【正文】 因?yàn)?LCMS主要提供分子量信息，為了增加結(jié)構(gòu)信息， LCMS大多采用具有串聯(lián)質(zhì)譜功能的質(zhì)量分析器 ,串聯(lián)方式很多，如 Q， QTOF等 。有些酸堿性并不明確的化合物，可優(yōu)先選用 APCI進(jìn)行測(cè)定。 ? 正離子模式適合于堿性樣品。另外不揮發(fā)的緩沖液 (含磷、氯等 )不能使用。APCI不適合多電荷的大分子分析，它的優(yōu)勢(shì)在于非極性或中等極性的小分子的分析。 LC/MS分析條件選擇 : 1. 電離源選擇： ? ESI和 APCI在實(shí)際應(yīng)用中表現(xiàn)出它們各自的優(yōu)勢(shì)和弱點(diǎn)。 ? 前面介紹過(guò)的 ESI和 APCI電離是近些年才被發(fā)展和廣泛應(yīng)用的 LC/MS接口技術(shù)。 ? 其接口技術(shù)比起 GC/MS的連接要困難的多，其接口要完成 (1)將溶劑及樣品氣化； (2)去除大量溶劑分子 (3)對(duì)樣品分子的電離。高效液相色譜與一般的液相色譜相同，其作用是將混合物樣品分離后進(jìn)入質(zhì)譜儀。 GC/MS適合于分析能氣化并且不分解的物質(zhì)。 GCMS的質(zhì)譜儀部分可以是磁式質(zhì)譜儀、四極質(zhì)譜儀，也可以是飛行時(shí)間質(zhì)譜儀和離子阱。采用大抽速的真空泵將二者直接相接。 Sample Sample 5890 DEG/MIN HEWLETT PACKARD HEWLETT PACKARD 5972A Mass Selective Detector D C B A A B C D Gas Chromatograph (GC) Mass Spectrometer Separation Identification B A C D A D B CMS ? 色譜部分和一般的色譜儀基本相同。 七．色譜 質(zhì)譜聯(lián)用 GC/MS氣相色譜 /質(zhì)譜聯(lián)用 ? 利用氣相色譜毛細(xì)管柱對(duì)混合物樣品進(jìn)行分離，然后用質(zhì)譜對(duì)氣相中的離子進(jìn)行分析。對(duì)子離子激發(fā)、檢測(cè)，得子離子 (產(chǎn)物離子 )的質(zhì)譜。 ? FTICR/MS與離子阱時(shí)間上的串聯(lián)質(zhì)譜相似，選擇某離子后，采用兩次掃頻激發(fā)分別逐出質(zhì)荷比大的和質(zhì)荷比低的所有離子。因?yàn)橘|(zhì)量分析器就只有一個(gè)，并可以達(dá)到多極 (MSn)。 3)采用飛行時(shí)間質(zhì)譜計(jì)作為第二個(gè)質(zhì)量分析器 ? 由于 TOF能同時(shí)檢測(cè)所有質(zhì)荷比的離子，因而靈敏度高，適合用作第二級(jí)質(zhì)量分析器。在每二個(gè)質(zhì)量分析器之間都有碰撞室。 ? 2)混合式 (hybrid)串聯(lián)質(zhì)譜 用扇形電場(chǎng)質(zhì)量分析器 (E)、扇形磁場(chǎng)質(zhì)量分析器 (B)和其它質(zhì)量分析器，如用四級(jí)質(zhì)量分析器 (Q) 混合使用。這種串聯(lián)方式用得較多。這樣，就可以檢測(cè)出若干成對(duì)的離子，它們有共同的中性碎片的丟失。 (3)中性碎片丟失的掃描 — 即在兩個(gè)質(zhì)量分析器之間的碰撞室進(jìn)行 CID(源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)分解 )。第二個(gè)質(zhì)量分析器設(shè)置為通過(guò)某一個(gè)質(zhì)荷比的離子。這種串聯(lián)質(zhì)譜可以完成三種掃描方式 (1)子離子掃描 — 第一級(jí)質(zhì)譜選擇出的某質(zhì)荷比的離子，通過(guò)碰撞室與惰性氣體 (He,Ar,)等分子發(fā)生碰撞誘導(dǎo)斷裂，生成若干產(chǎn)物離子，再第二個(gè)質(zhì)量分析器測(cè)定，得到產(chǎn)物離子的質(zhì)譜圖。 ? 串聯(lián)質(zhì)譜可用 MS/MS表示，隨著串聯(lián)級(jí)數(shù)的增強(qiáng)可表示為 MSn, n：表示為串聯(lián)級(jí)數(shù)。尤其是 20世紀(jì) 80年代以后出現(xiàn)了很多軟電離技術(shù)，如 ESI、 APCI、 FAB、MALDI等，基本上都只有準(zhǔn)分子離子，沒(méi)有結(jié)構(gòu)信息，更需要串聯(lián)質(zhì)譜法得到結(jié)構(gòu)信息。