【正文】 溶劑微膠囊萃取技術(shù)的不成熟之處 ? 溶劑特有的性質(zhì)（如腐蝕性、對(duì)高分子包覆材料的溶脹性等）使得溶劑的包覆技術(shù)比傳統(tǒng)的微膠囊化技術(shù)（主要應(yīng)用于制藥、生物酶固定化等領(lǐng)域）具有更大的難度； ? 溶劑微膠囊制備復(fù)雜，壁材的選擇還難以滿足實(shí)際需要，耐有機(jī)溶劑性能好的壁材較少，對(duì)于一些含有活性基團(tuán)的萃取劑的微膠囊的制備方法也還比較少； ? 雖然溶劑微膠囊的穩(wěn)定性比浸漬樹(shù)酯要好，但對(duì)于實(shí)際應(yīng)用而言，其穩(wěn)定性還需進(jìn)一步提高； ? 溶劑微膠囊萃取的應(yīng)用領(lǐng)域和萃取對(duì)象物質(zhì)也還有待進(jìn)一步拓寬。 溶劑微膠囊萃取的優(yōu)點(diǎn) ? 微膠囊中萃取劑 （ 溶劑 ） 的包覆量遠(yuǎn)高于萃淋樹(shù)酯 ， 因此其萃取容量高 。 單凝聚僅用一種聚合物材料進(jìn)行凝聚；復(fù)凝聚用兩種以上帶相反電荷的聚合物材料進(jìn)行凝聚 。 溶劑微膠囊的制備 ? 溶劑分散和溶劑包覆兩個(gè)步驟 。 ? 解決辦法：發(fā)展溶劑固定化技術(shù)（浸漬樹(shù)酯、支撐液膜萃?。?。 ? 相對(duì)于開(kāi)管式 intube SPME技術(shù)，由于增大了萃取接觸面，萃取率明顯提高。用這種結(jié)構(gòu)可以獲得更有效的萃取。分析柱 (15cm ，填充 3181。用注射器吸入樣品，當(dāng)樣品中待測(cè)組份分配到毛細(xì)管內(nèi)壁固定相上時(shí)，將閥切換至采樣位置，以適當(dāng)溶劑解吸 ,將解吸溶液轉(zhuǎn)移到樣品管中，再切至進(jìn)樣位置。 ? Saito等發(fā)展了 SPME與 μHPLC的聯(lián)用接口。 ? SPME是基于固相與樣品之間的平衡而建立起來(lái)的集進(jìn)樣、萃取、濃縮功能于一體的技術(shù)。 ? ④ 紫杉醇洗脫 :在淋洗好的柱子中加入 10ml含 80%甲醇的乙酸銨 ,收集洗脫液 ,減壓蒸干 .紫杉醇的質(zhì)量控制可用ＨＰＬＣ分析。簡(jiǎn)化紫杉醇的提純工藝 ,降低成本 ,是紫杉醇走入市場(chǎng)的一個(gè)技術(shù)關(guān)鍵。 實(shí)驗(yàn)過(guò)程 : ? SPE柱（ ODS柱）先后用 5ml甲醇和 5ml水預(yù)處理； ? 100μ L血清樣品中加入 4ml ； ? 樣品通過(guò)柱子后 ,用 20mL水沖洗； ? 再用 2mL甲醇將膽汁酸洗脫； ? 在 45℃ 下用 N2將洗脫液吹干 ,以丙酮定容至 1mL,衍生化； ? 取 20μ L樣品做 HPLC分析（ ODS柱）。 用有機(jī)溶劑（如甲醇）潤(rùn)濕柱子的目的 ? 消除萃取柱中可能會(huì)干擾待測(cè)組分的有機(jī)雜質(zhì)； ? 打開(kāi)碳鏈，增加萃取柱與待測(cè)組分相互作用的表面積，也就是通常所說(shuō)的活化。與硅膠載體的固定相相反，有機(jī)聚合物固定相沒(méi)有由硅烷醇或痕量金屬引起的附加效應(yīng)干擾待測(cè)組分在固定相表面的吸附。 ? 各種鍵合力的能量相差較大。最后用含有%醋酸銨的甲醇溶液將舒喘寧從萃取柱上洗脫下來(lái)，作為后續(xù)分析的樣品。 殘余硅醇基的利用 ? 使用沒(méi)有封尾的固定相和 pH≥ 4的緩沖溶液以保證殘余硅醇基離子化。 ? 靜電相互作用比疏水相互作用更強(qiáng)，因此，如果存在混合保留機(jī)理，必須采取措施減小或擴(kuò)大殘留硅醇基的影響。 ? 封尾程度非常重要，因?yàn)闅埩艄璐蓟鶎?duì)化合物的保留和洗脫起著不可忽視的作用。 ? 吸附固相萃取在樣品前處理中的應(yīng)用也相當(dāng)廣泛。 反相固相萃取 ? 采用非極性或弱極性固定相，適用于萃取從非極性至中等極性的化合物； ? 應(yīng)用對(duì)象最廣泛，是樣品前處理中使用最多的一種固相萃取模式； ? 被萃取物與固定相間主要是基于范德華力和色散力的疏水相互作用； ? 使用的固定相主要是在硅膠載體表面鍵合了疏水性烷烴，如 18烷、辛烷、二甲基丁烷。 ? 固相萃取所用的固定相也與 LC常用的固定相相同，只是粒度稍大一些（約 3050?m）。 固相萃取的目的與要求 ? 待測(cè)組分在固定相上沒(méi)有保留 — 從樣品中除去大量基體； ? 待測(cè)組分牢固地吸附在固定相上 — 從復(fù)雜基體中將待測(cè)組分分離富集出來(lái)； ? 與液相色譜不同的是，固相萃取并不需要特別好的峰形和相當(dāng)短的分析時(shí)間。 固相萃取的特點(diǎn)（與溶劑萃取比） 是目前生物、醫(yī)藥、環(huán)境、食品等領(lǐng)域備受歡迎的樣品前處理（分離和富集）技術(shù)。 固相萃取 固相萃取 ： ? 以固體吸附劑作固定相，被測(cè)物或干擾物吸附到固定相中，使被測(cè)物與樣品基體或干擾組分得以分離。 ? 有機(jī)錫的污染： 海洋生物（魚(yú)）、環(huán)境等。缺點(diǎn)是殘留二氯乙烷影響咖啡品質(zhì)；而且二氯乙烷同時(shí)將部分有用香味物質(zhì)（芳香化合物）帶走。 ? 對(duì)被萃取組分的溶解能力高，以降低萃取劑的消耗。 超臨界流體的選擇原則： ? 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，對(duì)設(shè)備無(wú)腐蝕。 超臨界流體與氣體、液體傳遞性能的比較 氣體 超臨界流體 液體 (常溫常壓 ) （ Tc， Pc） (常溫常壓 ) 密度 g/cm3 － 粘度 105kg/() 13 13 20300 自擴(kuò)散系數(shù) 104 m2/s ?103 ()?105 SFE的 優(yōu)點(diǎn) ： ? 萃取劑在常溫常壓下為氣體，萃取后可以方便地與萃取組分分離。 ? 100年前人們就知道超臨界流體可以溶解很多物質(zhì)。 ? 可直接從含有菌體的發(fā)酵液和培養(yǎng)液中提取所需蛋白質(zhì)，還能不經(jīng)破碎直接提取細(xì)胞內(nèi)酶。 ? 鹽的種類和濃度 ? 陸九芳 p137－ 330 雙水相萃取體系的應(yīng)用 ? 酶、核酸、生長(zhǎng)激素、病毒等生物物質(zhì)的分離純化 ? 萃取流程（右圖） 聚乙二醇（ PEG） 磷酸鹽體系萃取酶 1. 目標(biāo)酶進(jìn)入富 PEG上相 。 反萃取 雙水相萃取 ? 1896年 Beijerinck發(fā)現(xiàn) ： （明膠＋瓊脂）或 （明膠＋可溶性淀粉） 混濁不透明溶液 兩個(gè)有界面的液相 兩相的主成分都是水 上相 富含明膠 下相 富含瓊脂 （或淀粉） 葡聚糖 甲基纖維素雙水相體系 ? 等體積的 %葡聚糖與 %的甲基纖維素的水溶液形成的雙水相體系 上相 ： %葡聚糖 %甲基纖維素 %水 下相 ： %葡聚糖 %甲基纖維素 %水 幾類雙水相體系 聚合物－聚合物－水： 聚丙稀乙二醇－甲氧基聚乙二醇 聚乙二醇－聚乙烯醇 高分子電解質(zhì)－聚合物－水： 硫酸葡聚糖鈉鹽－聚丙稀乙二醇 羧甲基葡聚糖鈉鹽－甲基纖維素 高分子電解質(zhì)－高分子電解質(zhì)－水： 硫酸葡聚糖鈉鹽－羧甲基纖維素鈉鹽 硫酸葡聚糖鈉鹽－羧甲基葡聚糖鈉鹽 聚合物－低分子量組分－水： 聚丙稀乙二醇－磷酸鉀 甲氧基聚乙二醇－磷酸鉀 聚丙稀乙二醇－葡萄糖 表面活性劑－表面活性劑－水： 生物物質(zhì)在雙水相體系中的分配 ? 