【正文】 用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）檢測登革熱RNA。病毒基因組長19kb，由7個連續(xù)排列的基因組成，分別編碼；核蛋白、基質(zhì)蛋白、多聚酶、3種小蛋白。IgG用于人群抗體陽性率調(diào)查、抗體水平測定、疫苗初免結(jié)果觀察。脊灰病毒基因組呈單鏈線性，病毒的主要抗原是VP1蛋白。簡稱艾滋?。ˋIDS），主要通過性接觸、血液、母嬰傳播。是在各種條件下抵抗外界變化能力最強(qiáng)的病毒之一。斑疹傷寒、恙蟲病立克次體的脂多糖與普通變形桿菌某些菌株（如OX 1X2 、OX k 等）的菌體抗原有共同的抗原成分。68日齡雞胚卵黃囊中繁殖，有包涵體。證實(shí)試驗(yàn)：免疫熒光方法。O抗原有兩種：內(nèi)毒素脂多糖原內(nèi)毒素蛋白OEP（類屬抗原），選擇培養(yǎng)基：NAC（乙酰氨基半乳糖）。除臨床檢查外，皮膚切刮法涂片查菌及組織病理學(xué)檢查可有助于麻風(fēng)診斷的確定。102. 產(chǎn)單核李斯特菌：有鞭毛，無牙胞對人致病，在羊血平板上β溶血環(huán)，25℃有動力，37℃動力緩慢（此特征可作為初步判定），能在4℃進(jìn)行冷增菌，在半固體中可現(xiàn)倒傘狀，致病物質(zhì)為李斯特菌溶素O，通過胎盤或產(chǎn)道感染新生兒是重要特點(diǎn)，常伴EB病毒引起傳單。24. 大便標(biāo)本的除菌處理：加抗生素終濃度10 000U/ml，4℃過夜或1000轉(zhuǎn)/ min，離心20分鐘。9．引起腦膜炎的腸道病毒：腸道病毒70型、腸道病毒71型、柯薩奇A組16型、脊髓灰質(zhì)炎病毒。發(fā)病一周內(nèi)取血液，第二周以后取尿，有腦膜炎型癥狀者取腦脊液進(jìn)行檢查。 Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)：即遲發(fā)型（細(xì)胞介導(dǎo)型），Ⅳ型是由特異性致敏效應(yīng)T細(xì)胞釋放的LF介導(dǎo)的。2．變態(tài)反應(yīng)（超敏反應(yīng)）是指機(jī)體對某些抗原初次應(yīng)答后，再次接受相同抗原刺激時，發(fā)生的一種以機(jī)體生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷為主的特異性免疫應(yīng)答。2004年10月1日執(zhí)行。普通水平電泳制備染色體DNA酶切圖譜時，DNA電泳遷移率的對數(shù)與凝膠濃度成線性關(guān)系，分離＜ %%，分離＞10kb %%，在低電壓時，線狀DNA片段的遷移率與所加電壓成正比，電壓增加，瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小。為正交的交變脈沖電場；條帶靠近負(fù)極為大片段DNA，靠近正極為小片段DNA。生物安全柜一級：可保護(hù)工作人員和環(huán)境。依據(jù)菌落性狀及凝集試驗(yàn)確診。93. 破傷風(fēng)桿菌：鼓槌狀，早期培養(yǎng)G＋，48h后特別是芽胞形成后G－，的O和H抗原，主要癥狀為骨骼肌痙攣，不發(fā)酵糖類，能液化明膠產(chǎn)H2S。88. 彎曲菌屬是一類微需氧菌，不分解糖，氧化酶+，菌體彎曲逞豆點(diǎn)狀，S狀或螺旋狀有動力G－菌，5種5亞種，對人致病的主要是空腸彎曲菌（人類腹瀉最常見之一，43℃生長，25℃不生長）89. 幽門螺桿菌（HP）：常用布氏培養(yǎng)基或腦心浸液血瓊脂加入5～10%羊血和馬血，在（85%N、10%CO5%O2）條件下，37℃3—7天，長成針尖狀的半透明菌落，加入萬古霉素、TMP、兩性霉素B等組成抑菌劑防止雜菌生長。