紫外可見吸光光度法及分子熒光分析法(參考版)
2025-01-20 13:06本頁面
【正文】 測定比色液時，可將所測得的吸光度乘以各該比值 比色皿的校正 46 721或 752可見光分光光度計的使用 ?① 打開光源，黃燈亮 ,預熱 10min ?② 用波長旋鈕調 λmax（或所選工作波長） ?③ 打開 樣品池暗箱蓋，斷開光路， 調滿程（吸光度 A=∞）， 透光率 T=0 ?④ 選擇合適的 參比溶液 ，合上暗箱蓋，將參比池置于光路中， 調零（ A=0 ）， T=100%, ?⑤ 重復③和④至少兩遍 ?⑥測定標準溶液或樣品的 吸光度 A 47 波長選擇旋鈕 48 49 50 電源開關 51 比色皿 52 。 測定同一溶液時，同組比色皿之間吸光度相差應小于 ? ③ 校正比色皿的 光吸收誤差 時，應將 純凈的蒸餾水 注入皿中，以其中 吸收最小的比色皿的吸光度為零 ，測定其它比色皿的吸光度。校正無方向標志的比色皿時，要先確定方向并作好標志，以減少測定誤差。 吸光度校正 :一般常用堿性重鉻酸鉀標準溶液進行吸光度校正，測定的數值與標準吸光度表比較。 或者測定已知光譜樣品的光譜，與標準光譜對照進行校正，如譜釹濾光片。 ?使用前后都應將吸收池洗凈， 不能用手接觸窗口（光面） ?已匹配好的吸收池 不能用爐子或火焰干燥 41 光電倍增管 (Photomultiplier Tube, PMT) 1個光子可產生 106～ 107個電子 160700 nm 42 不同光區(qū)的吸光光度法儀器主要差異比較 可見光 （ 380～780nm） 紫外光 （ 200～380nm) 中紅外 （ ～ 50 ?m ) 光源 鎢燈 碘鎢燈 320～ 2500 氫燈 氘燈 180～ 375 硅碳棒 （紅外線） 吸收池 材料 玻璃 （ 350～ 3200） 石英 （ 185～4000） NaCl晶體 波長校正： 利用光源中的穩(wěn)定線光譜或有穩(wěn)定亮線的外部光源，把光束導入光路進行校正。 ?紫外光區(qū)：石英吸收池 ?可見光區(qū)：石英或玻璃吸收池 ?測定注意事項： ?參照池和吸收池應是一對經校正好的匹配吸收池。 利用光通過光柵時發(fā)生 衍射和干涉 現象而分光。 作用：將光信號轉換為電信號，并放大 光電管，光電倍增管 ，光電二極管，光導攝像管（多道分析器） 表頭、記錄儀、屏幕、數字顯示 作用：將復合光色散成單色光 光柵 玻璃， 350 ~ 2500 nm, 石英， 185 ~ 4500 nm 平面透射光柵， 反射光柵 棱鏡 37 氙燈 氘燈 鎢燈 38 單色器： 將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為 單色光的裝置。 27 參比溶液的選擇 種類 溶劑空白 :純溶劑（扣除吸收池干擾） 適用于樣品基體、共存組分和顯色劑均無色情況 試劑空白 :純溶劑 +顯色劑 +其他試劑 ,適用于樣品基體、共存組分無色， 顯色劑等均有色 樣品空白 :待測試樣溶液 ,適用于顯色劑無色，共存組分、樣品基體有色 空白溶液 :顯色劑 + 待測試樣 + 待測組分的掩蔽劑， 適用于顯色劑、樣品基體、共存組分均有色 28 8. 2 比色法和分光光度法 1 比色法 目視 比色法 光電 比色法 2 分光光度法 3 分光光度計的校正 4 722型分光光度計 29 比色法和分光光度法特點 ?靈敏度高： 測定下限可達 103～ 106 mol求摩爾吸收系數。 104～ 1
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