【正文】 聚丙稀乙二醇－葡萄糖 表面活性劑－表面活性劑－水： 生物物質(zhì)在雙水相體系中的分配 ? 生物樣品的復(fù)雜性 ?分配機(jī)理的復(fù)雜性 包括可溶物（蛋白質(zhì)、核酸）、懸浮顆粒（細(xì)胞或細(xì)胞器）； 各種物質(zhì)的大小、形狀和性質(zhì)不同； 存在形式不同（離解狀態(tài)、聚集狀態(tài)） ? 分配機(jī)理的解釋 界面張力作用 電位差作用（ Donnan效應(yīng)） ? 界面張力作用 微小粒子在液體中由于熱運(yùn)動(dòng)而隨機(jī)分布，界面張力的影響使它呈不均勻分布，并聚集在雙水相體系中具有較低能量的一相中。 ? 溶解法 ：適用于水不溶蛋白質(zhì)。 水相 pH值對(duì)膠團(tuán)萃取的影響 ? 蛋白質(zhì)為兩性分子，各種蛋白質(zhì)有確定的等電點(diǎn) (pI)，當(dāng) pHpI時(shí)，蛋白質(zhì)荷正電， AOT為陰離子表面活性劑，所形成的反向膠團(tuán)內(nèi)表面荷負(fù)電，蛋白質(zhì)分子與膠團(tuán)內(nèi)表面作用強(qiáng)，形成穩(wěn)定的含蛋白質(zhì)的微膠團(tuán)。 ? 陸九芳 p125a ? 蛋白質(zhì)親水基插入 反向微膠團(tuán)中 僅蛋白質(zhì)的親水基插入膠團(tuán)內(nèi)部的“水池”中，而其親脂基團(tuán)露在膠團(tuán)外面，與表面活性劑的疏水劑或有機(jī)溶劑的碳?xì)洳糠纸佑|。 ? 由于生物樣品一般粘度較大，過(guò)濾和超濾等也困難。 ?將樣品裝入萃取池，放到圓盤(pán)式傳送裝置上，以下操作將完全自動(dòng)進(jìn)行。 ?萃取溶劑既可以是無(wú)機(jī)酸、也可以是各種有機(jī)溶劑（包括正己烷、苯等非極性溶劑）。 ?早期使用家用 微波爐，幾分鐘就解決了傳統(tǒng)加熱萃取需要幾個(gè)小時(shí)甚至十幾個(gè)小時(shí)的問(wèn)題。 液滴微萃取 ? 液滴萃取 /進(jìn)樣方法是一種微量樣品富集進(jìn)樣技術(shù)，樣品富集機(jī)理為液液萃取。目標(biāo)物被萃取到纖維腔內(nèi)，在接收液和樣品水相之間達(dá)到分配平衡。 ? 適合萃取在水溶液中溶解度小、含有酸性或堿性官能團(tuán)的痕量目標(biāo)物。 ? 逆流萃取法 連續(xù)萃取法 ? 從燒瓶中不斷地蒸發(fā)出萃取用的溶劑，讓它冷凝下來(lái)，連續(xù)通過(guò)被萃取的溶液進(jìn)行萃取，萃取液分離后仍流回原來(lái)的燒瓶中。 冠狀化合物作為萃取劑的萃取體系 萃取過(guò)程中的基本參數(shù) ? 分配系數(shù)：溶質(zhì)在互不相溶的兩相中分配達(dá)到平衡后，其在兩種溶劑中的濃度比值為一常數(shù)，不因濃度而改變，該常數(shù)值稱(chēng)為分配系數(shù)。（ TTA: 噻吩甲酰三氟丙酮） Pu(TTA)4()＋ HNO3＋ TOPO() ? Pu(TTA)3?NO3?TOPO()＋ HTTA 協(xié)同萃取機(jī)理 — 溶劑化機(jī)理 ? 