴ因子的酚紅肉湯培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵試驗，是鑒別所有嗜血桿菌菌株的方法。是人呼吸道及腸道定殖菌，條件致病菌。培養(yǎng)物中抑制劑二乙氨基葡聚糖。（一）普氏立克次體 () ：是流行性斑疹傷寒的病原體。乙型（HBV）：反轉(zhuǎn)錄病毒，嗜肝DNA病毒科，病毒顆粒3種：22nm小球形外膜顆粒、40—100nm 22nm管形顆粒、完整42nmDane顆粒。HIV屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬，分HIVHIV2型，95%由HIV1造成，球形，由兩條單股正鏈RNA、逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶、蛋白酶、核心蛋白質(zhì)組成?；颊叱?4天就診，采5位0—4歲密切接觸糞便。F蛋白、H蛋白都是中和抗原118. 流行性出血熱：又稱腎綜合征出血熱HFRS。用熒光免疫法病毒抗原積聚在細(xì)胞漿內(nèi)。負(fù)鏈分節(jié)段RNA，3個基因節(jié)段：首選乳鼠腦內(nèi)、腹腔接種，取乳鼠腦組織制成抗體進(jìn)行血清學(xué)交叉試驗。12登革熱DF：乙類，傳播媒介伊蚊，屬黃病毒科及屬，正鏈RNA，含有一條單一開放讀碼框架，3個結(jié)構(gòu)蛋白：衣殼蛋白C、膜蛋白M、包膜蛋白E。119. 埃博拉出血熱：傳染性十分強烈的出血性發(fā)熱性疾病。細(xì)胞分離：Vero細(xì)胞（非洲綠猴腎細(xì)胞）、原代外周血單核細(xì)胞（PBMC）、B95a細(xì)胞（EB病毒轉(zhuǎn)化的絨猴淋巴細(xì)胞），WHO推薦使用首選Vero/SLAM分離麻疹病毒；用ELISA方法檢測特異AgM抗體進(jìn)行麻疹診斷。確證試驗法：免疫印跡試驗（WB國常用）、條帶免疫試驗、放射免疫沉淀試驗（RIPA）、免疫熒光試驗（IFA）116. 脊髓灰質(zhì)炎病毒：小兒麻痹癥，糞—口傳播。戊型（HEV）：無包膜線狀單股正鏈RNA病毒球形，對高熱敏感。16種支原體中，肺炎、解脲、人型、生殖器、發(fā)酵支原體對人致病