【正文】 心3040分鐘，可除去90%以上的細胞碎片和雜質(zhì)。18. 常用的細胞培養(yǎng)液：MEM、1640。10. C6/36是白蚊伊蚊細胞：分離登革熱、乙腦病毒。TCID50—半數(shù)細胞培養(yǎng)物感染量。病毒檢驗基本技術1．組織培養(yǎng)用玻璃器皿：硫酸、重鉻酸鉀液浸泡?？梢员３值鞍踪|(zhì)活性的蛋白質(zhì)沉淀方法是：硫酸銨、聚乙二醇、免疫沉淀法。分泌型IgA（S IgA）分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道黏膜表面。逆轉(zhuǎn)錄酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具備的。在合成DNA時限制性核酸內(nèi)切酶不是合成DNA的必要條件。如細菌多糖、聚合鞭毛蛋白等。WHO制定的生物安全指南：《實驗室生物安全手冊》2004年11月出版第3版。MPN法稀釋培養(yǎng)測數(shù)法。要使＞2kb DNA片段的分辯率達到最大，所加電壓不得超過5V/cm。MPS單核吞噬細胞系統(tǒng)，又稱巨噬細胞系統(tǒng)。DNA染色用溴化乙錠（EB）或硝酸銀。過濾中先洗脫的是大分子物質(zhì)，后小分子物質(zhì)。生物安全柜二級：分AABB2可保護工作人員、環(huán)境、樣品。衛(wèi)生毒理學1．外源化學物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)運：吸收、分布、代謝、排泄四階段?？乖蠵T、FHA，主要用ELISA方法。細菌一般不侵入血，但外毒素可入血引起毒血癥，不能立即送檢時應浸于無菌生理鹽水或15%甘油鹽水中。產(chǎn)生兩種外毒素：破傷風溶血素、破傷風痙攣毒素94. 產(chǎn)氣莢膜梭菌：G＋，20～50℃均能生長，最適為45℃，雙層溶血，可分解糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，出現(xiàn)洶涌發(fā)酵現(xiàn)象，分5型，主要是A型，外毒素以A毒素為主，本質(zhì)是卵磷脂酶（α毒素），在蛋黃瓊脂平板上菌落周圍出現(xiàn)乳白色渾濁圈。最理想的標本是組織，送到實驗室后20～30min內(nèi)處理完不超過2h。與十二脂腸潰瘍、胃癌、胃淋巴瘤發(fā)病有關。根據(jù)溶原性、溶原噬菌體的敏感性、山梨醇發(fā)酵試驗、溶血試驗，將埃爾托型霍亂弧菌分成al共12個生物型。血清分型可分為AB的小川型，AC的稻葉型，ABC的彥島型病原分離：水樣便直接接種在硫代硫酸鹽－檸檬酸鹽－膽鹽－蔗糖平板（TCBS）上37℃形成較大黃菌落，在含亞碲酸鉀或慶大霉素平板選擇性平板上呈灰褐色。只有弗勞地靛基質(zhì)－，H2S＋，僅異型的丙二酸鹽＋，β半乳糖苷酶，賴氨酸脫羧酶，枸櫞酸利用三試驗：枸櫞酸菌＋－＋，沙門－/＋＋＋，愛德華－＋－。帶有3種質(zhì)粒，主要的致病決定基因由質(zhì)粒和染色體上的毒力島編碼。尿素半固體（MIU）。致病機制：細菌釋放的內(nèi)毒素。急性中毒性痢疾多見小兒。耐熱腸毒素（ST）是通過激活腸黏膜細胞上的鳥甘環(huán)化酶，使胞內(nèi)CGMP量增多而導致腹瀉。初篩試驗和療效觀察非密螺抗原試驗，正常牛心肌心脂質(zhì)為抗原測患者血清中反應素，判斷是否復發(fā)及再感染。