如果金屬的配位數(shù)沒(méi)有飽和，只有一部分被萃取劑 A配位，剩下的配位部分被水分子占據(jù)，當(dāng)加入中性萃取劑 S后， S取代水分子，形成 A和 S的協(xié)同萃取體系。其本質(zhì)可能是形成了三元或四元絡(luò)合物。 雙硫腙 乙酰丙酮 以離子締合物的形式被萃取 ? 帶有不同種電荷的離子，由于靜電引力，互相締合成不帶電荷的、易溶于有機(jī)溶劑的分子而被萃取。 有機(jī)共沉淀劑 ? 形成締合物的共沉淀劑：被富集的痕量離子與某種配位體形成絡(luò)離子而與帶相反電荷的有機(jī)試劑締合形成難溶鹽，而被具有相似結(jié)構(gòu)的載體 共沉淀 下來(lái)，如甲基紫，孔雀綠，品紅，亞甲基藍(lán)等。 吸附或吸留作用的共沉淀劑 ? 常用于此類(lèi)的無(wú)機(jī)共沉淀劑通常生成 非晶沉淀 ，其表面積大，與溶液中微量元素接觸機(jī)會(huì)多，吸附量也大，有利于痕量元素的共沉淀；而且非晶形沉淀的聚集速率快，可將吸附在表面的微量元素很快地包藏起來(lái)，提高了富集的效率。均相沉淀得到的晶形沉淀顆粒較粗，非晶形沉淀結(jié)構(gòu)致密，因此夾帶的共沉淀雜質(zhì)少，無(wú)需陳化，過(guò)濾、洗滌也較方便。 形成締合物的沉淀劑 和沉淀反應(yīng) ? 苦杏仁酸（又名苯羥乙酸）及其衍生物，常用來(lái)沉淀 Zr4+， Hf4+。 有機(jī)沉淀劑與有機(jī)沉淀反應(yīng) ? 形成螯合物： 8羥基喹啉、丁二酮肟、銅鐵靈和新銅鐵靈、銅試劑、苯胂酸及其衍生物、氨基酸類(lèi)、苯并三唑 ? 形成締合物：苦杏仁酸、二苦胺（六硝基二苯胺）、四苯硼酸鈉、聯(lián)苯胺 ? 形成三元絡(luò)合物：吡啶、 1， 10鄰二氮雜菲 形成螯合物的沉淀劑 和沉淀反應(yīng) ? 8羥基喹啉：可與許多二價(jià)、三價(jià)和少數(shù)四價(jià)陽(yáng)離子反應(yīng)形成羥基或氨基的絡(luò)合物，產(chǎn)生沉淀。 ? 常用的有氫氧化物和硫化物沉淀分離法 ? 常用的氫氧化物沉淀劑有： NaOH溶液，氨水加銨鹽， ZnO懸濁液等 ? 生成硫化物沉淀可使用 H2S或硫代乙酰胺，后者通過(guò)在酸性或堿性溶液中加熱煮沸發(fā)生分解反應(yīng)而生成沉淀劑 H2S或 S2 有機(jī)沉淀劑分離法 ? 無(wú)機(jī)沉淀劑雖然可以沉淀分離多種離子，但選擇性較差，靈敏度也不夠高，有機(jī)沉淀劑的出現(xiàn)很好地克服了這些問(wèn)題。 形成螯合物的沉淀劑 和沉淀反應(yīng) ? 銅試劑：即二乙基胺二硫代甲酸鈉，簡(jiǎn)稱(chēng) DDTC。 形成三元絡(luò)合物的沉淀劑 和沉淀反應(yīng) ? 吡啶：在 SCN存在下可與 Cd2+， Co2+，Mn2+， Cu2+， Ni2+， Zn2+等生成三元絡(luò)合物沉淀。 共沉淀分離法 ? 共沉淀現(xiàn)象是由于沉淀的表面吸附作用、混晶或固溶體的形成、吸留或包藏等原因引起的。如溶液中極微量的金、鉑、鈀等貴金屬離子，可以入少量 Na2TeO3，再加入還原劑如 H2SO3或SnCl2等。 萃取分離 ? 主要討論金屬離子的液液萃取，即使溶液與另一種不相混溶的溶劑密切接觸，以使溶液中的某種或某幾種溶質(zhì)進(jìn)入溶劑相中，從而與溶液中的其它干擾組分分離。 