85. 霍亂菌：呈弧狀或逗點(diǎn)狀，米泔樣糞便作懸滴觀察，細(xì)菌呈穿梭樣或流星狀運(yùn)動；糞便涂片鏡檢見排列如“魚群”狀G－菌，耐堿不耐酸。能迅速分解尿素以區(qū)別沙門菌，外斐試驗(yàn)輔助診斷立克次體79. 耶爾森氏菌（鼠疫）：有7種，鼠疫，假結(jié)核，小腸與致病有關(guān)。（2）、胃腸炎（食物中毒）：由攝入大量＞108被鼠傷寒沙門菌(常引起食物中毒)、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌污染的食物引起。它是間接熒光抗體檢測方法，75. 腸產(chǎn)毒型（ETEC）：作用小腸，霍亂樣腸毒腹瀉，是5歲以下嬰幼兒和旅游者腹瀉的重要病原菌；腸毒素有耐熱和不耐熱，LTⅠ是引起人類主要的致病物質(zhì)，對熱不穩(wěn)定，65℃30分鐘被破壞，A亞單位是毒素的活動部位。標(biāo)本接種在巧克力血瓊脂平板或TM培養(yǎng)基。（三）豬鏈球菌：人感染致病：腦膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥、中毒性休克。2周取尿液則用1%牛血清白蛋白保存，用磷酸鹽緩沖液稀釋取50微升接種到5毫升培養(yǎng)基中每個稀釋度2管，每管中先加入30微克新霉素濾紙片或每毫升培養(yǎng)基加5氟尿嘧啶200400微克。用肝浸液瓊脂培養(yǎng)基、蛋白胨、土豆浸液瓊脂等。凍干菌種在使用時須“復(fù)蘇”且須傳代才能恢復(fù)原生長特性。48. 不能立刻接種的血應(yīng)用SPS（氯化鈉溶液）抗凝。42. 粘附素是細(xì)菌表面的蛋白質(zhì)有菌毛和非菌毛。 ：T細(xì)胞、B細(xì)胞、K細(xì)胞。；而堿性染料電離時染料離子帶正電。細(xì)胞質(zhì)中的異染顆粒主要成份：RNA、多偏磷酸鹽。還需做糖發(fā)酵試驗(yàn)，KIA產(chǎn)酸產(chǎn)氣，MIU＋――，有菌體（O）莢膜（K）鞭毛（H）三抗原。IgM分子量大，是最早產(chǎn)生的抗體，中作早期診斷。噬菌體分毒性噬菌體、溫和噬菌體（溶原性噬菌體）；毒性噬菌體以復(fù)制方式增殖，過程吸附、穿入、生物合成、成熟與釋放，少脫殼。11. L型細(xì)菌：細(xì)胞壁缺陷（形態(tài)多樣，染色不定，可過濾，滲透壓敏感，生化減弱等）培養(yǎng)應(yīng)高滲透壓（35%氯化鈉、20%蔗糖）。核酸實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常以迅速冷卻至4℃以下方式保持DNA的變性(單鏈)狀態(tài)。常用單片紙碟法、試管稀釋法（以抗菌藥物的最高稀釋度仍能抑制細(xì)菌生長或殺菌管為終點(diǎn)，該管含藥濃度為最低抑菌濃度MIC或最低殺菌濃度MBC），兩值越低則表示越敏感。MIC與抑菌圈呈負(fù)相關(guān)，即抑菌環(huán)直徑越大，MIC越小?；蛐酒夹g(shù)（DNA芯片、DNA微陣列）—主要過程：DNA微陣列的制備、樣品的制備、靶分子和探針之間的雜交、雜交信號的檢測與分析。染色多為G染陰性，形態(tài)不一（巨球形是特征），固定要用10g/L鞣酸不能用火焰。在液體培養(yǎng)基中使混濁菌液變澄清，在固體培養(yǎng)基上形成噬斑。IgA存在黏膜分泌液中，在局部可阻止病毒侵入，能抵抗蛋白酶的水解作用，具局部抗體。腸桿菌科分型多采用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗(yàn)。水中加入2%碳酸鈉能將沸點(diǎn)提到105℃又能防止金屬生銹。 ：制片→固定→媒染→染色→脫色→復(fù)染→水洗→干燥→鏡檢。