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食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-在線(xiàn)瀏覽

2024-10-03 21:00本頁(yè)面
  

【正文】 不用過(guò)濾。 分裝 將培養(yǎng)基趁熱加至漏斗上進(jìn)行分裝。注意管口不要沾上培養(yǎng)基。分裝時(shí),一手捏松彈簧夾,使培養(yǎng)基流出,另一只手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養(yǎng)基。試管應(yīng)先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮紙,貼上標(biāo)簽,注明培養(yǎng)基名稱(chēng)、日期、組別。 分裝完畢后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。棉塞應(yīng)采用普通新鮮、干燥的棉花制作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無(wú)法使用。棉塞不要過(guò)緊過(guò)松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆扎,準(zhǔn)備滅菌。 殺菌操作流程: 培養(yǎng)基、無(wú)菌水等,放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),濕熱滅菌。 含糖培養(yǎng)基:115℃滅菌10min或113℃滅菌15min 培養(yǎng)基配好后,為什么必須立即滅菌?如何檢查滅菌后的培養(yǎng)菌是無(wú)菌的? 干熱滅菌應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)? 了解細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)的意義。 掌握樣品稀釋處理的方法和菌落總數(shù)計(jì)數(shù)的方法菌落總數(shù)主要作為判別食品被污染程度的標(biāo)志,也可以應(yīng)用這一方法觀(guān)察細(xì)菌在食品中繁殖的動(dòng)態(tài),以便對(duì)被檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)時(shí)提供依據(jù)。三、實(shí)驗(yàn)儀器與材料恒溫箱、水浴鍋、天平、可調(diào)式電爐、試管、吸管、三角平等營(yíng)養(yǎng)瓊脂、生理鹽水、樣品(醬油、乳粉)四、實(shí)驗(yàn)程序與步驟(一)、基本操作過(guò)程:(二)、樣品的稀釋?zhuān)悠返奶幚恚悠罚横u油以無(wú)菌操作吸取檢樣25ml,放入含有225ml滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適量玻璃珠),經(jīng)充分振搖做成1:10的稀釋液。 用1ml滅菌吸管,吸取1∶10稀釋液1ml,注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內(nèi),振搖試管混合均勻,制成1∶100稀釋液。 根據(jù)對(duì)檢樣污染情況的估計(jì),選擇2~3個(gè)適宜稀釋度,分別在作10倍遞增稀釋的同時(shí),即以吸取該稀釋度的稀釋液1ml于滅菌平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度做2個(gè)平皿。 ①吸管尖端不要觸及瓶口或試管口外部,也不得觸及管內(nèi)稀釋液。 (三)、倒平板 注意:(四)、培養(yǎng)1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后取出,立即計(jì)算平皿內(nèi)菌落數(shù)目,乘以稀釋倍數(shù),即得每克(每毫升)樣品所含菌落總數(shù)。 (1)如果把不能立即計(jì)數(shù),要將平板放入0~4℃冰箱中,但不能超過(guò)24 h。 37℃培養(yǎng) 48h30℃培養(yǎng) 48h: 食品中檢出的菌落總數(shù)是否代表該食品上的所有細(xì)菌數(shù)?為什么?1)℃的溫度?培養(yǎng)時(shí)為什么要把培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)?實(shí)驗(yàn)三 鮮肉中大腸菌群的測(cè)定 了解大腸菌群在食品衛(wèi)生檢驗(yàn)中的意義。 學(xué)習(xí)并掌握大腸菌群檢驗(yàn)的原理和方法。一般認(rèn)為該菌群細(xì)菌可包括:大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。它反映了食品是否被糞便污染,同時(shí)間接地指出食品是否有腸道致病菌污染的可能性。mostnumber簡(jiǎn)稱(chēng)MPN)表示。 (1) 先將鮮肉進(jìn)行表面消毒處理,即沸水內(nèi)燙35秒或燒灼消毒。(2)乳糖初發(fā)酵試驗(yàn)(無(wú)菌操作)根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì),選擇三個(gè)稀釋度,每個(gè)稀釋度接種三管。 將接種后的乳糖膽鹽發(fā)酵管置36177。2h,如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,則可報(bào)告為大腸菌群陰性;如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者(培養(yǎng)液由紫藍(lán)色變成黃色并有氣泡),則按下列程序進(jìn)行試驗(yàn)。 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在EMB瓊脂平板上(一管對(duì)一個(gè)平板),置36177。由于藥物影響,亦呈現(xiàn)紫色、粉紫、中心灰紫、無(wú)黑心、濕潤(rùn)等,常為大腸桿菌,均應(yīng)注意挑選。1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24177。進(jìn)行鏡檢大腸菌群菌:革蘭氏染色陰性無(wú)芽胞短桿菌。 向培養(yǎng)后的蛋白胨水中沿管壁加入靛基質(zhì)試劑(歐—波試劑),靜置片刻,觀(guān)察液面。則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。 觀(guān)察:乳糖發(fā)酵管內(nèi)是否有氣體產(chǎn)生查表報(bào)告結(jié)果  根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù),查MPN檢索表,報(bào)告每100mL(g)大腸菌群的MPN值。五、思考題 為什么大腸菌群的檢驗(yàn)要經(jīng)過(guò)復(fù)發(fā)酵才能證實(shí)?臨床上能引起痢疾癥狀的病原生物很多,有志賀氏菌、沙門(mén)氏菌、變形桿菌、大腸桿菌等,還有阿米巴原蟲(chóng)、鞭毛蟲(chóng)、以及病毒等均可引起人類(lèi)痢疾,其中以志賀氏菌引起的細(xì)菌性痢疾最為常見(jiàn)。在幼兒可引起急性中毒性菌痢,死亡率甚高。志賀氏菌屬細(xì)菌的形態(tài)與一般腸道桿菌無(wú)明顯區(qū)別,為革蘭氏陰性桿菌,長(zhǎng)約23μ m , m 。志賀氏菌屬的主要鑒別特征為:無(wú)鞭毛,不運(yùn)動(dòng),對(duì)各種糖的利用能力較差,并且在含糖的培養(yǎng)基內(nèi)一般不產(chǎn)生氣體。三、實(shí)驗(yàn)儀器與材料恒溫箱、水浴鍋、天平、可調(diào)式電爐、試管、吸管、三角瓶GN 增菌液、EMB培養(yǎng)基 、SS瓊脂 、三糖鐵斜面、葡萄糖半固體培養(yǎng)蛋白胨水、5%乳糖發(fā)酵管、甘露醇發(fā)酵管、棉子糖發(fā)酵管、甘油發(fā)酵管、兔血漿、多價(jià)血清和26種因子血清四、操作步驟樣品處理無(wú)菌操作稱(chēng)取檢樣25g,加入裝有225mLGN增菌液的500mL廣口瓶?jī)?nèi),固體食品用均質(zhì)器以800010000r/min打碎1min,或用乳缽加滅菌砂磨碎,粉狀食品用金屬匙或玻璃棒研磨使其乳化。培養(yǎng)時(shí)間視細(xì)菌生長(zhǎng)情況而定,當(dāng)培養(yǎng)液出現(xiàn)輕
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