【正文】 當(dāng)通過上述波譜仍無法確定化合物的結(jié)構(gòu)時，可培養(yǎng)化合物的單晶，利用單晶 X衍射技術(shù)來獲得該物質(zhì)的骨架結(jié)構(gòu)。光學(xué)活性分子中如果還有發(fā)色團(tuán)時，則產(chǎn)生異常的旋光光譜，出現(xiàn)峰和谷，得到所謂 Cotton效應(yīng)譜線?；瘜W(xué)位移相關(guān)譜（ COSY），找出各氫之間的連接及偶合關(guān)系，確認(rèn)可能的結(jié)構(gòu)單位；7）做出異核多鍵遠(yuǎn)程相關(guān)譜（ HMBC），將可能的結(jié)構(gòu)單元相連接；8）做出空間效應(yīng)譜（ NOESY），確認(rèn)原子間的空間位置；9）對分子結(jié)構(gòu)進(jìn)行全面確認(rèn)。,NOE增益效應(yīng)實(shí)驗(yàn)分為一維 NOE差譜和二維 NOESY譜兩種。NOESY譜。COSY是指同一個偶合體系中質(zhì)子之間的偶合相關(guān)譜，它主要研究 1H同核偶合體系。2） HMBC（異核多鍵相干譜）。主要顯示的是碳?xì)渲g的一鍵相關(guān) CH，也稱作 13C1H在共軛體系中，多重鍵由于具有非定域性質(zhì)，從而使中心碳原子受到屏蔽的現(xiàn)象稱為共軛效應(yīng)。3） 共軛效應(yīng) 誘導(dǎo)效應(yīng)主要是指由于電負(fù)性取代基的吸電子作用，碳原子 p軌道上的電子云向電負(fù)性基團(tuán)方向移動，從而產(chǎn)生的去屏蔽效應(yīng)，化學(xué)位移值向低場移動。2）誘導(dǎo)效應(yīng)。 1）碳原子雜化狀態(tài)。時， CH CH向上出峰，CH2則向下出峰，由此即可將全去偶碳譜中各個碳原子的類型確定下來。 DEPT是無畸變極化轉(zhuǎn)移增益的簡稱。圖譜上碳的信號均是單峰。、 DMSO、 CD3COCD氘代吡啶等。溶劑的吸收峰對樣品信號沒有干擾。② 對樣品有足夠的溶解度。 測定樣品所用溶劑及所需要的條件 ：可用來判斷基團(tuán)之間的位置，規(guī)則 —— 當(dāng)某核同時與 n個鄰近的核偶合且偶合常數(shù)相等時，則該核的信號會裂分成 n+1個小峰。,t（三重峰） CCH2,–CHROH（ ）， ArOH游離（ ）， ArOH分子內(nèi)締合（ ）。 ③ sp雜化碳多指炔碳，有時也指疊烯碳，如丙二烯CH2=C=CH2。 1HNMR測定中通過 化學(xué)位移、譜線的積分面積以及裂分情況 （重峰數(shù)及偶合常數(shù) J）可以提供分子中 H的類型、數(shù)目及相鄰原子或基團(tuán)的信息 ，對天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)測定具有十分重要的意義。1H－ NMR13CMNR2DNMR主要分類 核磁共振是由于自旋核吸收一定能量從低能狀態(tài)躍遷到高能狀態(tài)引起的。1） 簡單裂解 —— 只涉及到一個共價鍵的斷裂，根據(jù)斷裂鍵與官能團(tuán)的相對位置，簡單裂解又可分為 α裂解、 β裂解和 γ裂解等。一般的，有機(jī)物失去電子從易到難的順序?yàn)椋弘s原子上的孤對電子＞共軛 π電子＞ π電子＞σ電子?！北硎?。 質(zhì)譜可用于確定分子量、求算分子式和提供其他結(jié)構(gòu)信息。2）定量分析 —— 符合朗伯特 比爾定律 δC=CH， ArH（面外）， CH的彎曲振動。υC=C， C=N（脂酚、芳香、 1600～ 1500比較強(qiáng)的苯環(huán)骨架振動）；1475～ 1300叁鍵和累積雙鍵的伸縮振動區(qū)， υC≡C，C≡N， C≡C≡C；1900～ 1650CH， HC=O)(CH3， CH， ArH）；3000～ 27003300～ 30003750～ 3000 特征區(qū)和指紋區(qū)細(xì)分為八個重要區(qū)段 發(fā)生在 1500～ 600cm1的吸收峰。 特征譜帶區(qū)指紋區(qū)發(fā)生在 4000～ 1500cm1的吸收峰比較稀疏，容易辨認(rèn)，且由化合物中主要官能團(tuán)產(chǎn)生的吸收。Absorption測得的吸收圖譜叫紅外光譜 IR利用紫外光譜進(jìn)行定量分析的前提是樣品必須在紫外 可見光區(qū)有明顯的吸收，其原理基于朗伯 比爾定律，即樣品在某波長處的吸收強(qiáng)度與所測樣品的濃度成正比 A=εcl例如，腎上腺素中常?；煊衅浜铣稍夏I上腺酮，此雜質(zhì)的含量過高會影響腎上腺素的療效，藥檢機(jī)關(guān)就是采用紫外光譜來檢測腎上腺酮的含量的。