【正文】 。 ? 膠囊的壁材選擇范圍很寬 ， 不一定是疏水材料 ， 也可以通過控制其表面孔徑等方法使溶劑的固定化效果更好 。 ? 由普通溶劑萃取的液 液傳質(zhì)變?yōu)榱斯?液傳質(zhì) ， 設備更加簡單 、 操作更容易 ， 不存在液 液萃取時的放大失真 。 ? 聚合反應法：界面聚合 、 原位聚合和懸浮交聯(lián)法 。 ? 物理 、 機械法：微膠囊殼材料的變化過程為物理變化 。 ? 相分離法 （ 凝聚過程 ） ：單凝聚和復凝聚 。 溶劑分散方式主要有攪拌 、超聲和膜分散等 。 20世紀 90年代迅速發(fā)展起來，即在微膠囊形成過程中將用于萃取的溶劑包覆于微膠囊的空腔內(nèi)。 ? 新的問題：固定化溶劑穩(wěn)定性較差，支撐材料耐溶劑能力不夠。 溶劑微膠囊萃取 ? 溶劑萃取的問題：溶劑損失、相分離難。 ? 在細絲表面涂覆聚合物涂層可以提高萃取效率。 纖維管內(nèi)固相微萃取 (Fiberintube SPEHPLC) ? 用聚合物細絲作萃取介質(zhì)，幾百根聚合物細絲縱向填進一個短的聚醚醚酮 (PEEK)或聚四氟乙烯 (PTFE)毛細管中。 ? 在一根長 20cm，內(nèi)徑 mm的 DB1聚二甲基硅氧烷涂層毛細管中插入一根同樣長度的內(nèi)徑為 銹鋼絲構(gòu)成萃取器件，與 μHPLC聯(lián)用測定了人尿中的抗抑郁藥物。 金屬絲管內(nèi)固相微萃取 (Wireintube SPME) ? 在 intube SPME的萃取毛細管中插入一根不銹鋼絲，毛細管的內(nèi)體積顯著減少。m C18 ) 。 30cm長， mm內(nèi)徑， ?m膜厚的 Omegawax 250 GC毛細管柱作為萃取柱。 ? 涂層方便易得，種類多樣，易于自動化。 管內(nèi)固相微萃取 (intube SPME) ? 將涂層涂在石英管的內(nèi)表面，可用 GC開管毛細管柱作為萃取柱。 SPME與 μHPLC聯(lián)用接口的三通具有合適的尺寸，使解吸效率很高，同時與微分離系統(tǒng)適配，減少了柱外效應。 管外固相微萃取 ? 采用傳統(tǒng)的外表涂有涂層的纖維頭，其 SPMEHPLC聯(lián)用界面包括一個六通進樣閥和一個解吸池，樣品萃取后，SPME纖維頭浸入解吸池中用適當溶劑解吸，之后將閥切換至進樣位置用 HPLC分析檢測。 ? 通過石英纖維頭表面的高分子涂層對樣品中的有機分子進行萃取和預富集，使樣品預處理過程大為簡化，提高了分析速度及靈敏度。 固相微萃?。?SPME） ? 1989年加拿大 Pawliszyn等提出。 紫杉醇的常壓反相層析精制 ? 經(jīng)固相萃取初分離的紫杉醇 ,再用 C18 常壓層析進一步純化。 ③ 雜質(zhì)淋洗 : 先用 10ml的含 20%甲醇的乙酸銨緩沖液淋洗并抽干 ,然后用 10ml含 60%甲醇的乙酸銨淋洗。 ? 固相萃取方法 (使用 SepPak C18硅膠載體柱 ) ① 活化 : 往柱中依次加入 1 0ｍｌ乙酸乙酯、甲醇和 。 實例 2. 固相萃取分離提純紫杉醇 ? 紫杉醇是一種具有獨特抗癌機理的天然抗癌藥物 ,它對乳腺癌和卵巢癌等有特殊的療效。 ? 右圖為經(jīng) SPE處理并衍生后膽汁酸的 HPLC譜圖。 實例 1. HPLC測定人血清中膽汁酸的樣品前處理。如果不進行這一步，就會減少待測組分的保留，影響回收率，而且有可能出現(xiàn)干擾峰。 固相萃取操作 基本步驟： ? 