急性期淋病菌常在白細胞內(nèi)，慢性期淋病菌常在白細胞外，在中性粒細胞內(nèi)有G性雙球菌具有診斷價值。病原鑒定：Kovac氧化酶實驗10秒內(nèi)呈紫色陽性反應。35個血清型。（二）肺炎鏈球菌：℃pH —, 在含3%～5%的兔血清中生長良，血平板上草綠色a溶血環(huán)。暗視野顯微鏡檢查每周1次連5周，陰則每月2次連4月。68. 鉤端螺旋體：原核細胞型微生物，雙股DNA。動物分離—豚鼠。65. 葡萄球菌：產(chǎn)生脂溶性色素，多數(shù)分解甘露醇產(chǎn)酸液化明膠和產(chǎn)生血漿凝固酶。低溫保存：20℃或80℃+甘油作穩(wěn)定劑。近交系動物：采用兄妹交配（或親子交配）繁殖20代以上的純品系動物。懷疑細菌性心內(nèi)膜炎時血培養(yǎng)不少于三次。46. 顯微鏡的分辯率為波長一半。進入宿主：黏附，定植，侵入，轉(zhuǎn)歸。RNA主要存在于細胞質(zhì)中占細菌干重的10%，DNA存在于染色體和質(zhì)粒中。T細胞來自骨髓，在胸腺成熟。菌體深褐色、鞭毛褐色。 ：制片→固定→媒染→染色→脫色→復染→水洗→干燥→鏡檢。轉(zhuǎn)位因子為存在于細菌染色體或質(zhì)粒上的一特異的核苷酸序列可在DNA中移動，主要有三類：插入順序（最小的轉(zhuǎn)位因子），轉(zhuǎn)座子，轉(zhuǎn)座噬菌體。水中加入2%碳酸鈉能將沸點提到105℃又能防止金屬生銹。一般7～10天后機體產(chǎn)生特異性免疫。腸桿菌科分型多采用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗。Th1細胞誘導產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應（DTH）：凝集試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、免疫熒光試驗、膠體金免疫吸附試驗17. 細菌營養(yǎng)轉(zhuǎn)運的方式有：離子，透性酶，磷酸酶。IgA存在黏膜分泌液中，在局部可阻止病毒侵入，能抵抗蛋白酶的水解作用，具局部抗體。性菌毛僅有1～10根，毒力和耐藥質(zhì)粒都能通過它轉(zhuǎn)移，有致病性。在液體培養(yǎng)基中使混濁菌液變澄清，在固體培養(yǎng)基上形成噬斑。質(zhì)粒在細菌的自發(fā)突變中起重要作用。染色多為G染陰性，形態(tài)不一（巨球形是特征），固定要用10g/L鞣酸不能用火焰。：雙岐索引法，表解法，數(shù)字編碼鑒定法?；蛐酒夹g（DNA芯片、DNA微陣列）—主要過程：DNA微陣列的制備、樣品的制備、靶分子和探針之間的雜交、雜交信號的檢測與分析。），擴增產(chǎn)物用溴乙啶染色的凝膠電泳。MIC與抑菌圈呈負相關，即抑菌環(huán)直徑越大，MIC越小。檢驗技術資格考試考點精要——微生物學檢驗（中級）1. 生物學按界門綱目科屬種分類，種是最小單位。常用單片紙碟法、試管稀釋法（以抗菌藥物的最高稀釋度仍能抑制細菌生長或殺菌管為終點，該管含藥濃度為最低抑菌濃度MIC或最低殺菌濃度MBC），兩值越低則表示越敏感。