T細(xì)胞來自骨髓，在胸腺成熟。進(jìn)入宿主：黏附，定植，侵入，轉(zhuǎn)歸。懷疑細(xì)菌性心內(nèi)膜炎時血培養(yǎng)不少于三次。低溫保存：20℃或80℃+甘油作穩(wěn)定劑。動物分離—豚鼠。暗視野顯微鏡檢查每周1次連5周，陰則每月2次連4月。35個血清型。急性期淋病菌常在白細(xì)胞內(nèi)，慢性期淋病菌常在白細(xì)胞外，在中性粒細(xì)胞內(nèi)有G性雙球菌具有診斷價(jià)值。耐熱腸毒素（ST）是通過激活腸黏膜細(xì)胞上的鳥甘環(huán)化酶，使胞內(nèi)CGMP量增多而導(dǎo)致腹瀉。致病機(jī)制：細(xì)菌釋放的內(nèi)毒素。帶有3種質(zhì)粒，主要的致病決定基因由質(zhì)粒和染色體上的毒力島編碼。血清分型可分為AB的小川型，AC的稻葉型，ABC的彥島型病原分離：水樣便直接接種在硫代硫酸鹽－檸檬酸鹽－膽鹽－蔗糖平板（TCBS）上37℃形成較大黃菌落，在含亞碲酸鉀或慶大霉素平板選擇性平板上呈灰褐色。與十二脂腸潰瘍、胃癌、胃淋巴瘤發(fā)病有關(guān)。產(chǎn)生兩種外毒素：破傷風(fēng)溶血素、破傷風(fēng)痙攣毒素94. 產(chǎn)氣莢膜梭菌：G＋，20～50℃均能生長，最適為45℃，雙層溶血，可分解糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，出現(xiàn)洶涌發(fā)酵現(xiàn)象，分5型，主要是A型，外毒素以A毒素為主，本質(zhì)是卵磷脂酶（α毒素），在蛋黃瓊脂平板上菌落周圍出現(xiàn)乳白色渾濁圈?？乖蠵T、FHA，主要用ELISA方法。生物安全柜二級：分AABB2可保護(hù)工作人員、環(huán)境、樣品。DNA染色用溴化乙錠（EB）或硝酸銀。要使＞2kb DNA片段的分辯率達(dá)到最大，所加電壓不得超過5V/cm。WHO制定的生物安全指南：《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊》2004年11月出版第3版。在合成DNA時限制性核酸內(nèi)切酶不是合成DNA的必要條件。分泌型IgA（S IgA）分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道黏膜表面。病毒檢驗(yàn)基本技術(shù)1．組織培養(yǎng)用玻璃器皿：硫酸、重鉻酸鉀液浸泡。10. C6/36是白蚊伊蚊細(xì)胞：分離登革熱、乙腦病毒。將含病毒的懸液20006000轉(zhuǎn)/ min，離心3040分鐘，可除去90%以上的細(xì)胞碎片和雜質(zhì)。103. 結(jié)核分枝桿菌：人型和牛型，專性需氧，曾發(fā)現(xiàn)G＋非抗酸顆粒稱Much顆粒，無芽無鞭無莢，燭缸法不適，應(yīng)用二氧化碳培養(yǎng)皿，常用羅－琴或米氏7H10培養(yǎng)基，35～40℃可長，35～37最適，～，18h分裂一代，2～6周才能長出菌落，不發(fā)酵糖類，人型的煙酸，硝酸鹽還原，煙酰胺酶試驗(yàn)均陽性。一般瘤型和界線類患者標(biāo)本中可找到細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)存在，有診斷意義。107. 流感嗜血桿菌：寄生人體鼻咽部，抵抗力弱，嬰幼兒易感，G—球桿菌，用石碳酸復(fù)或美藍(lán)單染呈現(xiàn)兩端濃染。感染臨床主要有2種形式：軍團(tuán)菌病LD（肺炎型）龐提阿克熱PF109. 克雷伯桿菌：又稱肺炎桿菌，以肺炎克雷伯菌多見，G—有較厚莢膜，多數(shù)有菌毛，無芽孢和鞭毛，菌體呈卵圓形或球桿狀成雙排列，有時菌落出現(xiàn)黏液型用接種環(huán)可成絲。