用甲醇等溶劑活化固定相； ? 用水或緩沖溶液（有時也用不含被測物質(zhì)的空白溶液）平衡萃取柱； ? 將樣品負載在萃取柱上； ? 用水或緩沖溶液沖洗萃取柱，以消除樣品基體； ? 用流動相或溶劑將待測組分從萃取柱上洗脫下來； ? 最后將流出液直接或經(jīng)蒸發(fā)濃縮后進行后續(xù)分析。 ? 非極性物質(zhì)，如脂肪、蠟、碳氫化合物、類脂類和芳香類化合物，可以強烈地吸附在這類固定相上，如果采用溫和的洗脫條件，上述非極性物質(zhì)可以與極性或離子性污染物分離。 有機高分子聚合物固定相 ? 也是利用范德華力、氫鍵、離子相互作用、偶極 偶極相互吸引等機理進行分離。疏水鍵合能（偶極 偶極，偶極 誘導偶極，色散相互作用）： 1～ 10kcal/mol；極性基團間的氫鍵： 5～ 10 kcal/mol，這種類型的相互作用在硅膠表面發(fā)生的機會較多。了解是哪些力在起作用，有利于制訂特效的分離方法。 相互作用能 ? 待測組分可以通過氫鍵、偶極 偶極相互作用、疏水作用力、靜電相互作用等機理保留到固定相上。先用水然后用乙腈沖洗固定相以消除有可能產(chǎn)生干擾的成分。推薦采用緩沖溶液作為二級調(diào)節(jié)溶劑是因為水的 pH值是波動的，而且沒有緩沖能力。 ? 殘留硅醇基可用三乙胺或醋酸銨等競爭堿來屏蔽。 ? 例如，固相萃取法萃取胺時，帶正電荷的胺與帶負電荷的硅醇基形成非共價鍵，很難離解。 殘余硅醇基的作用 ? 在 pH小于 2時，硅醇基不帶電荷； pH大于 2時，硅醇基逐漸離解而帶負電荷，從而影響萃取。即使采用最嚴格的封尾方法，也只能將鍵合相形成后剩余的 70%的硅醇基團封住。接著 ,安裝在機械臂上的移液針將ＳＰＥ支架移動到托盤后面的位置 ,使ＳＰＥ柱位于相應的洗脫液收集管上方并將洗脫下來的化合物收集在收集管中 . 固相萃取與色層分離、萃取色層的區(qū)別 固相萃取 色層分離 萃取色層 兩相 固 /液 固 /液 液 /液 (水 ) 固定相制備 鍵合、化學修飾 鍵合、化學修飾 液體附于固體載體 固定相種類 較多 很多 較少 分離機理 吸附、分配、交換等 吸附、分配、交換等 分配 柱尺寸 小， (3－ 5)cm X 1cm 大， (20－ 100)cm X 5cm 中等 主要用途 樣品前處理 分離、純化、工業(yè)制備 無機分離 殘余硅醇基 ? 非極性固定相通常采用封尾技術(shù)將硅膠表面的殘余硅醇基屏閉，但極性或離子交換固定相通常不封尾。 固相萃取裝置 ? 簡易固相 萃取儀 ： 萃取小柱 真空萃取箱 蠕動泵 SPE真空裝置 能同時處理多個樣品 ,利用其獨特的轉(zhuǎn)動上蓋 ,可方便地在 SPE各步驟間任意切換 ,以收取所需要的組分。 吸附固相萃取 ? 以吸附劑（氧化鋁、硅膠、石墨碳材料、大孔吸附樹脂等）作固定相； ? 除石墨碳材料和大孔吸附樹脂也可以萃取非極性物質(zhì)外，吸附固相萃取主要用于極性化合物的萃取。 離子交換固相萃取 ? 采用離子交換劑固定相，用來萃取有機和無機離子性化合物，如有機堿、氨基酸、核酸堿、離子性表面活性劑等。 ? 固定相主要是以硅膠為載體的二醇基、丙氨基小柱。 正相固相萃取 ? 采用極性固定相，可從非極性溶劑樣品中萃取有機酸、碳水化合物和弱陰離子等極性物質(zhì)。 ? 固定相選擇原則也與 LC相同，主要依據(jù)被測物和基體物質(zhì)的性質(zhì)，被測物極性與固定相極性越相似，則被測物在固定相中的保留就越強 。 固相萃取的主要萃取模式 ? 