紫外光譜可用來測定試樣中具有紫外吸收的微量雜質(zhì)。順式和反式的區(qū)別 2）樣品中雜質(zhì)的檢查e．若波長吸收峰的強(qiáng)度 εmax在 1000020220之間，標(biāo)明分子中具有 α、 β不飽和酮或共軛烯烴。骨架類型的判斷c．若紫外圖譜上有許多峰，且某些峰甚至出現(xiàn)在可見光區(qū)，則該化合物可能具有長鏈共軛系統(tǒng)或稠環(huán)芳烴。據(jù)此可推測分子中有 C=O、 C=CO、 C=N、 C=CN等帶有孤對電子的未共軛的發(fā)色團(tuán)。a．若在 200400nm之間無吸收，則說明該分子為飽和化合物或僅帶有孤立 C=C的非共軛分子。 why？原來，隨著共軛烯鍵的增加， π電子不僅可在孤立雙鍵之間活動，而且可在不同共軛程度的多烯范圍內(nèi)活動，這也是多烯類化合物常出現(xiàn)一系列吸收峰的原因所在。共軛分子④ 與助色團(tuán)相連的不飽和鍵：當(dāng)助色團(tuán)與不飽和鍵相連時，由于雜原子，如 N、 O、 Br等上的孤對電子可與不飽和鍵中的 π電子云發(fā)生 pπ共軛，所以吸收帶紅移，同時吸收強(qiáng)度也增加。③ 具孤立發(fā)色團(tuán)分子：孤立發(fā)色團(tuán)均含有雙鍵，若再有n電子（如羰基）時，則會發(fā)生躍遷，從而產(chǎn)生一系列孤立發(fā)色團(tuán)的特征吸收帶。① 飽和碳?xì)浠衔铮哼@類化合物分子中只有 σ電子，在 1）無共軛體系的簡單分子 ③ 助色團(tuán)：指在 200nm以上沒有吸收，但與發(fā)色團(tuán)相連后可使發(fā)色團(tuán)的最大吸收峰向長波長方向移動，吸收強(qiáng)度也有所增加的基團(tuán)，一般為帶有 n電子的原子或官能團(tuán)，如 OH、 NH Cl、SH等；④ 紅移：使吸收峰向長波長方向移動的現(xiàn)象；⑤ 藍(lán)移：使吸收峰向短波長方向移動的現(xiàn)象；⑥ 增色效應(yīng)：使吸收強(qiáng)度增加的效應(yīng)；⑦ 減色效應(yīng)：使吸收強(qiáng)度減弱的效應(yīng)。② 發(fā)色團(tuán)：指能吸收光子能量并產(chǎn)生躍遷的不飽和共價鍵基團(tuán)，這些基團(tuán)一般帶有 π電子，如： C=C、 C=O、 C=N、 N=N、N=O等；εmax摩爾吸收系數(shù)； 200～ 400nm為紫外譜區(qū)， 400～ 700nm為可見譜區(qū) IV為四價原子（如 C、 Si）的數(shù)目。為三價原子（如 N、 P）的數(shù)目；I1III/2I/2r+db=IV——C8H12N C10H12N2O、 C10H12O C10H16N2四種化合物，它們的相對分子質(zhì)量雖都是 164，但精確質(zhì)量并不相同，在 HRMS上可以很容易地進(jìn)行分別。例如： 高分辨質(zhì)譜（ HRMS）可將物質(zhì)的質(zhì)量精確測定到小數(shù)點(diǎn)后第 3位。對一定的化合物來說，其 [M]、 [故由重元素組成的分子也將較輕元素組成的正常分子重 12個質(zhì)量單位。 已知組成有機(jī)化合物的主要元素（ F、 P、 I除外）均由相對峰度比一定的同位素所組成，且重元素一般比輕元素重 12個質(zhì)量單位。的分子量為 152，所以 n=456/152=3；（ 3）因?yàn)?EIMS測定其分子離子峰（ m/z）為 456， =： ： 1（ 1）從 100中扣除 C解： 進(jìn)行元素定量分析，找出各種原子的相對數(shù)目，即決定經(jīng)驗(yàn)式（實(shí)驗(yàn)式）。1.d. Xrayb.a.⑤ r+db，推測可能存在的基團(tuán)④ ③ 進(jìn)行檢識反應(yīng)，初步推斷化合物的類型② 未知化合物結(jié)構(gòu)研究 ② 測定有關(guān)理化性質(zhì)，如不同 pH值、不同溶劑中的溶解度及層析行為、灼燒實(shí)驗(yàn)、化學(xué)定性反應(yīng)等。未知化合物結(jié)構(gòu)研究 已知化合物鑒定的一般程序1）測定樣品的熔點(diǎn)，與已知品的文獻(xiàn)值對照，比較 氣相色譜 GC和 HPLC是一種很好的檢測方法，省時、靈敏度高。一般，只有當(dāng)樣品在三種展開系統(tǒng)中均呈現(xiàn)單一斑點(diǎn)時方可確認(rèn)其為單一化合物，個別情況下，甚至須采用正、反相層析兩種方式加以確認(rèn)。2. 