這是早期的質(zhì)譜 質(zhì)譜串聯(lián)方式。研究亞穩(wěn)離子對(duì)搞清離子的母子關(guān)系，對(duì)進(jìn)一步研究結(jié)構(gòu)十分有用。 六．串聯(lián)質(zhì)譜 (tandem MS) ? 為了得到更多的有關(guān)分子離子和碎片離子的結(jié)構(gòu)信息，早期的質(zhì)譜工作者把亞穩(wěn)離子作為一種研究對(duì)象。 ? 在 電暈放電電離 的設(shè)計(jì)中，取樣微孔與電離反應(yīng)區(qū)之間增加了層幕氣流，避免微孔堵塞，又能使簇合離子解簇。 ? 大氣壓化學(xué)電離 (atmospheric pressure chemical ionization, APCI)的原理 ? 溶液中的樣品流出毛細(xì)管時(shí)被氮?dú)饬黛F化，到加熱管中被揮發(fā)，在加熱管端進(jìn)行電暈 (Corona)尖端放電，電極的高壓使溶劑分子被電離，形成反應(yīng)氣等離子體。 ? ESI是最軟的電離技術(shù)。而生物大分子則產(chǎn)生多種多電荷離子，在質(zhì)譜圖上得到多電荷離子的峰簇。所帶電荷的多少取決于所得的帶正電荷或負(fù)電荷的離子中酸性或堿性基團(tuán)的體積和數(shù)量。隨著溶劑分子的蒸發(fā)，帶電液滴的半徑逐漸縮小，液滴表面的電荷密度逐漸增大。樣品溶液流出毛細(xì)管的瞬間，在加熱溫度，霧化氣 (N2)和強(qiáng)電場(chǎng) (35kv)的作用下。這二種方式都可以獲得與分子離子有關(guān)的信息而得到化合物的分子量。 ? API包括了電噴霧電離 (Electrospray, ESI)和大氣壓化學(xué)電離 (Atmospheric Pressure Chemical Ionisation ,APCI)兩種。 適合分析蛋白 、 多肽 、 多聚糖等生物領(lǐng)域 。 常用的基質(zhì)有 2， 5二羥基苯甲酸 、 芥子酸等 。 用一定波長(zhǎng)的脈沖式激光進(jìn)行照射 。 它的方法是將被測(cè)物 (μ mol/L級(jí)的濃度 )的溶液和基質(zhì) (m mol/L級(jí)的濃度 )溶液混合 。 4．基質(zhì)輔助激光解析電離 (matrixassister laser desorptionionization, MALDI) ? MALDI發(fā)展較晚，但在生物領(lǐng)域已發(fā)揮出它的重要作用。 ? FAB正逐漸被其它軟電離技術(shù)所替代。 ? FAB 源適合分析 極性強(qiáng)、難氣化、不穩(wěn)定的化合物 。把大量能量傳遞給樣品分子，電離產(chǎn)生的二次離子被引入質(zhì)量分析器中進(jìn)行分析。 原子槍 樣品 MH+ Ar0/Cs+ 原子槍樣品? FAB利用重的原子 Xe或 Ar，惰性氣體的原子先被電離，后被電位加速，使其有較大的動(dòng)能。 3．快原子轟擊 (fast atom bombardment, FAB) ? FAB是上個(gè)世紀(jì) 80年代初發(fā)展起來(lái)的一種軟電離技術(shù)。 M + CH5+ → MH + +CH4 M + C2H5+ → MH + + C2H4 ? 由 CI產(chǎn)生的準(zhǔn)分子離子過(guò)剩的能量小，故 CI屬于軟電離技術(shù)之一。 反應(yīng)氣有甲烷、氨、異丁烷等。此時(shí)樣品分子與反應(yīng)氣分子相比是極少的，并在一定能量的電子的作用下，反應(yīng)氣分子被電離后因離子 分子反應(yīng)產(chǎn)生一些活性反應(yīng)離子，這些離子再與樣品分子發(fā)生離子 分子反應(yīng)，使樣品分子實(shí)現(xiàn)電離?；蛘哒f(shuō)主體部件是共用的。為了得到分子量可以采用 CI電離方式。 缺點(diǎn)： 對(duì)不穩(wěn)定化合物和不氣化的化合物，經(jīng)常得不到分子離子峰或得到豐度很低的分子離子峰。 ? EI電離還有個(gè)特點(diǎn)是質(zhì)譜圖重現(xiàn)性好，并有較多的碎片離子信息，對(duì)推測(cè)未知物結(jié)構(gòu)有幫助。 4．通過(guò)分子離子反應(yīng)生成 加合離子 。 2．分子離子進(jìn)一步發(fā)生化學(xué)鍵斷裂形成 碎片離子。 ? 分子離子繼續(xù)受到電子的轟擊，使一些化學(xué)鍵斷裂，或引起重排以瞬間速度裂解成多種碎片離子 (正離子 )。樣品汽化后在電離區(qū)與電子作用，一些分子獲得足夠能量后丟失一個(gè)電子形成正離子。在電離盒與燈絲之間加以電壓 (正端在電