【正文】 。一般可保藏 1～ 3年。 ? （ 3）、貯藏方法 待孢子彈射上濾紙片后，在無菌條件下，用鑷子將紙片一一移入無菌空試管中，然后將試管封熔保藏在 0℃ ～ 1℃ 冰箱內(nèi)。 ? （ 1）、濾紙片準(zhǔn)備 將白色或黑色濾紙片剪成寬～ ，長 ～ 8厘米 ,整齊地平鋪在大培養(yǎng)皿底 (直徑 15厘米 ),蓋上皿蓋 ,并用牛皮紙包好 ,在 30分鐘，然后在烘箱中稍加烘干。 ? 第五、經(jīng)抽樣檢查，證明無雜菌生長，即可封口進(jìn)行保藏。或?qū)㈡咦咏佑?5毫升無菌水的試管中，充分搖勻成孢子懸浮液，然后用 1毫升無菌吸管吸取孢子懸浮液加入沙土管中（每管加 ）即可。滅菌后取少許干沙土放入牛肉湯培養(yǎng)液中無菌培養(yǎng)，檢查無菌，證明沙土管滅菌徹底合格后，方可使用。 ? 第二、沙土比例為 2:1或 4:1，裝于小試管中，裝入量以～ 1厘米高為宜，洗凈試管，塞好棉塞，在 壓力下滅菌 30分鐘，需重復(fù)進(jìn)行 3次。鹽酸用量以淹沒沙面為宜。 六、干燥保藏法 ? 沙土管保藏法 ? 此法是將食用菌孢子保藏于干燥的無菌沙土中，保藏期為2～ 10年。 ? 草粉保藏法 稻草粉碎后加入 30％麩皮，pH值調(diào)到 8左右，分裝入試管內(nèi)，裝量為管長的 2/3左右，在 小時，接入草菇菌種適溫培養(yǎng)，菌絲長滿管后，在接種箱內(nèi)，換上無菌橡皮塞，置8℃ 以上室溫下保藏。使用時，從冰箱取出后在 25℃ 恒溫箱內(nèi)培養(yǎng) 18～ 24小時，在無菌條件下去掉試管上部的菌種，取下部較新鮮的菌絲體，接入斜面培養(yǎng)基即可。 ? 木屑保藏法 采用木屑麩皮培養(yǎng)基，裝入試管長度 3/4后，擦洗干凈，管口塞好棉塞，捆扎后，在 時，取出接種后，在 25℃ 恒溫下培養(yǎng)。制作方法：先將麥粒浸水 4～ 5小時，濾去水后晾干麥粒表面的水分，裝入小試管，裝量為試管高度的 1/3，高壓蒸汽滅菌，在 帕壓力下，滅菌 1小時，冷卻后接入孢子液或菌絲懸浮液，搖勻后置適宜溫度下培養(yǎng)，當(dāng)試管中的麥粒發(fā)滿菌絲后，放入裝有氯化鈣的干燥器內(nèi)，進(jìn)行抽氣干燥 ,干燥后，將干燥器放于 20℃ 以下的溫度保藏。 五、自然基質(zhì)簡易保藏法 ? 麥粒保藏法 用麥粒保藏蘑菇和靈芝菌種，保藏期蘑菇達(dá)一年半，而靈芝可達(dá) 5年之久仍有活力。罐內(nèi)的氣相溫度為150℃ ，液體溫度為 196℃ 。是目前保藏菌種的最好方法。 四、液氮超低溫保藏法 ? 是根據(jù)活細(xì)胞在超低溫下（ 196℃ ）處于休眠狀態(tài)而設(shè)計的一種長期保藏菌種的方法。使用時，在無菌條件下用砂輪把安瓿管上端劃一刻痕，置火焰上加熱，再把蘸有來蘇爾的紗布敷上，使之破裂。 ? 真空熔封 將安瓿管安裝在抽氣管上抽氣熔封，真空度達(dá) ,邊抽氣邊用單火焰或雙火焰將安瓿管上端熔斷封口，熔封后，檢查安瓿管是否漏氣。然后戴上防凍手套，將安瓿管壁擦干凈，立即放入真空干燥器內(nèi)抽真空。 ? 速凍干燥 將安瓿管放在 40℃ ～ 30℃ 低溫冰箱內(nèi)預(yù)凍1小時，防止抽氣時產(chǎn)生泡沫外溢。 ? 制備孢子懸浮液 在試管中加入 3毫升脫脂牛奶加棉塞，121℃ 滅菌 30分鐘，在無菌條件下放入食用菌孢子，攪動制成孢子懸浮液，用無菌的長毛細(xì)滴管吸取孢子懸浮液注入安瓿管底球部，每管約 。 三、冷凍干燥貯藏法 ? 此法是采用真空、干燥和低溫 3種手段來保藏菌種，菌種保藏期可達(dá) 10～ 20年，仍不降低其原有性能，是目前應(yīng)用最廣泛、效果較好的孢子貯藏方法。 ? 活化培養(yǎng) 剛從石蠟油菌種中移出的菌絲體常沾有少許礦油，生長較弱，因此，需要再移植一次，才能恢復(fù)生長。 ? 礦油處理 選用化學(xué)純的液體石蠟（要求不含水，不霉變），分裝于三角燒瓶中，裝至瓶體的1/3處，加棉塞封口，在 1小時 ,由于高壓蒸汽滅菌常有水蒸氣滲入 ,需放在40℃ 溫箱中烘烤 8～ 10小時 ,使水分蒸發(fā)至石蠟液透明為止 . ? 灌注礦油 用無菌吸管將滅菌石蠟液注入在要保藏的菌種斜面試管內(nèi)，用量以高出斜端 1厘米為宜。一般室溫下可保藏 5～ 7年，期間 1～ 2年應(yīng)移接 1次。 