生物樣品的復(fù)雜性 ?分配機(jī)理的復(fù)雜性 包括可溶物（蛋白質(zhì)、核酸）、懸浮顆粒（細(xì)胞或細(xì)胞器）； 各種物質(zhì)的大小、形狀和性質(zhì)不同； 存在形式不同（離解狀態(tài)、聚集狀態(tài)） ? 分配機(jī)理的解釋 界面張力作用 電位差作用（ Donnan效應(yīng)） ? 界面張力作用 微小粒子在液體中由于熱運(yùn)動(dòng)而隨機(jī)分布，界面張力的影響使它呈不均勻分布，并聚集在雙水相體系中具有較低能量的一相中。 ? 進(jìn)入有機(jī)相膠團(tuán)中的細(xì)胞色素 C和溶菌酶用 pH=9,[KCl]=的水溶液反萃取，只有細(xì)胞色素 C進(jìn)入水相。 ? 溶解法 ：適用于水不溶蛋白質(zhì)。 ? 陸九芳 p127－ 320 離子強(qiáng)度對(duì)膠團(tuán)萃取的影響 4. 膠團(tuán)萃取分離過(guò)程 制備含蛋白質(zhì)的反向微膠團(tuán)的三種方法 ? 相轉(zhuǎn)移法 ：將含蛋白質(zhì)的水相和含表面活性劑的有機(jī)溶劑相接觸，在緩慢攪拌下，部分蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)入有機(jī)相。 水相 pH值對(duì)膠團(tuán)萃取的影響 ? 蛋白質(zhì)為兩性分子，各種蛋白質(zhì)有確定的等電點(diǎn) (pI)，當(dāng) pHpI時(shí)，蛋白質(zhì)荷正電， AOT為陰離子表面活性劑，所形成的反向膠團(tuán)內(nèi)表面荷負(fù)電，蛋白質(zhì)分子與膠團(tuán)內(nèi)表面作用強(qiáng)，形成穩(wěn)定的含蛋白質(zhì)的微膠團(tuán)。 ? 蛋白質(zhì)表面的電荷與微膠團(tuán)內(nèi)表面的電荷之間的靜電作用對(duì)蛋白質(zhì)的溶解起重要作用。 ? 陸九芳 p125a ? 蛋白質(zhì)親水基插入 反向微膠團(tuán)中 僅蛋白質(zhì)的親水基插入膠團(tuán)內(nèi)部的“水池”中，而其親脂基團(tuán)露在膠團(tuán)外面，與表面活性劑的疏水劑或有機(jī)溶劑的碳?xì)洳糠纸佑|。 ? 對(duì)生物物質(zhì)萃取所用溶劑的要求 能溶解蛋白質(zhì)并能與水分相，不破壞蛋白質(zhì)生物功能。 ? 由于生物樣品一般粘度較大，過(guò)濾和超濾等也困難。 ? 正向微膠團(tuán) ：在水溶液中加入表面活性劑達(dá)到一定濃度時(shí)，會(huì)形成表面活性劑聚集體（膠團(tuán)），在這種膠團(tuán)中，表面活性劑的極性頭朝外（向水），而非極性尾朝內(nèi)。 ?將樣品裝入萃取池，放到圓盤(pán)式傳送裝置上，以下操作將完全自動(dòng)進(jìn)行。在較高溫度（ 50?200OC）和較高壓力（ 10?20MPa）下用溶劑萃取固體或半固體樣品； ?與索氏萃取、微波輔助萃取、超臨界流體萃取等固體樣品萃取技術(shù)相比， ASE使用的有機(jī)溶劑少，萃取 10g樣品僅需15mL溶劑；萃取速度快，完成一個(gè)萃取操作全過(guò)程只需 15分鐘。 ?萃取溶劑既可以是無(wú)機(jī)酸、也可以是各種有機(jī)溶劑（包括正己烷、苯等非極性溶劑）。 ?非熱生物效應(yīng)：生物樣品中的極性水分子在微波場(chǎng)中的強(qiáng)烈極性振蕩，導(dǎo)致細(xì)胞分子間氫鍵松弛，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破裂，使萃取更快、更完全。 ?早期使用家用 微波爐，幾分鐘就解決了傳統(tǒng)加熱萃取需要幾個(gè)小時(shí)甚至十