衣原體的兩種形態(tài)：原生小體（EB，小而致密的顆粒結(jié)構(gòu)，具感染性，姬染紫紅色，無繁殖力）。交叉凝集試驗(yàn)稱外斐反應(yīng)（WeilFelix reaction），用于立克次體病的輔助診斷。1：4000甲醛液（福爾馬林）37度71小時可滅活。感染后損傷免疫系統(tǒng)，引起致死性機(jī)會感染或腫瘤，乙類?？诜够乙呙纾∣PV），脊灰Ig G≥1：100為陽性。在結(jié)構(gòu)基因中，H、N基因最易變異的基因。病毒分離必須在生物安全4級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。檢測抗體經(jīng)典法：血凝抑制試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、中和試驗(yàn)122．克里米亞—剛果出血熱CCHE：傳播媒介蜱，宿主蜂，又新疆出血熱。4個血清型，分離細(xì)胞（C6/36株）。病毒在胞內(nèi)繁殖，芽生釋放。IgG持續(xù)終身。按抗原分；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3個血清型。糞—口傳播115. 人類免疫缺陷（HIV）：是獲得性免疫缺陷綜合征。甲型（HAV）：正鏈小RNA病毒科，球形正十二面體，病毒顆粒無包膜，核酸RNA有感染性。但恙蟲病立克次體的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)和抗原成分不同，無粘液層、無微莢膜、無肽聚糖和脂多糖，故另立為東方體屬。專性細(xì)胞內(nèi)寄生。并取3份，一份酸處理，一份熱處理50℃水30分鐘。熒光素是綠色熒光素（溶于水不溶于氯化）。主要用涂片染色顯微鏡檢查，鼻黏膜或皮損處取材，用抗酸性染色后檢查。用1:1000的升汞固定5min。23. 鼻咽拭子的除菌處理：加抗生素終濃度20 000U/ml，4℃作用4小時，2000轉(zhuǎn)/ min，離心20分鐘。包涵體病毒在增殖過程中使寄主細(xì)胞內(nèi)形成一種蛋白質(zhì)性質(zhì)的病變結(jié)構(gòu)，在光學(xué)顯微鏡下可見，多為圓形、卵圓形或不定形。急性期標(biāo)本接種于Vero細(xì)胞培養(yǎng)或藤鼠腹腔與小兒頑固性腹瀉有關(guān)的是：腸集聚粘附性大腸埃希氏菌引起旅游者腹瀉的最主要的是：腸產(chǎn)毒性大腸埃希氏菌鉤體病的主要傳染源是：鼠類動物。特點(diǎn)：游離抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物（IC），若IC不能被及時清除，即可在局部沉積，通過激活補(bǔ)體，并在血小板、中性粒細(xì)胞及其他細(xì)胞參與下，引發(fā)一系列連鎖反應(yīng)而致組織損傷。反轉(zhuǎn)錄病毒基因組一般不具感染性。我國第一部實(shí)驗(yàn)室生物安全國家標(biāo)準(zhǔn)是：《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》?！?在酶切圖譜制作過程中,分離鑒定和純化DNA片段的標(biāo)準(zhǔn)方法聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）、瓊脂糖凝膠電泳。十二烷基硫酸鈉作用是解離蛋白，常用蛋白染料考馬斯亮藍(lán)，甘氨酸—緩沖瓊脂免疫電泳蛋白分離和鑒定脈沖電場凝膠電泳（PFGE）核酸分離用瓊脂糖作介質(zhì)。生物安全防護(hù)水平（BSL4）。臨床分為3個期：卡他期痙咳期恢復(fù)期。氣液相色譜已成為鑒定厭氧菌及其分類比較可靠的方法。