【正文】 的百分含量。從 2B到6B，瓊脂糖濃度逐漸增加，篩孔逐漸減小，機(jī)械強(qiáng)度依次增大。 聚丙烯酰胺凝膠是全合成的凝膠。商品名 BioGelP。P后的數(shù)字乘以 1000，表示該種凝膠可應(yīng)用于分離蛋白質(zhì)的最高分子質(zhì)量。P后面的數(shù)字越大，越適合于大分子的分離。 透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。 例如分離和純化皂甙、蛋白質(zhì)、多肽、多糖等物質(zhì)時，可用透析法以除去無機(jī)鹽、單糖、雙糖等雜質(zhì)。 透析膜有動物性膜、火棉膠膜、羊皮紙膜（硫酸紙膜）、蛋白質(zhì)膠膜、玻璃紙膜等。 透析袋1)原理超濾是一種以壓力為驅(qū)動力，利用超濾膜的篩分作用，根據(jù)相對分子質(zhì)量的不同來進(jìn)行分離的膜技術(shù)。超濾膜的孔徑通常在 1~300nm之間，選用不同孔徑的超濾膜，可以將相對分子質(zhì)量在幾百到幾十萬之間的物質(zhì)進(jìn)行分離。待分離組分的大小一般要相差 10倍以上。 2)超濾膜的選擇① 截留分子量的選擇 膜的孔徑或截留分子量的選擇雖然主要是根據(jù) 被分離物的相對分子質(zhì)量 。② 超濾膜的選擇膜表面是液體和膜相互作用的界面，溶質(zhì)和膜之間有靜電相互作用或電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)，膜表面的極性、溶液的 pH值等均會影響膜的分離效率。最好采用抗污性較好的膜材料，如聚丙烯腈、磺化聚砜膜等。 3） 超濾法的特點(diǎn)：① 選擇性高，分離效率高。 ② 減少工序，縮短生產(chǎn)周期（不需加熱濃縮），節(jié) 約原料，降低成本。 ③ 物質(zhì)不發(fā)生相變，常溫操作， 有效成分不被破 壞，能保持原配方的成分。④ 去雜質(zhì)效果好。⑤ 除菌效果好。 超濾后可得到無菌澄清的藥液，代替加熱滅菌。超濾柱提純大分子物質(zhì)示意圖壓力： 104~105Pa一、根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離二、根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比 不同進(jìn)行分離 三、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離四、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離五、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離六、其他分離方法 離子交換法 1. 原理： 以離子交換劑作為固定相，以水或含水溶劑作為流動相。當(dāng)流動相流過交換柱時，溶液中的中性分子及與離子交換劑不能發(fā)生交換的離子將通過柱子從柱底流出，而可發(fā)生交換的離子則與交換基團(tuán)進(jìn)行離子交換并吸附到柱上，然后改變條件，用適當(dāng)溶劑將其從柱上洗脫下來，即可實(shí)現(xiàn)物質(zhì)分離。 2.結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 根據(jù)離子交換劑所含功能團(tuán)的酸堿性，可分為 陽離子交換劑和陰離子交換劑 兩大類；根據(jù)交換劑的基質(zhì)性質(zhì)，可分為 離子交換樹脂、離子交換纖維素、離子交換凝膠 三種。離子交換劑 —— 含有解離性離子交換基團(tuán)（功能基團(tuán)）的高分子物質(zhì)，由兩部分組成：一部分是大分子聚合物基質(zhì)主體結(jié)構(gòu)，另一部分是具有荷電活性的功能基團(tuán)。離子交換樹脂中的主體結(jié)構(gòu) —— 樹脂是人工合成的疏水性物質(zhì)，如聚苯乙烯、聚苯酚磺酸、聚丙烯酸等。1）類型：A．陽離子交換樹脂 —— 這類交換樹脂基質(zhì)上共價(jià)結(jié)合的是 帶負(fù)電荷 的活性基團(tuán)，即反離子為陽離子，能與溶液中帶正電荷的物質(zhì)進(jìn)行交換。根據(jù)其活性基團(tuán)解離度的不同，可進(jìn)一步分成強(qiáng)酸型、弱酸型和中等酸型三類。強(qiáng)酸型： RSO3H中等酸型： RCOOH、 RPO3H2弱酸型： ROH、 RSHB、陰離子交換樹脂 —— 這類交換樹脂基質(zhì)上共價(jià)結(jié)合的是 帶正電荷 的活性基團(tuán)，即反離子為陰離子，能與溶液中帶負(fù)電荷的物質(zhì)進(jìn)行交換。