食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(參考版)
2024-09-03 21:00本頁(yè)面
【正文】 五、思考題一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平板，取兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。 待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，置25～28℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)5天，從第3天開(kāi)始觀察后取出，共觀察培養(yǎng)5天。 ②檢樣從開(kāi)始稀釋到傾注最后一個(gè)平皿，所用時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。 ①培養(yǎng)基不能觸及平皿口邊沿，加入培養(yǎng)基后可正反兩個(gè)方向旋轉(zhuǎn)，但不可用力過(guò)度，以免濺起觸及上蓋。（三）倒平板②吸管插入檢樣液內(nèi)取樣稀釋時(shí)，,調(diào)整時(shí)應(yīng)使管尖與容器內(nèi)緊貼。 ①加入檢樣液時(shí)，吸管尖端不要觸及瓶口或試管口外部，也不得觸及管內(nèi)稀釋液，并將吸管內(nèi)的液體沿管壁小心流加入，以免增加檢液。 注意：稱取檢樣25g，放入裝有適量玻璃珠的滅菌廣口瓶子中。 果脯：采取不同部位稱取25g檢樣，加入滅菌水225mL，制成混懸液。如為帶餡糕點(diǎn)，取外皮及內(nèi)餡25g,奶花糕點(diǎn)，采取奶花及糕點(diǎn)部分各一半共25g。 外包裝消毒→無(wú)菌稱取樣品25g→加無(wú)菌水→加蓋振蕩、吹吸均勻（二）樣品的稀釋（樣品的處理）三、實(shí)驗(yàn)儀器與材料恒溫箱、水浴鍋、天平、可調(diào)式電爐、試管、吸管、三角平等高鹽察氏培養(yǎng)基 生理鹽水、樣品（醬油、乳粉）四、方法步驟（一）基本操作過(guò)程：目前已有若干個(gè)國(guó)家制訂了某些食品的霉菌和酵母限量標(biāo)準(zhǔn)。目前已知的產(chǎn)毒霉菌如青霉、曲霉和鐮刀菌在自然界中分布較廣，對(duì)食品的侵染機(jī)會(huì)較多。有些霉菌的有毒代謝產(chǎn)物能引起急性和慢性中毒，特別是有些霉菌毒素具有強(qiáng)烈的致癌性。 熟練無(wú)菌操作技術(shù)。 一、目的要求確認(rèn)葡萄球菌為金黃色葡萄球菌的依據(jù)至少應(yīng)包括哪幾個(gè)試驗(yàn)？ 金黃色葡萄球菌的形態(tài)與染色、培養(yǎng)特征如何？實(shí)驗(yàn)六 霉菌和酵母菌的檢驗(yàn)” （2）結(jié)果報(bào)告：根據(jù)培養(yǎng)特性、鏡檢、生化試驗(yàn)、動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果，可報(bào)告為：“是否是致病性葡萄球菌” .五、思考題金黃色葡萄球菌在BP平板上的菌落特征如何，說(shuō)明其原理。1℃溫箱或水浴內(nèi)，每半小時(shí)觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽(yáng)性結(jié)果。革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗(yàn)挑取金黃色葡萄球菌可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色。1）℃培養(yǎng)24h，結(jié)果：血平板：菌落成金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有透明溶血圈（β型） Baird－Parker平板： 圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、直徑為23mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。1℃溫箱培養(yǎng)24h。三、實(shí)驗(yàn)試劑及器材：培養(yǎng)基與試劑：胰酪胨大豆肉湯；75個(gè)/L氯化鈉肉湯；血瓊脂平板；bairdparker平板；肉浸液肉湯；滅菌鹽水；兔血漿器具及其他用品顯微鏡；恒溫箱；離心機(jī)；滅菌吸管；滅菌試管；均質(zhì)器；載玻片；L型涂棒；酒精燈；接種環(huán)等四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容檢樣處理與增菌培養(yǎng)稱取25g固體樣品；吸取25mL液體樣品，加入225mL滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成混懸液。；（＋）遲緩發(fā)酵；d有不同生化型結(jié)果報(bào)告：綜合生化和血清學(xué)的試驗(yàn)結(jié)果判定菌型并作出報(bào)告 五、思考題 志賀氏菌在三糖鐵培養(yǎng)基上的反應(yīng)結(jié)果如何？解釋這些現(xiàn)象？志賀氏菌檢驗(yàn)有哪5個(gè)基本步驟？實(shí)驗(yàn)五 午餐牛肉罐頭中金黃葡萄球菌的檢驗(yàn)一、目的要求：了解金黃葡萄球菌的生物學(xué)特性掌握金黃葡萄球菌檢驗(yàn)原理和檢驗(yàn)方法二、實(shí)驗(yàn)原理：金黃葡萄球菌耐鹽性強(qiáng)，在100150g/L氯化鈉培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)，%，可以利用這個(gè)特性對(duì)金黃葡萄球菌增菌，抑制雜菌。但福氏6型的生化特性與A群或C群相似。進(jìn)一步的生化試驗(yàn)已判定為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物，應(yīng)進(jìn)一步做5%乳糖發(fā)酵、甘露醇、棉子糖、甘油的發(fā)酵、靛基質(zhì)試驗(yàn)?！ 〉?步、4種志賀氏菌多價(jià)血清不凝集的菌株，可用鮑氏多價(jià)3分別檢查，并進(jìn)一步用1～15各型因子血清檢查。福氏志賀氏菌各型和亞型的型和群抗原見(jiàn)表1。（1）先用4種志賀氏菌多價(jià)血清檢查，如果由于K抗原的存在而不出現(xiàn)凝集，應(yīng)將菌液煮沸后再檢查；（2）如果呈現(xiàn)凝集，則用AAB群多價(jià)和D群血清分別試驗(yàn)。血清學(xué)分型和進(jìn)一步的生化試驗(yàn)凡是乳糖、蔗糖不發(fā)酵，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體)，無(wú)動(dòng)力的菌株，可做血清學(xué)分型和進(jìn)一步的生化試驗(yàn)。經(jīng)36℃培養(yǎng)18～24h，分別觀察結(jié)果。結(jié)果：志賀氏菌在這些培養(yǎng)基上呈現(xiàn)無(wú)色透明不發(fā)酵乳糖的菌落接種三糖鐵瓊脂和葡萄糖半固體培養(yǎng)基從SS、EMB瓊脂平板、挑取平板上的可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂和葡萄糖半固體各1管。接種選擇性平板及培養(yǎng)取增菌液1環(huán)，劃線接種于HE瓊脂平板或SS瓊脂平板1個(gè)；另取1環(huán)劃線接種于麥康凱瓊脂平板和EMB（伊紅美藍(lán)）瓊脂平板各1個(gè)。增菌培養(yǎng)放于36℃培養(yǎng)6～8h。志賀氏菌的進(jìn)一步分群分型有賴于血清學(xué)試驗(yàn)。不形成芽胞，無(wú)莢膜，無(wú)鞭毛，不運(yùn)動(dòng)，有菌毛。所以在食物和飲用水的衛(wèi)生檢驗(yàn)時(shí)，常以是否含有志賀氏作為指標(biāo)。人類對(duì)痢疾桿菌有很高的易感性。
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