87. 氣單胞菌最適生長溫度30℃，但在0～45℃皆可生長。83. 沙雷菌：最適溫10～36℃，4%氯化鈉下可長，產(chǎn)生靈紅霉素（非水溶）和吡羧酸（水溶），關(guān)鍵生化是DNA＋和葡萄糖酸鹽＋。有明顯多形性，呈球狀或絲狀，生長于10～43℃，在固體培養(yǎng)基上普通和奇異呈遷徙生長現(xiàn)象，三屬氧化酶陰性，苯丙氨酸脫氨酶陽性G桿菌，加入1%石炭酸或苯乙醇使終濃度為1g/%可抑制變形菌遷徒樣生長。所致疾病4類型：（1）、腸熱癥：第一次菌血癥，發(fā)熱、不適、全身痛，與菌的感染劑量有關(guān)，通常潛伏期為2周，第二次菌血癥，高熱710天，緩脈、肝脾腫大，皮膚出現(xiàn)玫瑰疹，外周白細(xì)胞明顯下降，嚴(yán)重者有出血或腸穿孔等并發(fā)癥。密螺抗原試驗(yàn)（證實(shí)試驗(yàn)）FTAABS作為診斷梅毒“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗(yàn)。培養(yǎng)基中應(yīng)含萬古霉素、多粘菌素B。幾乎所有的肺鏈對Optochin敏感。電鏡下基要本結(jié)構(gòu)：柱形原生質(zhì)體、內(nèi)鞭毛、外膜標(biāo)本：血液、腦脊液在發(fā)病后10天內(nèi)，出現(xiàn)發(fā)熱但未用藥前，不能即時送檢，血液用不含枸櫞酸鈉抗凝520℃保存，1周內(nèi)接種。靜脈血3—5毫升。凍干菌種只能使用一次，凍干菌種打開后需要以傳代保存形式保留工作菌種。用綠色濾光片。41. 基因重組可使基因再激活表現(xiàn)為：交叉復(fù)活和多重復(fù)活。干擾素（IFN）具有廣譜抗病毒作用，只能抑制病毒，即通過誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白（AVP）發(fā)揮效應(yīng)。潔凈度可達(dá)百級，只保護(hù)樣品。細(xì)胞膜的主要功能：物質(zhì)納泄、生物合成、呼吸作用、形成中介體。大腸桿菌呈++，產(chǎn)氣桿菌呈++。IgG在體液中含量最多，分子量小是唯一能通過胎盤的抗體。對紫外線敏感1015分鐘失去活性。10. 雜交分：斑點(diǎn)，菌落原位，Southern（DNA）印跡，Northern（RNA，DNA）印跡。熱變性DNA一般經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性,此過程稱之為 退火，Tm低25℃左右的溫度是復(fù)性的最佳條件。3. 藥物敏感試驗(yàn)：紙碟法、小杯法、凹孔法、試管法。各藥敏紙片間距不少于24mm，距平板內(nèi)緣不小于15mm。具有快速、敏感、高通量檢測平臺。增殖：以二分裂、出芽、巨形體釋放顆粒方式。溫和噬菌體是噬菌體基因組整合于宿主菌染色體中，有溶原性周期、溶菌性周期。IgE可與肥大細(xì)胞膜上的Fc受體結(jié)合?？梢删謩e接種克氏雙糖鐵（KIA）尿素靛基質(zhì)動力（MIU）來定屬。22. 紫外線波長265～266nm時殺菌力最強(qiáng)。革蘭染色法：初染（草酸銨結(jié)晶紫）、媒染（碘液）、脫色（95%酒精）、復(fù)染（番紅）。在人體血液中T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞總數(shù)的60—70%，；在胸導(dǎo)管則占95%以上。毒力有侵襲力和毒素。 49. 腸桿菌科的強(qiáng)選擇（SS瓊脂）弱選擇（EMB，麥康凱）。菌種取出須置于干冰或預(yù)冷的鉛質(zhì)容器內(nèi)，用完立即放回不可菌種解凍。生化特征：分解尿素、產(chǎn)生硫化氫。病原鑒定：血清群用顯微