【正文】 點(diǎn)：傅里葉變換質(zhì)譜儀具有分辨率高 (可達(dá) 100萬(wàn)以上 )，靈敏度高 (可達(dá) pg量級(jí) )，掃描速度快和結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。在一定頻率范圍內(nèi)，只要有足夠長(zhǎng)的時(shí)間進(jìn)行采集，即可獲得高分辨的結(jié)果，不影響分辨率。 五、電離源 介紹五種不同的電離方式 EI(electron impact ionization) 是應(yīng)用最為廣泛的離子源，它主要用于揮發(fā)性樣品的電離。 (見(jiàn)圖 EI經(jīng)過(guò)示意圖 )。采用絲或帶的形狀，在高真空中被電流熾熱，發(fā)射出電子。電子在電離電壓的加速下經(jīng)過(guò)入口狹縫進(jìn)入電離區(qū)。在 EI狀態(tài)下，樣品分子約有 1/1000發(fā)生電離。 在電子轟擊下，樣品分子可能有四種不同途徑形成離子： 1．樣品分子被打掉一個(gè)電子形成分子離子。 3．分子離子發(fā)生結(jié)構(gòu)重排形成重排離子。 EI源的特點(diǎn)： 電離效率高，能量分散小，這保證了質(zhì)譜儀的高靈敏度和高分辨率。 EI標(biāo)準(zhǔn)譜庫(kù)，大多數(shù) EI質(zhì)譜圖集或數(shù)據(jù)庫(kù)收錄在 70eV下獲得的質(zhì)譜圖。 2．化學(xué)電離 (chemical ionization, CI) 有些化合物穩(wěn)定性差，用 EI方式不易得到分子離子 ,因而也就得不到分子量。 CI和 EI在結(jié)構(gòu)上沒(méi)有多大差別。其主要差別是 CI源工作過(guò)程中要引進(jìn)一種反應(yīng)氣體。 CI電離會(huì)產(chǎn)生多種準(zhǔn)分子離子。 以甲烷氣體為反應(yīng)氣產(chǎn)生下列反應(yīng) CH4 + e → CH 4+. + 2e CH4 +. + CH4 → CH 5+ + CH3. CH4+. → CH 3 + + H . CH3+ + CH4 → C 2H5+ + H2 優(yōu)勢(shì)反應(yīng)離子 CH3+ , C2H5+ 這兩個(gè)離子的共軛堿 CH4, C2H4 的低質(zhì)子親和力使其成為良好的質(zhì)子供給體。準(zhǔn)分子離子是偶電子離子，較 EI產(chǎn)生的 M+(奇電子離子 )穩(wěn)定，因?yàn)?CI沒(méi)有奇電子離子的諸多碎裂反應(yīng)，使得 CI譜的準(zhǔn)分子離子峰的強(qiáng)度高，便于識(shí)別。屬于二次離子質(zhì)譜，以高能量的初級(jí)離子轟擊，再對(duì)由此產(chǎn)生的二次離子進(jìn)行質(zhì)譜分析。在原子槍 (autom gun)內(nèi)進(jìn)行電荷交換反應(yīng)； Ar+(高動(dòng)能的 ) + Ar(熱運(yùn)動(dòng)的 ) → Ar (高動(dòng)能的 ) + Ar+(熱運(yùn)動(dòng)的 ) 低能量的離子被電場(chǎng)偏轉(zhuǎn)引出，高動(dòng)能的原子則對(duì)靶物進(jìn)行轟擊。 FAB屬于軟電離，通常產(chǎn)生 [M+H]+和加合離子峰。有時(shí)需加入一些金屬離子，比如 NaCl、 KCl等，這樣會(huì)出現(xiàn)加合離子峰，便于判別分子離子峰。因?yàn)?FAB污染離子源，實(shí)驗(yàn)復(fù)雜。 MALDI采用脈沖式的激光 ， 在一個(gè)很微小的區(qū)域里 ，以極短的時(shí)間間隔 (納秒級(jí) )， 打在靶物上 ， 避免樣品加熱分解 。 蒸發(fā)溶劑 ， 被測(cè)物質(zhì)與基質(zhì)成為晶體或半晶體 。 基質(zhì)分子能有效地吸收激光的能量 ， 使基質(zhì)分子和樣品投射到氣相并得到電離 。 MALDI特點(diǎn)：是碎片離子峰少 ， 有分子離子 、 準(zhǔn)分子離子及樣品分子聚積的多電荷離子 。 (Atmospheric Pressure Ionisation, API) API技術(shù)是當(dāng)今質(zhì)譜界最為活躍的領(lǐng)域，它的成功發(fā)展，擴(kuò)展了質(zhì)譜儀分析化合物的范圍，特別是在生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥物代謝等領(lǐng)域獲得日益廣泛的應(yīng)用。它們的共同點(diǎn)是樣品的離子化在處于大氣壓下的離子化室中完成，離子化效率高，大大增強(qiáng)了分析的靈敏度、穩(wěn)定性，它們是目前最軟的離子化技術(shù)。 電噴霧電離源（ Electro spray ionization, ESI)的原理： ESI技術(shù)電離過(guò)程是 “ 離子霧化 ” 。溶劑迅速霧化并產(chǎn)生高電荷液滴。當(dāng)電荷之間的排斥力足以克服表面張力時(shí)，離子向表面移動(dòng)并從表面蒸發(fā)，產(chǎn)生單電荷或多電荷離子。 通常小分子得到 [M+H]+、 [M+Na]+或 [MH]單電荷離子。