二、礦油保藏法 ? 礦油（主要是液體石蠟）保藏，又稱液體石蠟覆蓋保藏。 ? 減少冰箱開啟次數(shù) 為保持冰箱的穩(wěn)定，不要隨意過多地打開冰箱，在條件允許下，設(shè)置一個永久的保藏冰箱，與經(jīng)常用菌種的冰箱分開使用。 ? 加大培養(yǎng)基用量 保藏菌種培養(yǎng)基用量，每管不少于 12毫升，以延緩水分的損耗。 ? 利用此法保藏菌種，應(yīng)盡可能使菌絲體在培養(yǎng)基上不干、不死，以延長保藏時間，為達(dá)到此目的，需注意以下幾點(diǎn)： ? 適當(dāng)加大瓊脂用量 瓊脂具有保水功能，在配制保藏用培養(yǎng)基時，為了減少培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，延長保藏時間，可將瓊脂用量由 2％加大到 ％。用此法保藏菌種，因溫度不夠低，只有 4℃ 左右，微生物的代謝活動并未停止，試管斜面還容易失水變干，保藏時間較短，一般每隔 3～ 4個月需移植一次，幾乎所有的食用菌（除草菇外）都可以使用這種方法保藏菌種。 ? 常用的保藏方法有以下幾種： ? 一、斜面低溫保藏法 ? 斜面低溫保藏，又叫定期移植保藏法。因此，保藏菌種和選育菌種具有同樣重要的意義。 第六章 菌種保藏 ? 菌種是重要的生物資源，也是食用菌生產(chǎn)首要的生產(chǎn)資料。 ? 退化 是指菌絲活力和產(chǎn)量逐代降低的遺傳現(xiàn)象。 四、菌種老化、退化及產(chǎn)生原因 ? 老化 老化是由于菌齡太長或營養(yǎng)不足、環(huán)境不適、保存不善而引起菌絲生活力降低的生理現(xiàn)象。 ? （ 2）、原種、栽培種 菌絲濃密、潔白，呈棉絮狀，上下均勻，富有彈性，培養(yǎng)基變淡黃色或白色，均勻一致，為優(yōu)質(zhì)菌種。菌齡以 35～ 40天為宜。 ? 黑木耳 ? （ 1）、母種 菌絲白色，短、密、整齊，平貼于斜面培養(yǎng)基上，不爬壁，生長速度較慢；有些品種可產(chǎn)生次生孢子，使培養(yǎng)基表面的菌絲體帶有粉末狀物；有些品種在斜面培養(yǎng)基上能形成小原基；菌絲長滿斜面后，若出現(xiàn)黃斑，培養(yǎng)基逐漸變成褐色、淺黑色，說明菌種已老化。生長速度中等，適溫下 12～ 14天可長滿試管斜面，略有爬壁現(xiàn)象，有的品種可以形成原基。 ? （ 2）、原種、栽培種 菌絲密集、潔白，長勢均勻、粗壯，呈絨毛狀，有爬壁現(xiàn)象，在培養(yǎng)基表面有少量珊瑚狀小菇蕾出現(xiàn)，菌齡以 20～ 25天為宜。 三、幾種主要食用菌菌種鑒別標(biāo)準(zhǔn) ? 平菇 ? （ 1）、母種 菌絲潔白、濃密、粗壯，生長整齊，不產(chǎn)生色素，菌絲生長快，在適溫下 6～ 8天可長滿試管斜面。 ? 培養(yǎng)觀察 對分離或引進(jìn)的菌種，通過培養(yǎng)菌絲，觀察其在偏干、偏濕及干濕適宜條件下的生長情況，以及耐高溫測試，以確定菌種生活力及適應(yīng)環(huán)境能力。直觀法比較簡單，但鑒定人必須要有實踐經(jīng)驗。 二、菌種鑒定方法 ? 直觀法 用肉眼直接觀察菌種，看包裝是否合乎要求，棉塞有無松動，試管、玻璃瓶、塑料袋是否破損，有無病蟲害浸染，色澤是否正常，有無老化現(xiàn)象。 ? 潤：培養(yǎng)體濕潤，與瓶壁緊貼而不干縮，含水量適宜。 ? 壯：菌絲健壯，分枝濃密，生活力強(qiáng)。原種、栽培種菌絲應(yīng)相連接成塊，而不松散。具體要求是： ? 純：菌種的純度高，不能感染有任何雜菌。 ? 一、優(yōu)質(zhì)菌種的標(biāo)準(zhǔn) 食用菌優(yōu)質(zhì)菌種的標(biāo)準(zhǔn)，隨品種不同而有差異。 ? （ 5）、菌絲的鑒定，在土中獲得的菌種，其可靠性較小，必須經(jīng)過出菇鑒定才能確定是否是該菌菌種。 ? （ 3）、取菌絲束尖端部分，接種到加有細(xì)菌抑制劑的培養(yǎng)基中。操作方法如下：（ 1）、取菇體下與菇根相連的菌絲體，盡可能取較清潔的菌絲束。用前述分離方法能獲得菌種的一般不用這種方法。 土中菌絲分離法 ? 是利用菌類地下的菌絲體分離獲得菌種的方法。還有一些菌類，如銀耳菌絲，只有與香灰菌絲生長在一起才能產(chǎn)生子實體，如果要同時得到這兩種菌絲