生物制藥工程課程論文(參考版)
2025-01-20 01:31本頁面
【正文】 結(jié)果發(fā)現(xiàn)LMS 既能增強體液免疫反應(yīng)，又能增強細(xì)胞免疫反應(yīng)，可以作為FMDV 核酸疫苗有效的化學(xué)佐劑。以pcDVP1 重組質(zhì)粒與1%左旋咪唑LMS 混合免疫不同遺傳背景的昆明白小鼠、Balb/C 小鼠和C57 小鼠,對照組只注射pcDVP1。［２］佐劑因該是能增強特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。但是由于大型動物細(xì)胞間隙較大，結(jié)締組織豐富，大大影響了核酸疫苗的轉(zhuǎn)染效率。［７－９］、免疫周期和免疫次數(shù)的確定核酸疫苗的接種劑量取決于能夠誘發(fā)免疫應(yīng)答反應(yīng)的最低劑量。禽流感核酸疫苗常用禽類模型。根據(jù)不同疫苗可以選擇不同動物模型。蛋白水平檢測方法有免疫沉淀法、Western雜交法、ELISA法三種，核算水平檢測方法有Northern雜交法、逆轉(zhuǎn)錄PCR法兩種。［２］可利用抗性篩選和藍(lán)白斑法共同鑒定。［２］根據(jù)所獲得的目的基因和選擇的載體不同，選擇不同的限制性內(nèi)切酶進行酶切并連接。真核表達(dá)載體有酵母菌細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞三種。常用的克隆載體有質(zhì)粒、噬菌體、黏粒三種。此處就不具體說明了。（3）從病原體亞單位成分中篩選保護性抗原及其編碼基因。將這類亞單位分子純化出來并將編碼這類分子的基因與真核基因表達(dá)質(zhì)粒重組是核酸疫苗研制的有效途徑。（1）亞單位疫苗的編碼基因作為核酸疫苗的目的基因。［３－６］二、核酸疫苗的制備方法（一）核酸疫苗研制的技術(shù)路線目的基因的選擇 選擇合適的真核質(zhì)粒表達(dá)載體 將目的基因與表達(dá)載體重組 轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞檢測響應(yīng)蛋白質(zhì)的表達(dá) 重組體的篩選 疫苗接種方式與劑量的確定 疫苗接種部位的確定 動物模型的選擇與免疫周期和免疫次數(shù)的確定 免疫佐劑的確定 免疫保護效果的檢測（二）核酸疫苗的構(gòu)建與免疫流程制備核酸疫苗要獲得的目的基因是鞭法保護性抗原的序列。［２］核酸疫苗是將編碼某種抗原蛋白的外源基因(DNA 或RNA ) 直接導(dǎo)入動物體細(xì)胞內(nèi), 并通過宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白, 誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對該抗原蛋白的免疫應(yīng)答, 以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。隨著固相多肽合成的發(fā)展，大量可引發(fā)近似天然蛋白免疫反應(yīng)的寡肽可以方便地獲得。例如，對于那些難以大量生產(chǎn)和提純的糖類，具免疫原性的有毒脂蛋白或糖蛋白的殘基，抗獨特型抗體擔(dān)負(fù)著其“內(nèi)部映像”的角色，可以作為疫苗組分使用。這樣，蛋白質(zhì)類的原是抗原決定簇就成了可有可無的，這意味著免疫模仿并不總是存在于原子水平的。選擇一個可識別特定免疫原保護性抗原決定簇的單克隆抗體Mab1；然后，制備另一個與Mbb
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