因此質(zhì)量范圍只有幾千質(zhì)量數(shù)的質(zhì)譜儀能夠檢測(cè)質(zhì)量數(shù)幾萬(wàn)甚至十幾萬(wàn)的生物大分子如蛋白質(zhì)、寡核苷酸等。適合測(cè)定極不穩(wěn)定的極性化合物、如多糖、蛋白等。樣品分子在穿過(guò)等離子體時(shí)通過(guò)質(zhì)子轉(zhuǎn)移被電離形成 [M+H]+或 [MH]離子，并進(jìn)入質(zhì)譜儀。 APCI適合于弱極性小分子化合物。所謂亞穩(wěn)離子 (metastable ion)是指離子源出來(lái)的離子，由于自身不穩(wěn)定，前進(jìn)過(guò)程中發(fā)生了分解，丟掉一個(gè)中性碎片后生成的新離子，這個(gè)新的離子稱為亞穩(wěn)離子。由于亞穩(wěn)離子形成的幾率小，亞穩(wěn)峰太弱，檢測(cè)不容易，而且儀器操作也困難，因此，后來(lái)發(fā)展成在磁場(chǎng)和電場(chǎng)間加碰撞活化室，人為地使離子碎裂，設(shè)法檢測(cè)子離子，母離子，進(jìn)而得到結(jié)構(gòu)信息。 隨著儀器的發(fā)展，串聯(lián)的方式越來(lái)越多。因此，近年來(lái)，串聯(lián)質(zhì)譜法發(fā)展十分迅速。 串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)： 串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的用途 、化合物結(jié)構(gòu)鑒定等等 串聯(lián)質(zhì)譜分類： 1．空間上的串聯(lián) ： 兩個(gè)以上的質(zhì)量分析器聯(lián)合使用，兩個(gè)分析器間有一個(gè)碰撞活化室，目的是將前級(jí)質(zhì)譜儀選定的離子打碎，由后一級(jí)質(zhì)譜儀分析。 (2)母離子掃描 — 即由第一個(gè)質(zhì)量分析器在一個(gè)選擇的質(zhì)量范圍內(nèi)掃描，按離子質(zhì)荷比的順序，依次在碰撞室中進(jìn)行 CID(源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)分解 )。通過(guò)初始離子掃描，可以知道某一個(gè)選定質(zhì)荷比的離子是由哪些母離子產(chǎn)生的。兩個(gè)質(zhì)量分析器一起掃描，保持某一質(zhì)荷比的差值，第二個(gè)質(zhì)量分析器讓第一個(gè)質(zhì)量分析器選出的某一質(zhì)荷比的離子通過(guò)。 下面介紹三種串聯(lián)方式： 1).Q串聯(lián)即采用三個(gè)四極質(zhì)量分析器而以中間一個(gè)作為碰撞室，故表示為 Q或 QqQ,(其中q表示作為碰撞室 )?？赏瓿缮鲜龅?(1)、 (2)、 (3)三種操作模式的掃描，而且四級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜完成這三種掃描方式特別簡(jiǎn)單。在每一個(gè)分析器后面都有檢測(cè)器?？蛇M(jìn)行多極產(chǎn)物離子的掃描，并可進(jìn)行高、低能量的 CID，從而獲得較全面的離子碎裂的信息。 2．第二類：時(shí)間上的串聯(lián)質(zhì)譜 前面已介紹過(guò)的離子阱和 FTICR就是屬于這種串聯(lián)。 離子阱：選擇適當(dāng)?shù)?U、 V值，可選出某一個(gè)質(zhì)荷比的離子儲(chǔ)存在離子阱中，進(jìn)行 MSn 的測(cè)定。并用選定質(zhì)荷比離子的回旋頻率激發(fā)此種離子。 時(shí)間上的串聯(lián)質(zhì)譜只能完成子離子掃描，不能進(jìn)行母離子掃描和中性丟失掃描。 GCMS主要由三部分組成：色譜部分、質(zhì)譜部分和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。由于色譜是在常壓下操作，質(zhì)譜是在真空下操作?；旌衔锝?jīng)過(guò)毛細(xì)管分離后，在到達(dá)質(zhì)譜前載氣被抽走，樣品分子到達(dá)離子源被電離。離子源一般用 EI方式較多。 2． LC/MS液相色譜 /質(zhì)譜聯(lián)用 LCMS聯(lián)用儀主要由高效液相色譜，接口裝置（同時(shí)也是電離源），質(zhì)譜儀組成。 LC/MS用高效液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用的大大擴(kuò)展了質(zhì)譜儀的應(yīng)用范圍。 (4)能進(jìn)行 CID。各制造廠商有各自的接口，有 Z字型的、有斜噴的、還有垂直可調(diào)的類型較多。 ESI適合于中等極性到強(qiáng)極性的化合物分子。 2. 選擇適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相 : 這對(duì)儀器靈敏度影響較大。 流動(dòng)相的含水比例不宜過(guò)高，否則降低離子化效率。負(fù)離子模式適合于酸性樣品。 作為 LCMS聯(lián)用儀的質(zhì)量分析器種類很多，最常用的是四極桿分析器（簡(jiǎn)寫(xiě)為 Q），其次是離子阱分析器（ Trap）和飛行時(shí)間分析器（ TOF）