與 LC分離模式相同，有正相固相萃取、反相固相萃取、吸附固相萃取和離子交換固相萃取 。 ? 同液相色譜中分離柱的原理一樣，固相萃取也是基于待測組分與樣品基體在固定相上吸附和分配性質(zhì)的不同來進行分離的。 ? 操作簡單、快速； ? 減少乳化現(xiàn)象； ? 可處理大量樣品； ? 不需要使用大量有機溶劑； ? 應用樣品對象十分廣泛。 ? 往往同時使被測物得到富集。 ? 主要用于樣品前處理。 CO2， 500C， 100kg/cm2，萃取 30min，萃取率 94％。 ? 溶劑萃取的問題： 繁瑣費時。 實例 2：從生物體中提取有機錫 ? 有機錫的用途： 船體涂料、漁網(wǎng)防污劑、殺蟲劑、塑料添加劑、殺菌劑。 ? SFE除咖啡因 ：浸泡過的咖啡豆直接置于萃取容器中，連續(xù)（循環(huán)）用超臨界 CO2萃?。?T＝ 70－ 900C； p＝ 16－20MPa） 10h，咖啡因用水吸收，蒸餾可回收咖啡因。 ? 以往工業(yè)上除咖啡豆中咖啡因采用二氯乙烷萃取。 ? 選擇性較好，易于得到純品。 ? 臨界壓力應較低（降低壓縮動力）。 ? 臨界溫度應接近室溫或操作溫度，不能太高，也不能太低。 SFE的 缺點 ： 萃取率較低，選擇性不夠高。 ? 在較低的溫度和不太高的壓力下操作，特別適合天然產(chǎn)物的分離。 ? 20世紀 80－ 90年代成為熱門學科。 ? 20世紀 50年代，美國將 SFE用于工業(yè)分離。 超臨界流體萃取 (Supercrtical Fluid Extraction, SFE) ? 以超臨界流體作流動相，直接從固體（粉末）或液體樣品中萃取目標物質(zhì)（有機物）。 ? 易于進行工業(yè)放大，處理量可以較大。 破碎的細胞 ? PEG/磷酸鹽 下相： 上相產(chǎn)物： 目標蛋白質(zhì) 細胞碎片、雜蛋 ＋鹽 白、核酸、多糖 形成 PEG/磷酸鹽體系 下相：核酸、 上相產(chǎn)物： 目標酶 雜蛋白、多糖 ＋鹽 形成 PEG/磷酸鹽體系 下相：目標酶 上相： PEG，蛋白質(zhì) 雙水相體系的特點： ? 體系中水含量達 70－ 90％，組成雙水相的高聚物及某些無機鹽不會導致生物物質(zhì)失活，有時還有保護作用。 2. 富 PEG上相中加鹽后形成新雙水相，目標酶進入上相。 影響分配的因素 ? 聚合物的組成和濃度 ? pH值：影響兩相的電位差。 ? 電位差作用 帶電大分子（粒子）在兩相中分配時，會在兩相產(chǎn)生電位 — Donnan效應 。 反萃取，只有細胞色素 C進入水相。 ? 仍留在有機相中的溶菌酶再用 pH=,[KCl]=萃取。 ? pH=9,[KCl]=，核糖核酸酶不溶于膠團，留在水相。將含水的反向微膠團的有機溶液與蛋白質(zhì)固體粉末一起攪拌。此過程較快，操作也很簡單。此過程較慢，最終得到的含蛋白質(zhì)有機相是穩(wěn)定的。 pH值對蛋白質(zhì)溶解度的影響 離子強度增加，減小了蛋白質(zhì)的表面電荷與微膠團內(nèi)表面電荷的相互作用，從而降低蛋白質(zhì)在膠團中的溶解度。 ? 當 pHpI時，蛋白質(zhì)分子和表面活性劑內(nèi)表面都荷負電，相互排斥，蛋白質(zhì)難溶于膠團中。表面活性劑 AOT能迅速溶于有機溶劑，也能溶于水而形成液晶態(tài)（非球狀）膠團。 表面活性劑的濃度非極性溶劑中水的濃度?0?3. 影響膠團萃取的主要因素 表面活性劑和溶劑種類對膠團萃取的影響