1) 純化和干燥化合物的樣品 2) 通過文獻(xiàn)調(diào)研，理化常數(shù)和化學(xué)定性分析等初步判斷結(jié)構(gòu)類型 3) 由波譜法等確定分子式，分子量，不飽和度；進(jìn)一步推出結(jié)構(gòu)官能團(tuán)－－推出結(jié)構(gòu)片斷或骨架－推出平面結(jié)構(gòu)－確定其構(gòu)型，構(gòu)象 。 現(xiàn)已成功利用超臨界流體提取法提取到了青蒿素，延胡索乙素，薯蕷皂苷、玫瑰精油、卵磷脂等。超臨界流體萃取法是利用超臨界狀態(tài)下的流體為萃取劑，從液體或固體中萃取中藥材中的有效成分并進(jìn)行分離的方法。 分離原理 ：于載體表面先鍵合具有一般反應(yīng)性能的環(huán)氧或聯(lián)氨（稱為間隔臂），然后再連接上配基，如酶、抗原或激素。不足之處：當(dāng)洗脫溶液的 pH值和離子強(qiáng)度改變時，大部分離子交換凝膠的基質(zhì)體積會發(fā)生較大的變化，造成柱體積壓緊、流速降低。 離子交換凝膠與離子交換纖維素相同，屬于親水型離子交換劑。可分為陽離子型和陰離子型。B．用于相同電荷離子的分離。B．交換容量 —— 離子交換樹脂與溶液中的離子或離子化合物進(jìn)行交換的能力，它取決于單位質(zhì)量（或體積）的樹脂中活性基團(tuán)的數(shù)目，單位為 mmol/g（ ml）樹脂。外形大部分呈珠狀，大小以目表示。強(qiáng)堿型：含有季胺基團(tuán)，通式為 RNR′R″R″′OH中等堿型：主體結(jié)構(gòu)上既結(jié)合強(qiáng)堿性基團(tuán)又結(jié)合弱堿性基團(tuán)弱堿型：含有伯胺、仲胺或叔胺基團(tuán)，通式 RNH3OH、 RNH2ROH、 RNHR′R″OH 2）性質(zhì)根據(jù)其活性基團(tuán)解離度的不同，可進(jìn)一步分成強(qiáng)酸型、弱酸型和中等酸型三類。離子交換劑 —— 含有解離性離子交換基團(tuán)（功能基團(tuán)）的高分子物質(zhì)，由兩部分組成：一部分是大分子聚合物基質(zhì)主體結(jié)構(gòu)，另一部分是具有荷電活性的功能基團(tuán)。 2.超濾柱提純大分子物質(zhì)示意圖壓力： 104~105Pa一、根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離二、根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比 不同進(jìn)行分離 三、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離四、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離五、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離六、其他分離方法 離子交換法 1. 原理： 以離子交換劑作為固定相，以水或含水溶劑作為流動相。 ⑤ ④ 物質(zhì)不發(fā)生相變，常溫操作， 減少工序，縮短生產(chǎn)周期（不需加熱濃縮），節(jié) 超濾法的特點(diǎn)：① 最好采用抗污性較好的膜材料，如聚丙烯腈、磺化聚砜膜等。膜表面是液體和膜相互作用的界面，溶質(zhì)和膜之間有靜電相互作用或電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)，膜表面的極性、溶液的 pH值等均會影響膜的分離效率。② ① 超濾膜的選擇待分離組分的大小一般要相差 10倍以上。超濾是一種以壓力為驅(qū)動力，利用超濾膜的篩分作用，根據(jù)相對分子質(zhì)量的不同來進(jìn)行分離的膜技術(shù)。原理 透析膜有動物性膜、火棉膠膜、羊皮紙膜（硫酸紙膜）、蛋白質(zhì)膠膜、玻璃紙膜等。 透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。P后面的數(shù)字越大，越適合于大分子的分離。000，表示該種凝膠可應(yīng)用于分離蛋白質(zhì)的最高分子質(zhì)量。P。 聚丙烯酰胺凝膠是全合成的凝膠。數(shù)字表示凝膠中干膠的百分含量。Sepharose有三種型號： Sepharose除 Segavac外，都是懸浮于 103mol/lA；英國的為 Segavac；丹麥的為 Gelarose瓊脂糖的商品名因生產(chǎn)廠家不同而異。瓊脂糖是從天然瓊脂中分離制備的鏈狀多糖，結(jié)構(gòu)單元為交替排列的 D半乳糖和 3， 6脫水 L半乳糖。GOH總數(shù)沒有改變，但碳原子所占比例卻相對增加了。LH20分子中與 Sephadex Sephadex 目前市售 SephadexG10至 G200共有 8種。交聯(lián)葡聚