PCR技術—是選擇DNA或RNA體外擴增技術，用標本提取DNA為擴增模板，選用一對特異寡核苷酸為引物，PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，經(jīng)不同溫度變性9394℃（作用1min氫鍵斷裂形成單鏈DNA）、退火4060℃（迅速冷卻3060s引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈）、延伸7075℃（在TaqDNA聚合酶作用下，以A、T、G、C四種脫氧核苷酸為原料，從引物5’→3’端延伸，合成與模板互補的DNA鏈。核酸實驗中經(jīng)常以迅速冷卻至4℃以下方式保持DNA的變性(單鏈)狀態(tài)。具有RFLP技術的可靠性和PCR技術的高效性。11. L型細菌：細胞壁缺陷（形態(tài)多樣，染色不定，可過濾，滲透壓敏感，生化減弱等）培養(yǎng)應高滲透壓（35%氯化鈉、20%蔗糖）。突變：自發(fā)突變、誘發(fā)突變。噬菌體分毒性噬菌體、溫和噬菌體（溶原性噬菌體）；毒性噬菌體以復制方式增殖，過程吸附、穿入、生物合成、成熟與釋放，少脫殼。鞭毛是由細胞質(zhì)伸出的蛋白性絲狀物。IgM分子量大，是最早產(chǎn)生的抗體，中作早期診斷。細胞免疫（T淋巴細胞介導，效應細胞：細胞毒性T細胞（CTL）、CD4+Th1細胞、CD8+毒性T細胞CTL）。還需做糖發(fā)酵試驗，KIA產(chǎn)酸產(chǎn)氣，MIU＋――，有菌體（O）莢膜（K）鞭毛（H）三抗原。細菌的內(nèi)毒素一般由：脂質(zhì)A（主要成份），非特異性核心多糖，菌體特異性多糖。細胞質(zhì)中的異染顆粒主要成份：RNA、多偏磷酸鹽。主要有耐藥質(zhì)粒，Col質(zhì)粒（編碼腸毒素）Vi質(zhì)粒（編碼細菌與致病性有關的蛋白）。；而堿性染料電離時染料離子帶正電。制片（蒸餾水+菌）→干燥（晾干）→染色（A液3—5分鐘）→水洗→干燥（晾干）→染色（B液稍加熱分30—60秒）→水洗→干燥（晾干）。 ：T細胞、B細胞、K細胞。36. G＋菌等電點pI=2～3，G－菌等電點pI=4～5。42. 粘附素是細菌表面的蛋白質(zhì)有菌毛和非菌毛?？?，屬，種分類主要依靠生化特性和抗原結構。48. 不能立刻接種的血應用SPS（氯化鈉溶液）抗凝。58. 純***動物：無計劃隨意交配的動物。凍干菌種在使用時須“復蘇”且須傳代才能恢復原生長特性。每轉(zhuǎn)種三代要鑒定一次。用肝浸液瓊脂培養(yǎng)基、蛋白胨、土豆浸液瓊脂等。用兔抗B31特異性多克隆抗體進行間接免疫熒光抗體試驗（IFA），或ELISA、WB最終確診方法。2周取尿液則用1%牛血清白蛋白保存，用磷酸鹽緩沖液稀釋取50微升接種到5毫升培養(yǎng)基中每個稀釋度2管，每管中先加入30微克新霉素濾紙片或每毫升培養(yǎng)基加5氟尿嘧啶200400微克?？谷苎豋抗體溶血法、膠乳凝集法。（三）豬鏈球菌：人感染致病：腦膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥、中毒性休克。鏡檢：腦脊液2000r/min離心20分鐘，沉淀物鏡檢腦膜炎雙球菌常在多核白細胞內(nèi)或細胞外。標本接種在巧克力血瓊脂平板或TM培養(yǎng)基?？贵w檢測：產(chǎn)生特異性抗體、反應素抗體（表面脂質(zhì)引起），有非密螺和密螺抗原試驗。它是間接熒光抗體檢測方法，75. 