強(qiáng)堿型：含有季胺基團(tuán)，通式為 RNR′R″R″′OH中等堿型：主體結(jié)構(gòu)上既結(jié)合強(qiáng)堿性基團(tuán)又結(jié)合弱堿性基團(tuán)弱堿型：含有伯胺、仲胺或叔胺基團(tuán)，通式 RNH3OH、 RNH2ROH、 RNHR′R″OH 2）性質(zhì)A．顏色與形狀 —— 黑色、黃色和乳白色等。外形大部分呈珠狀，大小以目表示。B．交換容量 —— 離子交換樹脂與溶液中的離子或離子化合物進(jìn)行交換的能力，它取決于單位質(zhì)量（或體積）的樹脂中活性基團(tuán)的數(shù)目，單位為 mmol/g（ ml）樹脂。3）應(yīng)用A．用于不同電荷離子的分離。B．用于相同電荷離子的分離。 離子交換纖維素是由纖維素作主體結(jié)構(gòu)，纖維素上的 —OH 基團(tuán)被功能團(tuán)取代而形成的，屬于親水型離子交換劑。可分為陽離子型和陰離子型。離子交換纖維素層析的原理和離子交換樹脂相似，在植物成分分析方面的區(qū)別在于：前者適用于蛋白質(zhì)、酶等活性大分子；后者適用于 aa、肽、核苷酸、生物堿、甾醇、萜類、黃酮等中小分子，以及大分子溶液中表面活性劑、尿素及兩性電解質(zhì)的去除。 離子交換凝膠與離子交換纖維素相同，屬于親水型離子交換劑。離子交換凝膠兼有分子篩和離子交換兩種功能，總交換量比離子交換纖維素大，因此，在某些情況下，分離能力超過了由單一樹脂或纖維素構(gòu)成的離子交換劑。不足之處：當(dāng)洗脫溶液的 pH值和離子強(qiáng)度改變時，大部分離子交換凝膠的基質(zhì)體積會發(fā)生較大的變化，造成柱體積壓緊、流速降低。一、根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離二、根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比 不同進(jìn)行分離 三、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離四、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離五、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離六、其他分離方法 主要用于生物大分子與固定相之間的特異親合力進(jìn)行選擇性分離及純化的方法。 分離原理 ：于載體表面先鍵合具有一般反應(yīng)性能的環(huán)氧或聯(lián)氨（稱為間隔臂），然后再連接上配基，如酶、抗原或激素。當(dāng)含有復(fù)雜混合試樣的流動相流經(jīng)這種經(jīng)固定化的配基時，其中 具有親合力 特性的生物大分子與配基相互作用而被保留，無此作用的則被洗出；隨后，改變流動相 pH值或 組成，再將被保留的大分子組分以純品的形式洗脫出來。超臨界流體萃取法是利用超臨界狀態(tài)下的流體為萃取劑，從液體或固體中萃取中藥材中的有效成分并進(jìn)行分離的方法。CO2因其本身無毒、無腐蝕、臨界條件適中（， ）的特點(diǎn)，成為超臨界流體萃取法最為常用的超臨界流體（ SF）。 現(xiàn)已成功利用超臨界流體提取法提取到了青蒿素，延胡索乙素，薯蕷皂苷、玫瑰精油、卵磷脂等。 從天然物中分離到化合物單體后，需進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，方法有波譜法，化學(xué)法，文獻(xiàn)調(diào)研等。 1) 純化和干燥化合物的樣品 2) 通過文獻(xiàn)調(diào)研，理化常數(shù)和化學(xué)定性分析等初步判斷結(jié)構(gòu)類型 3) 由波譜法等確定分子式，分子量，不飽和度；進(jìn)一步推出結(jié)構(gòu)官能團(tuán)－－推出結(jié)構(gòu)片斷或骨架－推出平面結(jié)構(gòu)－確定其構(gòu)型，構(gòu)象 。第四節(jié) 天然產(chǎn)物化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)鑒定 1. 檢查樣品有無均勻一致的 晶形 ，有無明確尖銳的 熔點(diǎn) 等；2.薄層層析 TLC（熒光、顯色劑）。