理學(xué)]分子熒光光度法(參考版)
2025-01-20 13:20本頁(yè)面
【正文】 2. 酶免疫分析法（ EIA） E Ab + Ag E Ab Ag 酶標(biāo) 抗體 抗原（藥物） 酶標(biāo) 抗體 抗原 結(jié)合型 常用酶： 辣根過(guò)氧化物酶 （ POD） 葡萄糖氧化酶 （ GOD） 。 抗原或抗體 標(biāo)記 + 酶或熒光化合物 熒光 在抗原上或抗體上 標(biāo)記活性物質(zhì) （酶或熒光化合物）， 通過(guò)測(cè)定熒光來(lái)確定標(biāo)記抗原抗體結(jié)合率進(jìn)行藥物定量的方法。 三、制備熒光衍生物測(cè)定法 1. 與熒光試劑反應(yīng)生成熒光衍生物 2. 胺熒 — 與含伯胺、仲胺或潛在胺基的 藥物作用產(chǎn)生熒光 3. 與單酰氯反應(yīng)生成熒光衍生物 4. 與鄰苯二甲醛反應(yīng)生成熒光衍生物 5. 與熒光染料反應(yīng)生成熒光離子對(duì) 四、淬滅熒光測(cè)定法 藥物與熒光試劑反應(yīng)，生成的產(chǎn)物能淬滅熒光試劑的熒光，與試劑空白比較降低了熒光強(qiáng)度，測(cè)定樣品液熒光強(qiáng)度減弱的定量方法。 5. 光化學(xué)反應(yīng) 藥物發(fā)生光催化反應(yīng)，形成具有熒光的分子。 基于藥物本身受特定波長(zhǎng)光激發(fā)后能產(chǎn)生熒光。 利用苯可從尿或組織液中萃取出來(lái)， 即可進(jìn)行檢測(cè)。 一、直接熒光測(cè)定法 色胺的含量是色胺酸新陳代謝的一個(gè)標(biāo)志。 熒光法在臨床檢驗(yàn)、藥物分析和生物化學(xué)上應(yīng)用在不斷擴(kuò)大。 選最大激發(fā)波長(zhǎng) λex 熒光單色器 ：把激發(fā)光所發(fā)生的反射光、溶劑的散射光以及溶液雜質(zhì)所產(chǎn)生的熒光濾去，只讓樣品物質(zhì)所產(chǎn)生的熒光通過(guò)而照射到檢測(cè)器上。 1. 激發(fā)光源 2. 單色器 光電熒光計(jì)常用干涉濾光片，熒光分光光度計(jì)常用光柵。 Cx 00IIIIsx sxcc????第四節(jié) 儀器與技術(shù) Fluorometer 測(cè)量熒光的儀器主要由 四個(gè)部分 組成： 激發(fā)光源 、 樣品池 、 雙單色器系統(tǒng) 、 檢測(cè)器 。 C標(biāo) Cx （ I I0） （ Ix I0） 2. 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法 （ Is – I0 ） = K 第三節(jié) 熒光定量分析 Quantatitive Analysis 一、基本原理 在稀溶液中，熒光強(qiáng)度 If 有： If = K 如： X 、 重金屬離子、 O NO 重氮化合物、 COOH、 等。 四、影響熒光的外界因素 弱酸或弱堿性化合物，溶液 pH的影響較大，需要嚴(yán)格控制。 (2) 溶劑的影響 極性 ↗ ， 熒光 ↗ 。 熒光強(qiáng)度對(duì)溫度變化敏感，溫度增加，外轉(zhuǎn)換去活的幾率增加， 熒光效率 ↘ 。 4. 取代基效應(yīng) 芳環(huán)上有 吸電子基 ，使熒光 ↘ 。如熒光素和酚酞有相似結(jié)構(gòu)，熒光素有很強(qiáng)的熒光，酚酞卻沒(méi)有。 當(dāng)激發(fā)光波長(zhǎng)為 λex 327nm時(shí)，
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