腸產(chǎn)毒型（ETEC）：作用小腸，霍亂樣腸毒腹瀉，是5歲以下嬰幼兒和旅游者腹瀉的重要病原菌；腸毒素有耐熱和不耐熱，LTⅠ是引起人類主要的致病物質(zhì)，對熱不穩(wěn)定，65℃30分鐘被破壞，A亞單位是毒素的活動部位。糞口傳播，只局限于腸道，一般不進侵入血，發(fā)熱、腹痛、水樣腹瀉，后轉(zhuǎn)為膿血黏液便，伴有里急后重、下腹部疼痛。（2）、胃腸炎（食物中毒）：由攝入大量＞108被鼠傷寒沙門菌(常引起食物中毒)、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌污染的食物引起。胞內(nèi)寄生菌，臨床上主要為不明原因持續(xù)發(fā)熱。能迅速分解尿素以區(qū)別沙門菌，外斐試驗輔助診斷立克次體79. 耶爾森氏菌（鼠疫）：有7種，鼠疫，假結核，小腸與致病有關。80. 枸櫞酸桿菌：有弗勞地，異型，無丙二酸鹽。85. 霍亂菌：呈弧狀或逗點狀，米泔樣糞便作懸滴觀察，細菌呈穿梭樣或流星狀運動；糞便涂片鏡檢見排列如“魚群”狀G－菌，耐堿不耐酸。噬菌體（VP1VP5）將埃爾托型霍亂弧菌分成32個噬菌體型。88. 彎曲菌屬是一類微需氧菌，不分解糖，氧化酶+，菌體彎曲逞豆點狀，S狀或螺旋狀有動力G－菌，5種5亞種，對人致病的主要是空腸彎曲菌（人類腹瀉最常見之一，43℃生長，25℃不生長）89. 幽門螺桿菌（HP）：常用布氏培養(yǎng)基或腦心浸液血瓊脂加入5～10%羊血和馬血，在（85%N、10%CO5%O2）條件下，37℃3—7天，長成針尖狀的半透明菌落，加入萬古霉素、TMP、兩性霉素B等組成抑菌劑防止雜菌生長。厭氧菌每克糞中高達1012個，標本絕不能被正常菌污染，應盡量避免接觸空氣。93. 破傷風桿菌：鼓槌狀，早期培養(yǎng)G＋，48h后特別是芽胞形成后G－，的O和H抗原，主要癥狀為骨骼肌痙攣，不發(fā)酵糖類，能液化明膠產(chǎn)H2S。免疫沉淀試驗（EleK平板試驗）檢測產(chǎn)生白喉外毒素，是診斷白喉的關鍵試驗。依據(jù)菌落性狀及凝集試驗確診。是構成細菌毒力的因素之一。生物安全柜一級：可保護工作人員和環(huán)境。介質(zhì)：葡聚糖。為正交的交變脈沖電場；條帶靠近負極為大片段DNA，靠近正極為小片段DNA?；驹硎情g接法或夾心法免疫膠體金技術用于檢測：抗原、半抗原、抗體ATCC是指美國典型培養(yǎng)物保藏中心。普通水平電泳制備染色體DNA酶切圖譜時，DNA電泳遷移率的對數(shù)與凝膠濃度成線性關系，分離＜ %%，分離＞10kb %%，在低電壓時，線狀DNA片段的遷移率與所加電壓成正比，電壓增加，瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小。培養(yǎng)螺旋體常用培養(yǎng)基Korthof，溫度28℃，含有10%兔血清。2004年10月1日執(zhí)行。少數(shù)Ag屬此類。2．變態(tài)反應（超敏反應）是指機體對某些抗原初次應答后，再次接受相同抗原刺激時，發(fā)生的一種以機體生理功能紊亂或組織細胞損傷為主的特異性免疫應答。大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段沒有5’3’外切酶活性。 Ⅳ型變態(tài)反應：即遲發(fā)型（細胞介導型），Ⅳ型是由特異性致敏效應T細胞釋放的LF介導的。特異性B細胞經(jīng)過抗原識別、活化、增殖、分化成為漿細胞。