紫外可見吸光光度法及分子熒光分析法(更新版)
【正文】 收光譜 15 吸收光譜法 定性分析與定量分析的基礎(chǔ) 定性 分析基礎(chǔ) 定量 分析基礎(chǔ) 物質(zhì)對光的選擇吸收 A B A ? )(max A? )(max B?在一定的實驗條件下，物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)的濃度成正比。求摩爾吸收系數(shù)。 ?紫外光區(qū)：石英吸收池 ?可見光區(qū)：石英或玻璃吸收池 ?測定注意事項： ?參照池和吸收池應(yīng)是一對經(jīng)校正好的匹配吸收池。校正無方向標(biāo)志的比色皿時，要先確定方向并作好標(biāo)志，以減少測定誤差。 測定同一溶液時，同組比色皿之間吸光度相差應(yīng)小于 ? ③ 校正比色皿的 光吸收誤差 時，應(yīng)將 純凈的蒸餾水 注入皿中，以其中 吸收最小的比色皿的吸光度為零 ，測定其它比色皿的吸光度。 ?使用前后都應(yīng)將吸收池洗凈， 不能用手接觸窗口（光面） ?已匹配好的吸收池 不能用爐子或火焰干燥 41 光電倍增管 (Photomultiplier Tube, PMT) 1個光子可產(chǎn)生 106～ 107個電子 160700 nm 42 不同光區(qū)的吸光光度法儀器主要差異比較 可見光 （ 380～780nm） 紫外光 （ 200～380nm) 中紅外 （ ～ 50 ?m ) 光源 鎢燈 碘鎢燈 320～ 2500 氫燈 氘燈 180～ 375 硅碳棒 （紅外線） 吸收池 材料 玻璃 （ 350～ 3200） 石英 （ 185～4000） NaCl晶體 波長校正： 利用光源中的穩(wěn)定線光譜或有穩(wěn)定亮線的外部光源，把光束導(dǎo)入光路進行校正。 27 參比溶液的選擇 種類 溶劑空白 :純?nèi)軇鄢粘馗蓴_） 適用于樣品基體、共存組分和顯色劑均無色情況 試劑空白 :純?nèi)軇?+顯色劑 +其他試劑 ,適用于樣品基體、共存組分無色， 顯色劑等均有色 樣品空白 :待測試樣溶液 ,適用于顯色劑無色，共存組分、樣品基體有色 空白溶液 :顯色劑 + 待測試樣 + 待測組分的掩蔽劑， 適用于顯色劑、樣品基體、共存組分均有色 28 8. 2 比色法和分光光度法 1 比色法 目視 比色法 光電 比色法 2 分光光度法 3 分光光度計的校正 4 722型分光光度計 29 比色法和分光光度法特點 ?靈敏度高： 測定下限可達 103～ 106 mol mol –1 在當(dāng)時需要 簡便快速的測定方法 。 2 Water Analytical Chemistry 吸光光譜 比色法和分光光度法 顯色反應(yīng)及其影響因素 吸收光譜法定量的基本方法 應(yīng)用實例 3 吸收光譜法： 基于被測物質(zhì)的 分子（或原子） 對 光 具有 選擇吸收 的特性而建立的分析方法。 cm 1 CLA ??a C LA ?aM??相互關(guān)系： M為摩爾質(zhì)量 ? 越大 , 靈敏度越高 : ? 104 為低靈敏度 。 入射狹縫 準(zhǔn)直透鏡 棱鏡 聚焦透鏡 出射狹縫 白光 λ 1 λ 2 800 600 500 400 棱鏡： 依據(jù) 不同波長光通過棱鏡時折射率不同 玻璃 350～ 3200nm, 石英 185～ 4000 nm 39 光柵： 在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的 等寬度等間距 條痕 (600、 1200、 2400條 /mm )。一些紫外 可見光分光光度計具有自動校正程
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