酸性磷類(lèi)萃取劑萃取 共萃取 ? 若某一元素（通常為微量元素）單獨(dú)存在時(shí)不被萃取，或很少被萃取，但當(dāng)另一元素（通常為常量元素）存在而被萃取時(shí)，難萃取元素的萃取效率將大為增加這一現(xiàn)象稱(chēng)為共萃取。即： ? 有協(xié)同效應(yīng)： D協(xié)同 ?D加和 ＝ D1＋ D2＋ … ? 無(wú)協(xié)同效應(yīng)： D協(xié)同 ?D加和 ? 反協(xié)同效應(yīng)： D協(xié)同 ?D加和 ? 協(xié)萃系數(shù) R： R=D協(xié)同 /D加和 協(xié)萃系數(shù) 二 (2乙基己基）磷酸（ P204）與中性含磷萃取劑協(xié)萃體系萃取 UO22+的協(xié)萃系數(shù) 含磷萃取劑（ B） TBP BDBP TOPO 單獨(dú)含磷萃取劑 DB 單獨(dú) P204萃取劑 DP204 135 135 135 混合萃取劑 D協(xié)同 470 3500 3500 協(xié)萃系數(shù) R TBP=磷酸三丁酯； BDBP=二丁基膦酸丁酯； TOPO=三辛基氧膦 協(xié)同萃取機(jī)理 ? 生成了 更為穩(wěn)定 的含有兩種以上配位體的可萃物； ? 生成的配合物 疏水性更強(qiáng) ，更易進(jìn)入有機(jī)相中。冠醚形似皇冠，而穴醚為具有三維結(jié)構(gòu)的雙環(huán)穴狀化合物。分離效果的好壞可用分離系數(shù) b來(lái) 表示： b=DA/DB 萃取條件的選擇： 形成螯合物的萃取體系 HR??H++R HR Mn+ + nR ?? MRn HR MRn 水相 油相 KDR KDX Ki Kf D = (KDX Kf Kin / KDRn) ? ([HR]o / [H+])n 萃取條件的選擇： 形成螯合物的萃取體系 ? 萃取劑的選擇：對(duì)于形成螯合物的萃取體系，應(yīng)選擇酸性較強(qiáng)的，較易電離和較易溶于水的萃取劑；萃取劑與被萃取離子螯合后所形成的螯合物越穩(wěn)定越好，越易溶于有機(jī)溶劑越好；這些因素通常要綜合考慮。 ? 1996年在液 液萃取基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，結(jié)合了液 液萃取和固相微萃取的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)，纖維的多孔性增加了溶劑與樣品接觸的表面積，從而提高萃取效率。 三相 LPME的萃取裝置 接受液在中空纖維管中循環(huán)流動(dòng)，以加快纖維壁中萃取劑與接受液之間的傳質(zhì)速度。 ?微波指波長(zhǎng)在 1mm至 1m范圍（ 300－ 300000 MHz）的電磁波。 密閉型微波萃取裝置 萃取罐 ?可控溫控壓?；w影響小，相同萃取條件可以用于不同基體的樣品；萃取效率高；萃取選擇性好；自動(dòng)化程度高。 ? 反向微膠團(tuán) ： 與正相微膠團(tuán)相反， 當(dāng)向非極性溶劑中加 入表面活性劑達(dá)到一 定濃度時(shí)，會(huì)形成憎 水非極性尾朝外（向 溶劑），而極性頭（ 親水基）朝內(nèi)的膠團(tuán)。 ? 反向微膠團(tuán)對(duì)生物物質(zhì)的溶解 反向微膠團(tuán)中有一個(gè)極性核心，它包括了表面活性劑的極性頭組成的內(nèi)表面，平衡離子和水。 表面活性劑的濃度非極性溶劑中水的濃度?0?3. 影響膠團(tuán)萃取的主要因素 表面活性劑和溶劑種類(lèi)對(duì)膠團(tuán)萃取的影響 ? 表面活性劑多采用 AOT（琥珀酸二 (2乙基己基 )酯磺酸鈉） ? 陰離子表面活性劑 ? AOT作為反向微膠團(tuán)的表面活性劑的優(yōu)點(diǎn)： 所形成的膠團(tuán)的含水率高（ ?0為 50－ 60），比季銨鹽高一個(gè)數(shù)量級(jí)以上； AOT形成反向微膠團(tuán)時(shí)，不需要助表面活性劑。此過(guò)程較慢，最終得到的含蛋白質(zhì)有機(jī)相是穩(wěn)定的。 ? 仍留在有機(jī)相中的溶菌酶再用 pH=,[KCl]=萃取。 2. 富 PEG上相中加鹽后形成新雙水相，目標(biāo)酶進(jìn)入上相。 ? 20世紀(jì) 50年代，美國(guó)將 SFE用于工業(yè)分離。 ? 臨界溫度應(yīng)接近室溫或操作溫度，不能太高，也不能太低。 ? SFE除咖啡因 ：浸泡過(guò)的咖啡豆直接置于萃取容器中，連續(xù)（循環(huán)）用超臨界 CO2萃取（ T＝ 70－ 900C； p＝ 16－20MPa） 10h，咖啡因用水吸收，蒸餾可回收咖啡因。 ? 主要用于樣品前處理。 固相萃取的主要萃取模式 ? 與 LC分離模式相同，有正相固相萃取、反相固相萃取、吸附固相萃取和離子交換固相萃取 。 離子交換固相萃取 ? 采用離子交換劑固定相，用來(lái)萃取有機(jī)和無(wú)機(jī)離子性化合物，如有機(jī)堿、氨基酸、核酸堿、離子性表面活性劑等。即使采用最嚴(yán)格的封尾方法，也只能將鍵合相形成后剩余的 70%的硅醇基團(tuán)封住。推薦采用緩沖溶液作為二級(jí)調(diào)節(jié)溶劑是因?yàn)樗?pH值是波動(dòng)的，而且沒(méi)有緩沖能力。疏水鍵合能（偶極 偶極，偶極 誘導(dǎo)偶極，色散相互作用）： 1～ 10kcal/mol；極性基團(tuán)間的氫鍵： 5～ 10 kcal/mol，這種類(lèi)型的相互作用在硅膠表面發(fā)生的機(jī)會(huì)較多。如果不進(jìn)行這一步，就會(huì)減少待測(cè)組分的保留，影響回收率，而且有可能出現(xiàn)干擾峰。 ? 固相萃取方法 (使用 SepPak C18硅膠載體柱 ) ① 活化 : 往柱中依次加入 1 0ｍｌ乙酸乙酯、甲醇和 。 ? 通過(guò)石英纖維頭表面的高分子涂層對(duì)樣品中的有機(jī)分子進(jìn)行萃取和預(yù)富集，使樣品預(yù)處理過(guò)程大為簡(jiǎn)化，提高了分析速度及靈敏度。 ? 涂層方便易得，種類(lèi)多樣，易于自動(dòng)化。 ? 在一根長(zhǎng) 20cm，內(nèi)徑 mm的 DB1聚二甲基硅氧烷涂層毛細(xì)管中插入一根同樣長(zhǎng)度的內(nèi)徑為 銹鋼絲構(gòu)成萃取器件，與 μHPLC聯(lián)用測(cè)定了