發(fā)病一周內(nèi)取血液，第二周以后取尿，有腦膜炎型癥狀者取腦脊液進行檢查。半數(shù)感染量（ID50）導致半數(shù)組織培養(yǎng)細胞發(fā)生感染的細菌數(shù)量或毒素劑量。9．引起腦膜炎的腸道病毒：腸道病毒70型、腸道病毒71型、柯薩奇A組16型、脊髓灰質(zhì)炎病毒。經(jīng)過69千帕，15分鐘的高壓滅菌，放置在4℃的環(huán)境內(nèi)，保存?zhèn)溆谩?4. 大便標本的除菌處理：加抗生素終濃度10 000U/ml，4℃過夜或1000轉(zhuǎn)/ min，離心20分鐘。病毒RNA堿基序列與mRNA互補者，稱為負鏈RNA病毒，負鏈RNA病毒的顆粒中含有依賴RNA的RNA多聚酶，可催化合志互補鏈。102. 產(chǎn)單核李斯特菌：有鞭毛，無牙胞對人致病，在羊血平板上β溶血環(huán)，25℃有動力，37℃動力緩慢（此特征可作為初步判定），能在4℃進行冷增菌，在半固體中可現(xiàn)倒傘狀，致病物質(zhì)為李斯特菌溶素O，通過胎盤或產(chǎn)道感染新生兒是重要特點，常伴EB病毒引起傳單。每油鏡視野1—9條抗酸菌3+結核分枝桿菌，無內(nèi)外毒素，致病性與其索狀因子，蠟質(zhì)D，分枝菌酸有關。除臨床檢查外，皮膚切刮法涂片查菌及組織病理學檢查可有助于麻風診斷的確定。主要是污染水、食物。O抗原有兩種：內(nèi)毒素脂多糖原內(nèi)毒素蛋白OEP（類屬抗原），選擇培養(yǎng)基：NAC（乙酰氨基半乳糖）。108. 軍團菌：1976年，USA費城，G—為胞內(nèi)寄生菌。證實試驗：免疫熒光方法。血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱，菌落大呈黏液型，光亮黏稠，菌落易融合，發(fā)酵乳糖，呈現(xiàn)有色菌落。68日齡雞胚卵黃囊中繁殖，有包涵體。雞胚卵黃囊常用于立克次體的傳代。斑疹傷寒、恙蟲病立克次體的脂多糖與普通變形桿菌某些菌株（如OX 1X2 、OX k 等）的菌體抗原有共同的抗原成分。人類通過恙螨幼蟲叮咬而感染112. 支原體：無細胞壁，僅有細胞膜（外，中，內(nèi)，中間是磷脂，內(nèi)外是蛋白質(zhì)及糖）呈高度多形性，能通過濾菌器，最小原核細胞微生物。是在各種條件下抵抗外界變化能力最強的病毒之一。母嬰、輸血、血源性傳播。簡稱艾滋?。ˋIDS），主要通過性接觸、血液、母嬰傳播。核酸檢測：定性：PCR、RTPCR技術；定量：逆轉(zhuǎn)錄PCR 實驗（RTPCR）核酸序列擴增實驗（MASBA）。脊灰病毒基因組呈單鏈線性，病毒的主要抗原是VP1蛋白。包膜表面兩種刺突；血凝素HA、血溶素HL，均為中和抗原可誘導產(chǎn)生中和抗體。IgG用于人群抗體陽性率調(diào)查、抗體水平測定、疫苗初免結果觀察。發(fā)病5日之內(nèi)靜脈血接種，用標準抗體做免疫熒光試驗、標準毒株抗血清做中和試驗、交叉阻斷試驗，ELISA、反向間接血凝試驗測抗原。病毒基因組長19kb，由7個連續(xù)排列的基因組成，分別編碼；核蛋白、基質(zhì)蛋白、多聚酶、3種小蛋白。乙腦病毒以接種卵黃囊最佳，常用檢測標本：血液、腦脊液、尸檢標本、蚊蟲，保持冷鏈。用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應（RTPCR）檢測登革熱