【正文】 因為 LCMS主要提供分子量信息，為了增加結(jié)構(gòu)信息， LCMS大多采用具有串聯(lián)質(zhì)譜功能的質(zhì)量分析器 ,串聯(lián)方式很多，如 Q， QTOF等 。有些酸堿性并不明確的化合物，可優(yōu)先選用 APCI進行測定。 正離子模式適合于堿性樣品。另外不揮發(fā)的緩沖液(含磷、氯等 )不能使用。APCI不適合多電荷的大分子分析，它的優(yōu)勢在于非極性或中等極性的小分子的分析。 LC/MS分析條件選擇 : 1. 電離源選擇： ESI和 APCI在實際應用中表現(xiàn)出它們各自的優(yōu)勢和弱點。 前面介紹過的 ESI和 APCI電離是近些年才被發(fā)展和廣泛應用的 LC/MS接口技術(shù)。 其接口技術(shù)比起 GC/MS的連接要困難的多，其接口要完成 (1)將溶劑及樣品氣化； (2)去除大量溶劑分子 (3)對樣品分子的電離。高效液相色譜與一般的液相色譜相同，其作用是將混合物樣品分離后進入質(zhì)譜儀。 GC/MS適合于分析能氣化并且不分解的物質(zhì)。 GCMS的質(zhì)譜儀部分可以是磁式質(zhì)譜儀、四極質(zhì)譜儀，也可以是飛行時間質(zhì)譜儀和離子阱。采用大抽速的真空泵將二者直接相接。 Sample Sample 5890 DEG/MIN HEWLETT PACKARD HEWLETT PACKARD 5972A Mass Selective Detector D C B A A B C D Gas Chromatograph (GC) Mass Spectrometer Separation Identification B A C D A D B C MS 色譜部分和一般的色譜儀基本相同。 七．色譜 質(zhì)譜聯(lián)用 GC/MS氣相色譜 /質(zhì)譜聯(lián)用 利用氣相色譜毛細管柱對混合物樣品進行分離，然后用質(zhì)譜對氣相中的離子進行分析。對子離子激發(fā)、檢測，得子離子 (產(chǎn)物離子 )的質(zhì)譜。 FTICR/MS與離子阱時間上的串聯(lián)質(zhì)譜相似，選擇某離子后，采用兩次掃頻激發(fā)分別逐出質(zhì)荷比大的和質(zhì)荷比低的所有離子。因為質(zhì)量分析器就只有一個，并可以達到多極 (MSn)。 3)采用飛行時間質(zhì)譜計作為第二個質(zhì)量分析器 由于 TOF能同時檢測所有質(zhì)荷比的離子，因而靈敏度高，適合用作第二級質(zhì)量分析器。在每二個質(zhì)量分析器之間都有碰撞室。 2)混合式 (hybrid)串聯(lián)質(zhì)譜 用扇形電場質(zhì)量分析器 (E)、扇形磁場質(zhì)量分析器 (B)和其它質(zhì)量分析器，如用四級質(zhì)量分析器 (Q) 混合使用。這種串聯(lián)方式用得較多。這樣，就可以檢測出若干成對的離子，它們有共同的中性碎片的丟失。 (3)中性碎片丟失的掃描 — 即在兩個質(zhì)量分析器之間的碰撞室進行CID(源內(nèi)碰撞誘導分解 )。第二個質(zhì)量分析器設置為通過某一個質(zhì)荷比的離子。這種串聯(lián)質(zhì)譜可以完成三種掃描方式 (1)子離子掃描 — 第一級質(zhì)譜選擇出的某質(zhì)荷比的離子，通過碰撞室與惰性氣體 (He,Ar,)等分子發(fā)生碰撞誘導斷裂，生成若干產(chǎn)物離子，再第二個質(zhì)量分析器測定，得到產(chǎn)物離子的質(zhì)譜圖。 串聯(lián)質(zhì)譜可用 MS/MS表示，隨著串聯(lián)級數(shù)的增強可表示為 MSn, n：表示為串聯(lián)級數(shù)。尤其是 20世紀 80年代以后出現(xiàn)了很多軟電離技術(shù)，如 ESI、 APCI、 FAB、 MALDI等，基本上都只有準分子離子，沒有結(jié)構(gòu)信息，更需要串聯(lián)質(zhì)譜法得到結(jié)構(gòu)信息。