羧酸循環(huán)ppt課件(2)(參考版)
2025-01-18 08:38本頁面
【正文】 目 錄 四、采用分光光度法測定順烏頭酸生成量分析順烏頭酸酶活性 檢測體系包括 100 mmol/L 的氯化鈉 ， 30 mmol/L檸檬酸鈉 , 20 mmol/L Tris/HCl 和酶 ， 在 ml反應(yīng)終體積 ， pH 的溶液中 ， 反應(yīng)在 25℃ 進行 ， 通過檢測順烏頭酸在 240nm的吸光度反映順烏頭酸酶的酶活性 。 檢測體系包括 ml的磷酸鹽； ml 的輔酶 A； ml 的半胱氨酸 。 檢測體系包括 120 mM 的 D， L異檸檬酸三鈉 ， 30 mM 的硫酸錳 , 20 mM 的 NAD+ 及異檸檬酸脫氫酶 。 以此反映檸檬酸合酶酶活性 。 丙酮酸 + CO2 草酰乙酸 丙酮酸羧化酶 ATP ADP + Pi 目 錄 ? 乙酰 CoA是丙酮酸羧化酶的激活劑； ? TCA循環(huán)中的酶促反應(yīng)可以將草酰乙酸轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌虚g產(chǎn)物； ? 此外，可由別的途徑生成一些中間產(chǎn)物，如： 奇數(shù)碳鏈脂肪酸 琥珀酰 CoA 某些氨基酸 α酮戊二酸、草酰乙酸 目 錄 二、 TCA循環(huán)在三大營養(yǎng)物質(zhì)代謝中具有重要生理意義 （一） TCA循環(huán)是三大營養(yǎng)物質(zhì)的最終代謝通路 （二） TCA循環(huán)是糖、脂肪和氨基酸代謝聯(lián)系的樞紐 目 錄 第五節(jié) 三羧酸循環(huán)關(guān)鍵反應(yīng)的分析原理 Analytical Principles of Key Reactions of Tricarboxylic Acid Cycle 目 錄 一、采用分光光度法測定硫氫輔酶 A生成量分析檸檬酸合酶活性 反應(yīng)生成的輔酶 A和 5,539。這類反應(yīng)被稱為 添補反應(yīng)（ anaplerotic reaction） 。 ? 多種生物合成途徑也利用 TCA循環(huán)的中間產(chǎn)物作為合成反應(yīng)的起始物。這些復(fù)合體具有高效介導中間產(chǎn)物流通的功能，因此也可影響代謝的速率。 目 錄 二、 TCA循環(huán)受底物、產(chǎn)物和調(diào)節(jié)酶活性調(diào)節(jié) ? TCA循環(huán)的速度和流量主要受３種因素的調(diào)控： ?底物的供應(yīng)量 ?催化循環(huán)最初幾步反應(yīng)的酶的反饋別構(gòu)抑制 ?產(chǎn)物堆積的抑制作用 目 錄 （一） TCA循環(huán)中有３個調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)酶 ? TCA循環(huán)中催化３個不可逆反應(yīng)的酶： ?檸檬酸合酶 ?異檸檬酸脫氫酶 ?α酮戊二酸脫氫酶 目 錄 乙酰 CoA 檸檬酸 草酰乙酸 琥珀酰 CoA α酮戊二酸 異檸檬酸 蘋果酸 NADH FADH2 GTP ATP 異檸檬酸 脫氫酶 檸檬酸合酶 α酮戊二酸 脫氫酶復(fù)合體 – ATP + ADP ADP + ATP – 檸檬酸 琥珀酰 CoA NADH – 琥珀酰 CoA NADH + Ca2+ Ca2+ ① ATP、 ADP的影響 ② 產(chǎn)物堆積引起抑制 ③ 循環(huán)中后續(xù)反應(yīng)中間產(chǎn)物別位反饋抑制前面反應(yīng)中的酶 ④ 其他，如 Ca2+可激活許多酶
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