一般，只有當(dāng)樣品在三種展開系統(tǒng)中均呈現(xiàn)單一斑點(diǎn)時方可確認(rèn)其為單一化合物，個別情況下，甚至須采用正、反相層析兩種方式加以確認(rèn)。3.氣相色譜 GC和 HPLC是一種很好的檢測方法，省時、靈敏度高。1.已知化合物鑒定的一般程序1）測定樣品的熔點(diǎn)，與已知品的文獻(xiàn)值對照，比較 是否一致或相近2）測定樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的混熔點(diǎn)，所測熔點(diǎn)值不下降3）將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品共薄層色譜或紙色譜，比較其 Rf值是否一致4）測定樣品的紅外光譜圖，與標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜或標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行比較，是否完全一致。2.未知化合物結(jié)構(gòu)研究 1）方法① 注意樣品在提取、分離過程中的行為。② 測定有關(guān)理化性質(zhì)，如不同 pH值、不同溶劑中的溶解度及層析行為、灼燒實(shí)驗(yàn)、化學(xué)定性反應(yīng)等。③ 結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研。2.未知化合物結(jié)構(gòu)研究 2）程序：① 進(jìn)行檢識反應(yīng)，初步推斷化合物的類型② 化合物分子式的測定 ——a 、元素分析結(jié)合分子量測定b、同位素峰法 c、高分辨質(zhì)譜 ③ 計(jì)算不飽和度 r+db，推測可能存在的基團(tuán)④ 測定有關(guān)光譜，如 IR， UV， 1HNMR， 13CNMR來確定其結(jié)構(gòu) ⑤ 結(jié)構(gòu)驗(yàn)證： a.根據(jù)初步推斷的結(jié)果與已知化合物進(jìn)行比對； b.測定 NOE譜或二維核磁共振譜； Xrayd.人工合成。1.確定分子式、計(jì)算不飽和度1）元素定量分析 + 分子量測定一般在進(jìn)行元素定量分析前應(yīng)先進(jìn)行元素定性分析，找出分子中存在哪幾種原子。進(jìn)行元素定量分析，找出各種原子的相對數(shù)目，即決定經(jīng)驗(yàn)式（實(shí)驗(yàn)式）。測定分子量，確定各種原子的確實(shí)數(shù)目，給出分子式。例如 ：從刺果甘草根中分得的某白色針晶，該物質(zhì)只含有 C、 H、 O三種元素，元素定量分析得到以下結(jié)果 C：%， H： %， EIMS測定其分子離子峰（ m/z）為 456，試確定該化合物的分子式。解： （ 1）從 100中扣除 C、 H后得 O=%；（ 2） C： H： O=%/： %/：%/=： ： 1按倍比定律，原子間的化合一定是整數(shù)的，所以最終確定為（ C10H16O） n；（ 3）因?yàn)?EIMS測定其分子離子峰（ m/z）為 456， C10H16O的分子量為 152，所以 n=456/152=3；（ 4）該化合物最終確定為 C30H48O3。 已知組成有機(jī)化合物的主要元素（ F、 P、 I除外）均由相對峰度比一定的同位素所組成，且重元素一般比輕元素重 12個質(zhì)量單位。故由重元素組成的分子也將較輕元素組成的正常分子重 12個質(zhì)量單位。所以，在大多數(shù)有機(jī)化合物的 MS圖上，除分子離子峰 [M+]外，常能看到 M+1， M+2的同位素峰。對一定的化合物來說，其 [M]、 [M+1]及[M+2]峰的相對強(qiáng)度始終為一定值（含 Cl、 Br除外） 。高分辨質(zhì)譜（ HRMS）可將物質(zhì)的質(zhì)量精確測定到小數(shù)點(diǎn)后第 3位。例如： C8H12N C10H12N2O、 C10H12O C10H16N2四種化合物，它們的相對分子質(zhì)量雖都是 164，但精確質(zhì)量并不相同，在 HRMS上可以很容易地進(jìn)行分別。C8H12N4——C10H12N2O——C10H12O2——C10H16N2——r+db=IVI/2+III/2+1I為一價(jià)原子（如 H、 D、 X）的數(shù)目；III為三價(jià)原子（如 N、 P）的數(shù)目；IV為四價(jià)原子（如 C、 Si）的數(shù)目。O、 S等二價(jià)原子與不飽和度計(jì)算無關(guān)，故不予考慮。