這是早期的質(zhì)譜 質(zhì)譜串聯(lián)方式。研究亞穩(wěn)離子對搞清離子的母子關(guān)系，對進一步研究結(jié)構(gòu)十分有用。 六．串聯(lián)質(zhì)譜 (tandem MS) 為了得到更多的有關(guān)分子離子和碎片離子的結(jié)構(gòu)信息，早期的質(zhì)譜工作者把亞穩(wěn)離子作為一種研究對象。 在電暈放電電離的設計中，取樣微孔與電離反應區(qū)之間增加了層幕氣流，避免微孔堵塞，又能使簇合離子解簇。 大氣壓化學電離 (atmospheric pressure chemical ionization, APCI)的原理 溶液中的樣品流出毛細管時被氮氣流霧化到加熱管中被揮發(fā)，在加熱管端進行電暈 (Corona)尖端放電，電極的高壓使溶劑分子被電離，形成反應氣等離子體。 ESI是最軟的電離技術(shù)。而生物大分子則產(chǎn)生多種多電荷離子，在質(zhì)譜圖上得到多電荷離子的峰簇。所帶電荷的多少取決于所得的帶正電荷或負電荷的離子中酸性或堿性基團的體積和數(shù)量。隨著溶劑分子的蒸發(fā)，帶電液滴的半徑逐漸縮小，液滴表面的電荷密度逐漸增大。樣品溶液流出毛細管的瞬間，在加熱溫度，霧化氣 (N2)和強電場 (35kv)的作用下。這二種方式都可以獲得與分子離子有關(guān)的信息而得到化合物的分子量。 API包括了電噴霧電離 (Electrospray, ESI)和大氣壓化學電離 (Atmospheric Pressure Chemical Ionisation ,APCI)兩種。 適合分析蛋白 、 多肽 、 多聚糖等生物領(lǐng)域 。 常用的基質(zhì)有 2， 5二羥基苯甲酸 、 芥子酸等 。 用一定波長的脈沖式激光進行照射 。 它的方法是將被測物 (μ mol/L級的濃度 )的溶液和基質(zhì) (m mol/L級的濃度 )溶液混合 。 4．基質(zhì)輔助激光解析電離 (matrixassister laser desorptionionization, MALDI) MALDI源發(fā)展較晚，但在生物領(lǐng)域已發(fā)揮出它的重要作用。 FAB正逐漸被其它軟電離技術(shù)所替代。 FAB 源適合分析極性強、難氣化、不穩(wěn)定的化合物。把大量能量傳遞給樣品分子，電離產(chǎn)生的二次離子被引入質(zhì)量分析器中進行分析。 原子槍 樣品 MH+ Ar0/Cs+ 原子槍樣品FAB利用重的原子 Xe或 Ar，惰性氣體的原子先被電離，后被電位加速，使其有較大的動能。 3．快原子轟擊 (fast atom bombardment, FAB) FAB是 80年代初發(fā)展起來的一種軟電離技術(shù)。 M + CH5+ → MH + +CH4 M + C2H5+ → MH + + C2H4 由 CI產(chǎn)生的準分子離子過剩的能量小，故 CI屬于軟電離技術(shù)之一。 反應氣有甲烷、氨、異丁烷等。此時樣品分子與反應氣分子相比是極少的，并在一定能量的電子的作用下，反應氣分子被電離后因離子 分子反應產(chǎn)生一些活性反應離子，這些離子再與樣品分子發(fā)生離子 分子反應，使樣品分子實現(xiàn)電離。或者說主體部件是共用的。為了得到分子量可以采用 CI電離方式。 缺點： 對不穩(wěn)定化合物和不氣化的化合物，經(jīng)常得不到分子離子峰或得到豐度很低的分子離子峰。 EI電離還有個特點是質(zhì)譜圖重現(xiàn)性好，并有較多的碎片離子信息，對推測未知物結(jié)構(gòu)有幫助。 4．通過分子離子反應生成加合離子。 2．分子離子進一步發(fā)生化學鍵斷裂形成碎片離子。 分子離子繼續(xù)受到電子的轟擊，使一些化學鍵斷裂，或引起重排以瞬間速度裂解成多種碎片離子 (正離子 )。樣品汽化后在電離區(qū)與電子作用，一些分子獲得足夠能量后丟失一個電子形成正離子。在電離盒與燈絲之間加以電壓 (正端在電離盒上 )，這個電壓被稱為電離電壓。 EI源中使用的